Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний. Учебное пособие
.pdf
федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего образования «Самарский государственный медицинский университет»
Министерства здравоохранения Российской Федерации
С.Д. Колпакова
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ
В ДИАГНОСТИКЕ
ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
Учебное пособие
Москва
Ай Пи Ар Медиа
2025
УДК 57.083
ББК 55.14
К61
Автор:
Колпакова С.Д. — д-р мед. наук, проф. кафедры
медицинской микробиологии и иммунологии СамГМУ Минздрава России
Рецензенты:
Суздальцев А.А. — д-р мед. наук, проф. кафедры инфекционных болезней
с эпидемиологией СамГМУ Минздрава России,
заслуженный работник здравоохранения Самарской области;
Гусякова О.А. — д-р мед. наук, доц., зав. кафедрой фундаментальной
и клинической биохимии с лабораторной диагностикой
СамГМУ Минздрава России
Колпакова, Светлана Дмитриевна.
К61 Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний : учебное по-
собие / С.Д. Колпакова ; Самарский государственный медицинский университет. —
Москва : Ай Пи Ар Медиа, 2025. — 51 с. — Текст : электронный.
ISBN 978-5-4497-4801-0
Учебное пособие является частью курса «Иммунология» и предназначено для со-
вершенствования знаний о сущности, назначении, направлениях, способах постановки
и учета серологических реакций. Материал изложен последовательно, в простой и доступной форме для понимания студентами соответствующего курса. В издании также
представлены контрольные вопросы и задачи для более детального изучения сущно-
сти изучаемых явлений.
Учебное пособие подготовлено в соответствии с требованиями действующих Фе-
деральных государственных образовательных стандартов высшего образования спе-
циалитета по специальностям: «Лечебное дело» и рабочей программы дисциплины
«Микробиология, вирусология»; «Педиатрия» и рабочей программы «Микробиология»; «Стоматология» и рабочей программы дисциплины «Микробиология, вирусология, микробиология полости рта», утвержденных ЦКМС ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, и предназначено для студентов медицинских вузов.
Учебное электронное издание
Утверждено ЦКМС ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России
(протокол № 8 от 15.05.2024 г.)
ISBN 978-5-4497-4801-0 © Колпакова С.Д., 2025
© ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава России, 2025
© ООО Компания «Ай Пи Ар Медиа», 2025
Учебное издание
Колпакова Светлана Дмитриевна
Редактор М.В. Леман
Технический редактор, компьютерная верстка А.В. Нилова
Корректор М.В. Сигарева
Обложка Я.А. Кирсанов, С.С. Сизиумова, фотобанк Freepik
Подписано к использованию 19.09.2025. Объем данных 7 Мб.
ООО Компания «Ай Пи Ар Медиа»
8 800 555 22 35 (бесплатный звонок по России)
E-mail: sales@iprmedia.ru
4
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ ............................................................................................................. 5
ОСНОВНЫЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ
ИММУННОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА......................................................... 7
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛАССОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ ......... 10
ИММУНОДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ.......... 12
Реакция агглютинации (РА) .............................................................................. 14
Реакция преципитации (РП) ............................................................................. 20
Реакция флокуляции (РФ) ................................................................................. 23
Реакция Кумбса ................................................................................................. 27
Реакция нейтрализации (РН) ............................................................................ 29
Реакция торможения или задержки гемагглютинации (РТГА или РЗГА) ..... 31
Опсонофагоцитарная реакция (ОФР) ................................ ............................... 32
Реакция непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА) ...... 34
Серологические реакции иммунитета,
основанные на связывании комплемента ......................................................... 36
Реакция связывания комплемента (РСК) ......................................................... 39
Реакции, основанные на применении меченых антигенов и антител ............ 43
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ ............................................................... 46
ЗАДАЧИ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ ................................................................... 48
РЕКОМЕНДУЕМАЯ УЧЕБНАЯ ЛИТЕРАТУРА ........................................... 51
5
ВВЕДЕНИЕ
Учебное пособие по проблемам медицинской микробиологии,
изучаемым в курсе инфекционных заболеваний и в курсе иммуноло-
гии, призвано помочь студентам глубже изучить вопросы иммуноди-
агностики инфекционных заболеваний, познакомиться с методами
оценки иммунного статуса организма, а также с техникой постановки
серологических реакций.
Учебное пособие содержит описание 17 иммунологических ре-
акций (для оценки иммунного статуса организма, определения клас-
сов иммуноглобулинов, иммунодиагностики инфекционных заболе-
ваний), в котором изложены механизмы, сущность, назначение,
направления, способы постановки и учета серологических реакций.
В конце учебного пособия представлен перечень контрольных вопро-
сов и задач для более детального усвоения и закрепления знаний по
серодиагностике инфекционных заболеваний.
Изучение материала учебного пособия направлено на формиро-
вание следующих общепрофессиональных и профессиональных ком-
петенций:
способен применять медицинские изделия, предусмотренные
порядком оказания медицинской помощи, а также проводить обследование пациента с целю установления диагноза (ОПК-4);
способен оценивать морфофункциональные, физиологиче-
ские состояния и патологические процессы в организме человека для
решения профессиональных задач (ОПК-5);
способен назначать лечение и осуществлять контроль его
эффективности и безопасности (ОПК-7).
Взаимодействие патогенного микроба с макроорганизмом пред-
ставляет собой довольно сложный процесс. При проникновении
в макроорганизм болезнетворный микроб, с одной стороны, выступает
6
как причина инфекционной болезни, с другой — как пусковой фактор
ответной защитной реакции организма. Защитная реакция организма —
это его способность определенным образом отвечать на неблагопри-
ятные воздействия окружающей среды, в том числе на воздействие
патогенного микроба. В основе ее лежит реактивность организма, ко-
торая включает такие понятия, как неспецифическая реактивность
и иммунологическая реактивность.
Неспецифическая реактивность организма складывается из:
1 — местной тканевой защиты;
2 — клеточной защиты (фагоцитоз);
3 — гуморальных факторов защиты;
4 — общих защитных реакций на организменном уровне.
Функцией иммунной системы является распознавание генетиче-
ски чужеродных субстанций (антигенов) и специфическое реагирова-
ние на них. Основная ее цель — специфическая блокада, нейтрали-
зация, разрушение именно тех субстанций, которые стимулировали
иммунный ответ. Понятие «иммунный ответ» наиболее распространенный синоним понятия «иммунологическая реактивность». Оба
они предполагают именно специфические реакции на антигены.
Учебное пособие подготовлено в соответствии с требованиями
действующих федеральных государственных образовательных стан-
дартов высшего образования специалитета по специальностям:
31.05.01 «Лечебное дело» и рабочей программы дисциплины «Микробиология, вирусология»; 31.05.02 «Педиатрия» и рабочей программы «Микробиология»; 31.05.03 «Стоматология» и рабочей програм-
мы дисциплины «Микробиология, вирусология, микробиология по-
лости рта», утвержденных ЦКМС ФГБОУ ВО СамГМУ Минздрава
России.
7
ОСНОВНЫЕ ТЕСТЫ ДЛЯ ОЦЕНКИ
ИММУННОГО СТАТУСА ОРГАНИЗМА
Функционирование иммунной системы, как и любой другой,
может нарушиться. О состоянии иммунной системы можно судить на
основании дифференцированной оценки Т- и В-систем иммунитета.
Для этого разработаны и внедрены в клиническую практику различ-
ные иммунологические тесты.
Оценка клеточного иммунитета (Т-системы) включает опреде-
ление: 1 — количества T — лимфоцитов в сыворотке крови методом
спонтанного розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана
(E-розетки); 2 — функциональной активности Т-лимфоцитов в реак-
ции бласттрансформации лимфоцитов под влиянием митогенов или
антигенов; 3 — уровня продукции лимфоцитами гуморальных медиаторов клеточного иммунитета (лимфокинов) в тестах подавления миграции лейкоцитов.
Метод спонтанного розеткообразования (тест Е-розеток) основан на способности T-лимфоцитов человека спонтанно присоединять
эритроциты барана. Для определения количества Т-лимфоцитов в 1 мкл
крови, полученных из этого объема крови, лимфоциты смешивают
с эритроцитами барана и инкубируют. По истечении некоторого време-
ни смесь исследуют в счетной камере Гаряева или в мазках по Романовскому. И в том, и в другом случае подсчитывают количество розеток, приходящихся на 100 лимфоцитов. Розетки представляют собой
лимфоциты, окруженные не менее, чем тремя эритроцитами. Количе-
ство Е-розеток отражает долю Т-клеток в исследуемой популяции
лимфоцитов. В норме количество лимфоцитов в периферической
крови, рассчитанное по этой методике, составляет 55–60 %.
Увеличение количества T-лимфоцитов указывает на выражен-
ность клеточных реакций, которые встречаются у детей в норме, при
8
гиперчувствительности замедленного типа, опухолевых процессах, пе-
реливании крови, трансплантации органов. Снижение Т-лимфоцитов
в периферической крови встречается, например, в ходе инфекционного
заболевания за счет оседания их в органах и тканях или же является результатом генетического дефекта.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) — ставится
таким образом, что к взвеси лимфоцитов в питательном растворе добав-
ляется в разных дозах неспецифический митоген — вещество, стимулирующее бласттрансформацию. В качестве митогена используется либо
фитогемагглютинин (ФГА) или конканавалин (КонА), избирательно
стимулирующие Т-клетки, либо бактериальный липополисахарид
(ЛПС), избирательно стимулирующий В-клетки. На специфические
антигены в РБТЛ реагируют лишь лимфоциты, предварительно к ним
сенсибилизированные.
Оценка РБТЛ проводится в динамике микроскопическим и ра-
диометрическим методами. При микроскопии учитывают морфоло-
гические изменения лимфоцитов. При этом лимфоциты превращают-
ся в крупные пиронинофильные клетки с разрыхленным ядром и ба-
зофильной цитоплазмой типа бластов. Они способны к синтезу ДНК
и делению. Радиометрическая оценка результатов реакции проводит-
ся по включению меченых предшественников синтеза ДНК, РНК или
белка в культуре лимфоцитов. Угнетение РБТЛ свидетельствует
о снижении функциональной активности лимфоцитов.
Реакция подавления миграции лейкоцитов (РПМЛ) основана на
способности гранулоцитов и моноцитов крови, а также макрофагов
к свободной миграции, которая тормозится под действием лимфокина.
Миграцию лейкоцитов и ее торможение под действием лимфокинов
изучают в специальных капиллярах или в стекле под слоем агарозы.
Результаты торможения миграции изучают по ограничению зоны
распространения в сравнении с контролем.
9
Оценка гуморального иммунитета (В-системы) включает количественное определение В-лимфоцитов в сыворотке крови с помо-
щью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана,
предварительно обработанными иммунной сывороткой (содержит ан-
титела к эритроцитам барана) и комплиментом. Функциональная ак-
тивность В-лимфоцитов оценивается косвенно по уровню сывороточных иммуноглобулинов различных классов — IgG, IgM, IgA, IgE.
Метод EAC-розеток с эритроцитами барана, сенсибилизиро-
ванными антителами и комплементом.
Тест EAC-розеток (E-эритроциты, А-антитела, С-комплимент)
основан на наличии у В-лимфоцитов рецепторов к комплименту. Эту
реакцию ставят аналогично реакции E-розеток, но эритроциты пред-
варительно смешивают с иммунной сывороткой и комплиментом
(сыворотка крови морской свинки). Количество EAC-розеток отражает долю В-клеток в исследуемой популяции лимфоцитов. В норме
количество В-лимфоцитов, рассчитанное по этой методике, составляет 20–30 %.
Количество B-лимфоцитов в периферической крови увеличива-
ется в старческом возрасте, при аллергии немедленного типа и при
антигенном раздражении в период активной выработки антител.
Уменьшение количества В-лимфоцитов наблюдается при слабых ан-
тигенных свойствах раздражителя либо является результатом генети-
ческого дефекта, недостаточности макрофагальной системы.
10
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛАССОВ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
Иммуноглобулины М, G, А определяют реакцией преципитации
в геле по Манчини с использованием специфических антиглобулино-
вых сывороток против каждого класса иммуноглобулинов.
Реакция иммунопреципитации в геле по Манчини ставится сле-
дующим образом: антиглобулиновую сыворотку М или G, или А
смешивают с 1,5 % агаром и смесь золя наносят на чашку Петри. По-
сле застывания в агаре вырезают лунки и заполняют их исследуемой
сывороткой. Иммуноглобулины испытуемой сыворотки диффунди-
руют в агар и вступают в специфическую связь с антителами анти-
глобулиновой сыворотки, образуя на месте взаимодействия преципи-
тат (помутнение среды) в виде кольца.
Радиоиммунным анализом (РНА) определяют IgЕ. Для этой цели
используют полихлорвиниловые лунки, которые заполняют исследу-
емой сывороткой. Иммуноглобулины этой сыворотки, выступающие
в роли антигена, прилипают к стенкам лунки. Через 12 ч вторым слоем
в лунки наносят антиглобулиновую сыворотку Е, меченную радиоак-
тивным йодом I
131
. Затем лунки промывают и считают радиоактивность.
По степени радиоактивности судят о количестве радиоактивности.
По степени радиоактивности судят о количестве иммуноглобулинов.
Иммуноферментный анализ (ИФА). Данная реакция основана на
взаимодействии специфических антител антиглобулиновой сыворот-
ки, которые несут на себе ферментную метку — пероксидазу хрена,
с глобулинами исследуемой сыворотки. В результате этого взаимодействия образуется иммуноэнзимный комплекс антиген-антитело, выявляемый цветной реакцией при добавлении соответствующего субстрата.
Количество иммуноглобулинов в сыворотке крови может ме-
няться при различных состояниях: увеличение IgM свидетельствует
о первичном иммунном ответе. Уменьшение встречается либо при
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]