Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Регенерация тканей и хитозан
.pdf
а
б
Рис. 1. Цитологическая картина раневого экссудата через 6 часов
после нанесения ран: а – контроль; б – хитозан.
Окраска по Романовскому. 1200×
41
нейтрофильных лейкоцитов по сравнению с животными первой серии. Нейтрофилы обнаруживаются в раневом отделяемом
большими скоплениями, имеют нормальную структуру с хорошо окрашенными и четко разделенными на 6–7-сегментов ядрами. Фагоцитарная активность нейтрофильных лейкоцитов
ярко выражена, о чем свидетельствует наличие завершенного
фагоцитоза, когда большая часть микроорганизмов находится
внутриклеточно.
Обращает на себя внимание раннее появление в экссудате
у крыс второй серии зрелых форм макрофагов. Они имеют крупные ядра округлой или бобовидной формы (29,8 ± 5,6 мкм) с небольшим слоем цитоплазмы вокруг них. Об активной фагоцитарной функции клеток свидетельствуют наличие в их цитоплазме
пищеварительных вакуолей с поглощенным материалом внутри
и структурированные ядра округлой или неправильной формы.
Через 12 часов после операции в отпечатках у животных контрольной серии происходит увеличение количества нейтрофилов
по сравнению с предыдущим сроком (табл. 2). Единичные макрофаги имеют небольшие размеры (20,4 ± 2,8 мкм), неправильной
формы ядро, в цитоплазме обнаруживаются вакуоли (рис. 2а).
Таблица 2
Количество (в 10 полях зрения) и диаметр (мкм) клеток
раневого экссудата через 12 часов после операции
Серии М ± m
Контроль
Хитозан
Примечание. * – р < 0,05.
M
m
M
m
Нейтрофилы Макрофаги
Количество Диаметр Количество Диаметр
299,7
17,4
354,6*
18,3
20,2
4,2
35,2*
5,8
3,1
0,6
15,2*
2,2
20,4
2,8
30,2*
3,8
В мазках-отпечатках, взятых через 12 часов после операции,
у животных, находившихся в условиях применения хитозана,
продолжается выход нейтрофилов в очаг повреждения, их ко-
42
а
б
Рис. 2. Цитологическая картина раневого экссудата через 12 часов
после нанесения ран: а – контроль; б – хитозан.
Окраска по Романовскому. 1200×
43
личество в 1,4 раза увеличилось по сравнению с предыдущим
сроком (табл. 2). Подавляющее большинство нейтрофилов находится в состоянии физиологической дегенерации. Ядра клеток
становятся гомогенными, отдельные сегменты округляются и утрачивают связь друг с другом, приобретая форму глыбок. В некоторых лейкоцитах ядерные сегменты сливаются, а цитоплазма
плохо прокрашивается. Одновременно в экссудате сохраняются
лейкоциты, имеющие нормальную структуру с сегментированным ядром.
Через 12 часов после операции у крыс более отчетливо проявляется реакция со стороны макрофагов. Их количество увеличивается до 15,2 ± 2,2 клетки в 10 полях зрения против 3,1 ±
0,6 в контроле. По сравнению с предыдущим сроком количество
макрофагов увеличилось в 2,1 раза, а размер превышал соответствующий показатель в контроле в 1,2 раза. Это самые крупные
клетки раневого экссудата (30,2 ± 3,8 мкм). Наличие разрыхленных ядер и вакуолизированной цитоплазмы подтверждают высокую фагоцитарную активность макрофагов (рис. 2б). Наряду
со зрелыми встречаются молодые формы макрофагов типичной
структуры, активно фагоцитирующие, и имеющие светлое ядро
и мелкоячеистые вакуоли в цитоплазме.
Следующее изучение клеточного состава раневого отделяемого проводилось через 24 часа после нанесения повреждения.
В мазках-отпечатках, полученных с поверхности раны
у животных контрольной серии, в этот срок нейтрофильные
лейкоциты по-прежнему остаются основными клеточными
элементами (табл. 3). Среди них увеличивается количество дегенеративно измененных форм, что проявляется в набухании
и гомогенизации, пикнозе и разрушении ядер с образованием
отдельных сегментов. В некоторых полях зрения встречаются
единичные нейтрофилы с нормальной структурой ядер, а их
цитоплазма окрашивается нечетко (рис. 3а). В раневом отделяемом появляются единичные макрофаги (4,99 ± 2,6 клеток
в 10 полях зрения), одновременно увеличиваются их размеры
(34,8 ± 14,4 мкм).
44
Таблица 3
Количество (в 10 полях зрения) и диаметр (мкм) клеток
раневого экссудата через 24 часа после операции
Серии М ± m
Контроль
Хитозан
Примечание. * – р < 0,05.
M
m
M
m
Нейтрофилы Макрофаги
Количество Диаметр Количество Диаметр
421,1
13,2
306,6*
16,6
21,8
10,2
24,7
6,7
4,9
2,6
24,2*
5,2
34,8
14,4
28,7
12,7
Изучение цитологической картины раневого экссудата в этот
срок у животных, на раны которым применялся хитозан, выявило существенные различия между сравниваемыми группами животных. Количество нейтрофильных лейкоцитов резко
уменьшилось по сравнению с контролем и предыдущим сроком,
напротив, количество макрофагов в 4,9 раза больше, чем в контроле. Наряду с типичными макрофагами встречаются клетки
с активно выраженной фагоцитарной функцией. Об этом свидетельствует слияние вакуолей, которые приобретают вид ажурного слабо окрашиваемого кружева (рис. 3б).
Таким образом, изучение цитологической картины раневого
экссудата у животных, находившихся в условиях применения
хитозана, показало, что процесс воспаления значительно ускоряется, но проходит все характерные для него фазы. В этих условиях наблюдаются существенные изменения количественной
и качественной характеристик раневого отделяемого. Это проявляется в значительном увеличении общего количества выселившихся в область повреждения нейтрофильных лейкоцитов
на ранних сроках наблюдения, одновременном ускорении миграции и трансформации клеточных элементов. Выраженная лейкоцитарная реакция определяет в дальнейшем высокую активность
макрофагической фазы воспаления. Последняя проявляется
в раннем появлении макрофагов крупных размеров и их ускоренном накоплении в составе экссудата. Скопление их в очаге
45
а
б
Рис. 3. Цитологическая картина раневого экссудата через 24 часа
после нанесения ран: а – контроль; б – хитозан.
Окраска по Романовскому. 1200×
46
повреждения обусловлено тем, что нейтрофильные лейкоциты
300
выделяют комплекс биологически активных веществ, которые
создают благоприятные условия для хемотаксиса, дифференцировки и усиления функциональной активности макрофагов.
3.3. Морфологические изменения и характеристика
регенерирующих структур полнослойных ран кожи
при воздействии хитозаном
Настоящий раздел посвящен результатам изучения микроскопических изменений при заживлении полнослойных ран кожи
у животных в условиях применения хитозана. Скорость заживления ран изучалась путем ежедневного измерения площади
раневой поверхности (табл. 4). Динамика изменений площади
ран в ходе эксперимента представлена на графике (рис. 4).
При макроскопическом исследовании новообразованных тканей в процессе заживления ран отмечены некоторые отличия
общего состояния и поведения животных сравниваемых групп.
Характерной особенностью поведенческих реакций крыс, получавших воздействие хитозана, является усиление двигательной
активности и увеличение объема потребляемой пищи.
)
2
250
200
150
100
50
Площадь ран (в мм
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
Сроки заживления (в днях)
Рис. 4. Площадь ран (мм 2) на последовательных этапах заживления
Контроль
Хитозан
47
Таблица 4
Площадь ран на последовательных этапах заживления (мм
2
)
Дни
1 237,8 20,8 241,2 17,8
2 240,2 27,8 217,1 13,2
3 207,4 25,1 182,9 8,6
4 193,5 23,2 170,1 8,1
5 145,1 20,1 132,3* 7,4
6 121,8 16,6 93,3* 6,2
7 110,9 16,8 65,5* 5,3
8 87,7 10,8 54,6* 5,3
9 75,9 5,4 38,6* 1,6
10 68,1 3,3 27,2* 1,2
11 53,5 6,3 11,2* 4,7
12 36,8 6,1 0 0
13 26,6 8,1 0
14 15,5 2,1 0
15 11,4 3,1 0
Примечание. * – р < 0,05.
Контроль (М ± m) Хитозан (М ± m)
Серия
При визуальном наблюдении было выявлено, что у животных контрольной серии в первые сутки после операции раневая
поверхность влажная за счет выделения серозного отделяемого. На вторые сутки поверхность раны подсыхает, покрывается
тонкой корочкой красновато-коричневого цвета и постепенно
область дефекта заполняется некротическими массами, формирующими струп. Он имеет небольшую толщину и недостаточно
плотно спаян с подлежащими тканями. Края раны гиперемированы и немного возвышаются над поверхностью интактной
кожи. Визуально наблюдаемые воспалительные явления в области раневого дефекта уменьшаются через 5 дней и под струпом располагаются мелкозернистые грануляции розового цвета,
ограниченные тонкой полоской молодого эпителия. Струп имеет
48
максимальную толщину и возвышается над прилежащими участками кожи. У некоторых животных в этот период сохраняются
небольшая отечность краев раны и явления воспаления. Через
10 дней после операции остается небольшой участок открытой
раневой поверхности. Рану покрывает тонкий струп, спаянный
с подлежащими тканями лишь в центре раневого дефекта. У некоторых животных к этому сроку струп отпадает и под ним обнаруживается хорошо сформированная молодая ткань, которая
по краям покрыта новообразованным эпителием.
Макроскопическое изучение области дефекта у животных,
получавших хитозан, выявило существенные отличия от контроля. Воспалительная реакция в области повреждения выражена значительно слабее. На поверхности раны только в первые
часы наблюдается небольшое количество серозного отделяемого,
а к концу первых суток чистая и сухая рана покрыта тонкой корочкой. Формирующийся струп ровный, гладкий, плотно прилегает к раневой поверхности. Через 2–3 дня у животных данной
серии отмечается бурное развитие грануляционной ткани яркорозового цвета, заполняющей весь дефект. Через 5 дней по краю
раны отчетливо заметна полоска молодого эпителия. За 10 дней
у опытных животных эпителизация почти полностью завершается, а через 11–12 дней на месте раневого дефекта образуется
нежный, Х-образной формы рубец.
Данные визуальных наблюдений находятся в соответствии
с микроскопическими изменениями, происходящими в области
дефекта.
Через 5 дней после нанесения повреждений у крыс контрольной серии поверхность ран покрыта широким, плотным струпом,
в составе которого четко различимы два компонента: выпот плазмы и слой некротизированных клеток (рис. 5а).
Мощный лейкоцитарный вал располагается по всей поверхности раневого дефекта. В его составе четко выделяются две
группы клеток, отличающихся физиологическими особенностями. У поверхности лейкоцитарного вала клетки различны
по форме, их ядра пикнотичны и гиперхромны. Клеточные эле-
49
а
б
Рис. 5. Микроскопическая картина структур регенерата в центре
повреждения через 5 дней после операции: а – контроль; б – хитозан.
Гематоксилин-эозин. 120×
50
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]