Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Серологические реакции в диагностике инфекционных заболеваний. Учебное пособие
.pdf
41
АГ по гемолитической системе. Для этого ставится реакция с последовательно уменьшающимися дозами АГ, рабочей дозой комплемента
и гемолитической системой. Титром АГ считается его наибольшая доза,
при которой наступает отчетливый гемолиз эритроцитов барана (следо-
вательно, антикомплементарное действие отсутствует). Для реакции бе-
рут дозу АГ равную половине титра (во избежание антикомплементар-
ного действия). Исследуемая сыворотка (при серодиагностике) перед
опытом инактивируется с целью разрушения собственного комплемента.
Инактивация сыворотки проводится при 56 °C в течение 30 мин. В реакцию сыворотка берется в разведении 1:5.
Иммунная сыворотка (при сероидентификации) получается пу-
тем гипериммунизации кроликов убитой микробной клеткой извест-
ного вида. Перед опытом производится титрование сыворотки по ге-
молитической системе. Титром иммунной сыворотки считается максимальное ее разведение, при котором отмечается задержка гемолиза
эритроцитов барана.
Комплемент, как препарат, представляет собой свежевысушенную
сыворотку крови морской свинки. Перед опытом комплемент титруется
по гемолитической системе для определения его так называемой рабочей дозы. Титром комплемента называется его минимальное количе-
ство, при котором еще происходит полный гемолиз эритроцитов барана.
Для постановки реакции берут рабочую дозу комплемента, которая на
25–30 % выше титра. Увеличение дозы комплемента необходимо пото-
му, что в реакции активность комплемента может сказаться несколько
подавленной другими ингредиентами реакции (АГ, сыворотка).
Гемологическая сыворотка готовится заранее в производственных институтах путем гипериммунизации кроликов 50 % взвесью ба-
раньих эритроцитов. Полученную сыворотку инактивируют нагрева-
нием при 56 °С и перед употреблением титруют. Титр гемолитиче-
ской сыворотки — максимальное разведение, которое обеспечивает
42
полный лизис 3 % взвеси эритроцитов в присутствии комплемента
при 37 °С в течение часа. Для РСК в качестве рабочей зоны гемолитическую сыворотку берут в тройном титре.
Эритроциты барана получают из стерильно взятой дефибрини-
рованной крови. Эритроциты отмывают изотоническим раствором
хлорида натрия до полной прозрачности надосадочной жидкости. Для
РСК применяют 3 % взвесь эритроцитов в изотоническом растворе.
Методика постановки РСК
РСК проводится в виде двух фаз, каждая из которых самостоятель-
ная иммунологическая реакция, требующая определенных постоянных
условий для своего проявления. Стандартная схема постановки РСК
предусматривает проведение каждой из фаз в течение 30 мин при 37 °С
в термостате. Реакция ставится в общем объеме 2,5 мл Простейшей схемой постановки РСК является следующая (табл. 6). В данном примере
опытной является только первая пробирка, вторая и третья служат кон-
тролем, так как в них не могло произойти связывания комплемента:
в одной из них отсутствует АГ (контроль комплемента), а другой — сыворотка больного (контроль гемолитической системы).
Таблица 6
Постановка РСК с целью серодиагностики
Ингредиенты, мл
Номер пробирки
1 2 3
Сыворотка больного
0,5
0,5
–
Антиген
0,5
–
0,5
Комплемент
0,5
0,5
0,5
Физиологический раствор
–
0,5
0,5
Инкубация при 37 °С в течение 30 мин
43
Окончание табл. 6
Ингредиенты, мл
Номер пробирки
1 2 3
Гемолитическая система
1,0
1,0
1,0
Инкубация при 37 °С в течение 30 мин
Результаты
Выводы:
Результаты РСК учитываются по первой пробирке: реакцию
считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жид-
кость в пробирке бесцветная и эритроциты оседают на дно в виде ком-
пактного осадка (пуговки); отрицательной — при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена («лаковая кровь»).
Степень интенсивности реакции оценивается по следующей схеме:
++++ — полная задержка гемолиза (значительный осадок эрит-
роцитов на дне пробирки в виде компактной «пуговки» и абсолютно
прозрачная жидкость над осадком);
+++ — ясная задержка гемолиза (жидкость слабо окрашена, до-
вольно розового цвета, значительный осадок эритроцитов на дне про-
бирки);
++ — частичная задержка гемолиза (жидкость интенсивно
окрашена, довольно компактный осадок эритроцитов);
+ — слабая задержка гемолиза (жидкость интенсивно окрашена,
незначительный осадок эритроцитов).
РЕАКЦИИ, ОСНОВАННЫЕ НА ПРИМЕНЕНИИ
МЕЧЕНЫХ АНТИГЕНОВ И АНТИТЕЛ
Иммунолюминесцентный метод широко применяется в иммуноло-
гической практике для обнаружения бактерий и вирусов в инфициро-
ванных материалах, а также для серодиагностики многих инфекционных
44
заболеваний. Этот метод является методом экспресс-диагностики, не
уступая другим серологическим методам по чувствительности и спе-
цифичности. Различают прямой и непрямой методы.
Прямой иммунолюминесцентный метод применяется с целью
сероиндикации возбудителя. От больного берется исследуемый мате-
риал, в составе которого находится предполагаемый возбудитель,
и готовится из него мазок на предметном стекле. Мазок обрабатыва-
ется иммунной люминесцирующей сывороткой (АТ этой сыворотки
мечены флюорохромами — красителями, дающими свечение в люми-
несцентном микроскопе). Люминесцирующие АТ, связавшись с мик-
робным АГ, образуют комплексы, которые регистрируются в люминес-
центном микроскопе в виде светящихся частиц.
Непрямой иммунолюминесцентный метод применяется с целью
серодиагностики инфекционных заболеваний. В качестве исследуе-
мого материала от больного берется сыворотка крови (АТ), которой
обрабатывается мазок, подготовленный из диагностикума (известный
АГ). При наличии специфических АТ в сыворотке больного образу-
ется комплекс АГ+АТ. Поверх образовавшегося комплекса наслаи-
ваются люминесцирующая сыворотка против глобулина человека,
реагирующая со специфическими АТ сыворотки больного, которые
при этом играют роль АГ. Таким образом, на образовавшихся ком-
плексах фиксируются люминесцирующие АТ против глобулинов че-
ловека, делая их светящимися при люминесцентной микроскопии.
45
Серодиагностика инфекционных заболеваний
Сероидентификация
Сероиндикация
Серодиагностика
От больного исследуемый
материал в виде чистой
культуры возбудителя
Обнаружение
возбудителя
в исследуемом
материале
Обнаружение наличия
и количества антител
в сыворотке больного
АГ на по-
верхности
РА
АГ внутри
кл., разруш.
кл., гаптен
РП, РСК
РН
РП
РИФ
РИА
ИФА
Много АТ
РПГА, РП,
РА, РФ,
РСК, РИФ,
РИА, ИФА,
РН
Мало АТ
РСК, РН,
РИФ, РИА,
ИФА
АГ токсин
РФ, РН
АГ капсид
вируса
РСК, РТГА,
РН
Неполные АТ
РИФ, ИФА, РИА,
Р. Кумбса
46
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Какие реакции называются серологическими, и для чего они
применяются?
2. В каких направлениях ставятся серологические реакции?
3. Что такое диагностикум, и для чего он применяется?
4. Что такое иммунная диагностическая сыворотка, и для чего
она применяется?
5. Укажите виды иммунных диагностических агглютинирую-
щих сывороток, способы получения и их практическое применение.
6. Условия проявления, механизм, способы постановки и прак-
тическое применение РА.
7. Дайте определение РП.
8. Опишите способы постановки РП.
9. Механизмы, условия, техника постановки и целевое назначе-
ние РП.
10. Укажите способ получение и титрования преципитирующих
сывороток.
11. Опишите способы получения гаптенов.
12. Назовите области применения РП.
13. Механизм, техника постановки и целевое назначение РП.
14. Укажите способ получения и титрования антитоксических
сывороток, единицы измерения их активности.
15. Способ получения и титрования токсинов (анатоксинов),
единицы измерения их активности.
16. Что такое неполное АТ? Каковы методы их выявления?
17. Механизм, техника постановки и диагностические возможно-
сти пробы Кумбса.
18. Резус-конфликт новорожденных и его ранняя диагностика.
19. Изложите принцип РН токсинов и вирусов.
47
20. Механизм реакции Шика и Дика и их применение.
21. Опишите способ постановки РН токсинов и ее целевое назна-
чение.
22. Опишите способы постановки РН вирусов и ее целевое назна-
чение.
23. Опишите механизмы, технику постановки и целевое назначе-
ние РТГА.
24. Как определяется фагоцитарный показатель?
25. Опишите принцип и технику постановки ОФР.
26. Что такое опсонины и бактериотропины?
27. Дайте определение опсоническому индексу.
28. Изложите сущность РНГА.
29. Назовите основные ингредиенты для РНГА и охарактеризуй-
те их.
30. Опишите технику постановки РНГА и ее практическое ис-
пользование.
31. Назовите и охарактеризуйте основные ингредиенты для РСК.
32. Опишите технику подготовки ингредиентов для РСК.
33. Опишите технику постановки РСК.
34. Назовите и опишите методические варианты постановки ре-
акции бактериолиза.
35. Опишите сущность феномена Исаева-Пфейффера.
36. Изложите принцип иммунолюминесцентного анализа.
37. Опишите механизм прямого иммунолюминесцентного метода.
38. Опишите механизм непрямого иммунолюминесцентного ме-
тода.
39. Назовите методы лабораторной диагностики, в которых ис-
пользуются серологические реакции.
48
ЗАДАЧИ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
Задача 1
Больному с клиническими проявлениями инфекционного забо-
левания был выставлен предварительный диагноз «брюшной тиф».
Какая серологическая реакция может подтвердить данный диагноз?
Какой диагностический препарат используется в данном случае? Что
является исследуемым материалом и в каком направлении ставится
реакция? Когда реакция считается положительной?
Задача 2
У больного с предварительным диагнозом «брюшной тиф» из
исследуемого материала была выделена чистая культура возбудителя.
Какая серологическая реакция может подтвердить данный диагноз?
В каком направлении ставится реакция в данном случае? Какие вы
знаете способы постановки и учета этой реакции? Какие диагности-
ческие препараты используются при этом?
Задача 3
С агглютинирующей сальмонеллезной сывороткой (титр 1:12 800)
была поставлена реакция агглютинации с возбудителем, выделенным из
кишечника больного с целью сероидентификации. Реакция агглютина-
ции прошла до разведения диагностической сыворотки 1:3 200. Можно
ли утверждать, что выделенный возбудитель относится к роду сальмо-
нелл? Обоснуйте ответ.
Задача 4
В приемное отделение поступил больной с температурой 39 °С.
Для подтверждения предварительного диагноза «бруцеллез» была
поставлена реакция агглютинации Райта (автор реакции). Реакция
49
прошла в разведении сыворотки больного 1:200. Можно ли утвер-
ждать в данном случае, что человек болен бруцеллезом? Обоснуйте
ответ.
Задача 5
В приемном покое инфекционной клиники у больного с предварительным диагнозом «дизентерия» был взят исследуемый материал —
содержимое кишечника. С помощью какой серологической реакции
можно обнаружить возбудителя в исследуемом материале? Какой ди-
агностический препарат необходимо иметь в лаборатории? Какие
способы постановки и учета этой реакции вы знаете?
Задача 6
Для подтверждения предварительного диагноза «хроническая
гонорея» была поставлена реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).
В лаборатории имелся эритроцитарный диагностикум антигенный. Что
представляет собой этот препарат? В каком направлении была постав-
лена РНГА? Что является исследуемым материалом в данном случае?
Как будет выглядеть положительный результат? Обоснуйте ответ.
Задача 7
Для подтверждения предварительного диагноза «дифтерия» бы-
ла поставлена реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). В лабора-
тории имелся эритроцитарный диагностикум глобулиновый. Что
представляет собой этот препарат? В каком направлении была по-
ставлена РНГА? Что является исследуемым материалом в данном
случае? Как будет выглядеть положительный результат? Обоснуйте
ответ.
50
Задача 8
Из носоглотки больного с клиническим диагнозом «грипп» был
выделен вирус. Какую серологическую реакцию необходимо поста-
вить в этом случае для подтверждения этиологии заболевания? Како-
во направление этой реакции? Как будет выглядеть положительный
результат?
Задача 9
С целью диагностики гриппа была поставлена серологическая
реакция. Как называется эта реакция и какова ее сущность? Каково
направление данной реакции? Какой исследуемый материал необхо-
димо взять от больного и какие ингредиенты необходимо иметь в ла-
боратории для постановки этой реакции? В каком случае на основа-
нии этой реакции может быть выставлен диагноз «грипп»?
Задача 10
Для подтверждения диагноза «полиомиелит» больному была по-
ставлена реакция связывания комплемента (РСК). Какова сущность
этой реакции и ее направление в данном случае? Какой исследуемый
материал берется от больного и какие ингредиенты необходимо
иметь в лаборатории для постановки этой реакции? Как выглядит по-
ложительный результат реакции?
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]