Добавил:
ivanov666
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Микробиологическая безопасность при зооантропонозных болезнях. Учебное пособие.pdf
11
мазка берут, свежую каплю крови. Готовые мазки крови высушивают на
воздухе. Не рекомендуется подсушивать их над пламенем или на солнце.
Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими,
равномерными и достаточной длины. На высушенных мазках и отпечатках
острым предметом надписывают номер или кличку животного и дату
приготовления.
Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем
размазывания материала на предметном стекле стерильной палочкой или
ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной
консистенции, твердые узелки, а также вязкий материал целесообразно
заключить между двумя предметными стеклами. Их разъединяют после
растирания помещенного между ними материала стекла в противоположные
стороны в горизонтальном направлении, в результате чего получают два
довольно тонких мажа. Иногда получают так называемые препараты-отпечатки.
Для этого вырезанный острым скальпелем кусочек органа захватывают
пинцетом и свободной поверхностью кусочка делают на стекле несколько
тонких отпечатков.
1.2. Взятие крови для серологических исследований
У лошадей, крупного рогатого окота, верблюдов, оленей, овец и коз
кровь берут из яремной вены в верхней трети шеи.
Иглы перед взятием крови обязательно стерилизуют кипячением.
Шерсть на месте взятия крови тщательно выстригают, а кожу дезинфицируют
спиртом или эфиром, можно; и 3%-ным раствором карболовой кислоты. Нужно
следить, чтобы кровь стекала в пробирку струей, а не каплями. Кровь, взятая
каплями и вспененная, скорее гемолизируетея и часто дает неправильные
результаты при исследовании. Не следует допускать, чтобы кровь попадала на
12
землю. Для этого надо пользоваться баночкой с дезинфицирующей жидкостью,
куда опускают первую порцию крови.
У свиней кровь берут из уха (иглой со шприцем), из кончика хвоста, из
передней полой вены (лучше в спинном положении) или из глазной вены. Хвост
предварительно обмывают водой с мылом и дезинфицируют спиртом или 3%ным раствором карболовой кислоты. Затем кончик отрезают ножницами. После
взятия крови кончик хвоста обрабатывают йодом, перевязывают или
прижигают. У птиц кровь берут из подкрыльцовой вены или из гребешка.
Кровь у лисиц и песцов берут из бедренной вены, у норок — путем отсечения
подушечки среднего пальца задней лапы или кончика хвоста.
Брать кровь для получения сыворотки надо по возможности утром, до
кормления животных. Для серологического исследования берут по 7—10 мл
крови от крупного рогатого скота, лошадей, овец, свиней; от пушных зверей и
птиц — по 1—2 мл.
Сыворотку крови получают методом отстоя. Для свертывания крови и
отстаивания сыворотки пробирки с кровью выдерживают 30—60 мин при 20—
30oС или 37—38oС, сгусток крови от стенок отделяют стальной спицей, а затем
пробирки выдерживают при 4—10°С 20—24 ч. Отстоявшуюся сыворотку
сливают в сухие стерильные пробирки, закрывают пробками и направляют в
лабораторию. Не консервированная сыворотка пригодна для исследования в
течение 6 дней со дня взятия, при хранении ее на холоде (4—8oС).
Консервирование сывороток проводят:
добавлением 0,05 мл (1 капля) 5%-ного раствора фенола на 1 мл
сыворотки при постоянном перемешивании;
сухой борной кислотой (2—4% к объему сыворотки) до получения
насыщенного раствора и образования на дне пробирки небольшого осадка
кристаллов;
путем однократного загораживания,
13
высушиванием.
Сыворотку (0,4 мл) наносят на фильтровальную бумагу (5x5 см) и
выдерживают при рассеянном свете до полного высыхания. На каждом листе с
сывороткой делают соответствующие записи простым карандашом,
завертывают в пергаментную бумагу (каждую пробу отдельно), упаковывают в
конверт и в таком виде отсылают в лабораторию, где каждую пробу сухой
сыворотки помещают в пробирку с 2 мл физраствора. Термостатируют 6—10 ч
или выдерживают при комнатной температуре 24 ч, а затем исследуют. Сухие
сыворотки сохраняют антигенные свойства 40—130 дней. Сыворотки,
консервированные фенолом или борной кислотой, пригодны для исследования в
течение 30 дней; замороженные сыворотки — в течение 3 дней после
однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки
исследованию не подлежат. На каждой пробе сыворотки указывают ее номер
или кличку животного, или фамилию владельца животного. Пробы направляют
с описью в двух экземплярах.
1.3. Взятие проб воды, почвы, кормов, шерсти
Пробы почвы отбирают почвенным буром. Обследуемую площадь
разбивают на участки размером не более 16 м2. Пробы почвы с территории,
подозреваемой в поверхностном обсеменении сибиреязвенным возбудителем,
берут на глубину до 15 см. На территории скотомогильников сначала снимают
на 2—3 см верхний слой почвы, а затем берут пробы на глубину до 2 м через
каждые 25 см.
Вынутую из глубины и не использованную для проб почву (3 части)
обеззараживают сухой хлорной известью (1 часть), содержащей 25% активного
хлора, если почва сухая ее слегка увлажняют. Место отбора проб также
14
дезинфицируют раствором хлорной извести (5% активного хлора), инструменты
— огнем паяльной лампы.
Пробы воды отбирают барометром или специально приспособленной
бутылью. Пробы воды из естественных и искусственных водоемов берут на
глубине 10—15 см и у дна. Пробы придонного осадка — у береговой кромки и
исследуют их так же, как и пробы почвы. Объем каждой пробы— не менее 0,5
л, общий объем — не менее 1 л.
Перед взятием проб из водопровода кран обжигают горящим спиртовым
тампоном. Открыв кран, набирают в стерильную посуду 0,5 л воды, затем в
течение 10 мин спускают воду и берут еще 0,5 л в другую стерильную посуду.
Первичные пробы грубых кормов берут из разных мест при помощи ножниц и
пинцета. С 4 м2площади берут 1 пробу сухого корма массой не менее 40 г,
зеленой массы— до 100 г.
Корнеплоды и клубни берут 1—3 шт. /4 м2 площади бурта, отсека. С
отобранных корнеплодов срезают поверхностный слой в местах, где имеются
остатки земли.
Пробы силоса, хранящегося в ямах (траншеях), отбирают так же, как и
пробы почвы, а вынутого из траншеи, как пробы зеленой массы. В лабораторию
направляют среднюю пробу, которую составляют из хорошо перемешанных
первичных проб данной партии, емкости и т. п. Масса средней пробы должна
быть не более 500 г.
Отбирают пробы концентрированных кормов сухим стерильным
пробным щупом. После взятия проб от каждого объекта (партии) щуп очищают
и дезинфицируют огнем паяльной лампы. От незатаренных кормов первичные
пробы отбирают из расчета 1 проба (не менее 100 г) на 4 м2 поверхности. Берут
не менее 5 проб от каждого закрома, партии. Первичные пробы берут из
поверхностных и глубоких слоев корма равномерно по всей площади.
15
Отдельно берут образцы корма из тех мест, откуда скармливали
животным перед заболеванием, а также из остатков, находящихся в помещении
и в кормушках. Отобранные средние образцы кормов отдельно заворачивают в
бумагу, перевязывают шпагатом и надписывают.
Если шерсть упакована в кипы, берут не менее 10 образцов из разных
мест каждой кипы, а также пыль, скопившуюся внутри обшивки. Образцы от
одной кипы объединяют и упаковывают вместе.
Каждую отобранную пробу помещают в сухую стерильную стеклянную
банку и закрывают стерильной крышкой, пробкой или пергаментом. Можно
использовать полиэтиленовые мешочки, которые завязывают шпагатом. Пробы
воды наливают в стерильные стеклянные бутылки и закрывают стерильными
резиновыми пробками. Пробы нумеруют (пробы шерсти — номером кипы),
упаковывают во влагонепроницаемую тару и направляют в лабораторию с
нарочным.
В сопроводительной записке к пробам указывают причину проведения
исследования, какой материал, в каком количестве направляют, место и дату
отбора материала, для проб шерсти и кормов дополнительно указывают их
происхождение, объем (массу) партии, вид упаковки и количество упаковочных
единиц.
При направлении в лабораторию нескольких проб почвы, шерсти и т.п. к
сопроводительной прилагают опись с указанием номерка проб и места их
отбора.
Отбор и упаковку проб проводят с соблюдением мер личной профилактики и
общепринятых в бактериологической практике правил стерильности, не
допуская рассеивания возбудителя при отборе и транспортировке проб.
1.4. Упаковка и пересылка патологического материала
16
Трупы мелких животных, части трупов животных и отдельные органы в
свежем (нефиксированном) виде отправляют для исследования в лабораторию
только с нарочным. Посылаемый материал, особенно от животных,
подозрительных по заболеванию инфекционной болезнью, должен быть
тщательно упакован в плотный деревянный или металлический ящик, чтобы
предупредить возможность рассеивания инфекции в ПУТИ. Перед упаковкой
материал необходимо завернуть в ткань или мешковину, смоченную
дезинфицирующим раствором (фенольный креолин, известковое молоко), и
плотно уложить в ящик, чтобы не болтался.
При пересылке почтой стеклянной посуды, в которой заключен
посылочный материал с подозрением на наличие опасных болезней (сап,
сибирская язва, эмфизематозный карбункул, бруцеллез, туляремия,
перипневмония крупного рогатого скота, чума крупного рогатого скота, чума
свиней, псевдочума птиц, ящур, бешенство), обязательно упаковывают в
металлическую коробку, которую запаивают, пломбируют или опечатывают, а
затем упаковывают в деревянный ящик.
На лицевой стороне посылки вверху должна быть надпись «Осторожно
— стекло» и «Верх».
Если такой материал доставляют с нарочным, можно отправлять его в
стеклянной, герметически закупоренной посуде, без металлической коробки, но
в ящике.
На взятый патологический материал составляют сопроводительный
документ. Если при вскрытии посылки в лабратории будут установлены
несоответствие сопроводительному документу или парча патологического
материала, то обязательно составляют акт, копию которого отправляют
ветеринарному врачу, направившему материал в лабораторию.
17
1.5. Взятие и пересылка патологического материала при отдельных
инфекционных болезнях
Сибирская язва
При подозрении на сибирскую язву вскрывать трупы запрещается. Для
исследования берут кровь из надреза уха, периферических сосудов или
отрезают и отсылают в лабораторию ухо.
Если подозрение на сибирскую язву появилось в процессе вскрытия
трупа, вскрытие тотчас же приостанавливают, и для исследования посылают
ухо, кусочек селезенки или печени.
Подозрение на заболевание сибирской язвой свиней обычно возникает
при наличии опухоли в области шеи. Если подозрение возникло во время
вскрытия трупа, то дальнейшее вскрытие прекращают, а для
бактериологического исследования берут участки отечной соединительной
ткани, заглоточные лимфатические узлы. Место надреза предварительно
дезинфицируют, а после взятия крови прижигают раскаленным металлическим
шпателем или заливают дезинфектантом. Кровь наносят на чистое предметное
стекло толстым слоем и высушивают на воздухе без дополнительной фиксации.
Кровь для мазков можно брать шприцем из яремной вены, а для исследований
можно направить кусочек мела, пропитанного кровью.
Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно
ухо туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между
лигатурами. Не снимая шпагата, отрезанное ухо завертывают в пергаментную
бумагу или пропитанную 3%-ным раствором карболовой кислоты марлю,
полотно затем помещают в пластиковый или полиэтиленовый пакет и
помещают в герметически закрываемую посуду. Место отреза уха на трупе
прижигают или заливают дезинфектантом. Для исследований в реакции
преципитации направляют кусочки паренхиматозных органов, кожи (5x5 см) в
18
сухом или загнившем состоянии, не обработанные дезинфицирующими
средствами. Шерсть, волос, щетину (не менее 20—30 г) направляют в
упакованном виде.
Для исследования кожевенно-мехового сырья берут кусочки (3x3 см) с
периферических не загнивших и не заплесневевших участков шкурок. При
наличии на внутренней стороне шкурки кровоподтеков или инфильтратов берут
пробы и в этих местах.
Туберкулез
Для бактериологического анализа направляют при жизни животного
истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко (не менее 100 мл), особенно
при увеличении надвымянных лимфоузлов, фекалии (30—50 г), реже — мочу
(200 мл); посмертно или после убоя — пораженные части органов и лимфоузлы
(бронхиальные, заглоточные, средостенные, предлопаточные, подвымянные).
Материал для исследования доставляют в лабораторию в свежем виде в
стерильной посуде, или консервируют кусочки ткани в 30%-ном растворе
глицерина. Посылают кусочки тканей со свежими, еще не инкапсулированными
и необызвествленными поражениями. Трупы павших или убитых птиц
направляют целиком.
Для гистологических исследований посылают кусочки пораженных
органов и лимфатических узлов, фиксированные в 10%-ном растворе
нейтрального формалина.
Бруцеллез
На бактериологическое исследование направляют абортированный плод
с плодными оболочками или желудок плода с содержимым, (желудок
перевязывают со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки), а также
19
кусачки печени и селезенки. От свиноматок берут не менее 3 плодов.
Посылают стерильно взятые пробы молока (последние порции), содержимое
тигром (бурс).
Для исследования на инфекционный эпидидимит в лабораторию
направляют, от баранов — семенники с придатками; от овцематок —
абортированные плоды с плодными оболочками, выделения из половых путей,
взятые в первые 5 дней после аборта.
От абортированного животного одновременно с патологическим
материалом направляют кровь для серологического исследования. Если в
течение 24—30 ч материал доставить в лабораторию невозможно, его
консервируют 30%-ным раствором глицерина. Крупные плоды направляют в
неконсервированном виде.
От животных, убитых с диагностической целью, направляют
паренхиматозные и половые органы, а также паховые, подвздошные,
предлопаточные, заглоточные, подчелюстные или мезентеральные
лимфатические узлы, манку, трубчатую кость. Если узлы парные, то
направляют правый и левый
На серологическое исследование в лабораторию направляют кровь (или
сыворотку крови) и молоко.
Для исследования на бруцеллез в кольцевой реакции пробу (10—15 мл)
цельного свежего молока берут из одного удоя в стерильную пробирку. Молоко
должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день взятия пробы.
Если это невозможно, его консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл)
или генцианвиолетом (0,4 мл 1%-ного спиртово-водного раствора краски на 10
мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10
дней Пробы молока на рынках берут из каждой отдельной посуды (бидон, фляга
и пр.) после тщательного его перемешивания.
20
При массовом исследовании молока отбирать пробы и ставить
кольцевую реакцию необходимо на ферме в специально отведенном
помещении. Не разрешается исследовать в кольцевой реакции молоко от
животных, страдающих маститом или болезнями, сопровождающимися
лихорадкой, а также молоко животных в первые две недели после родов.
Сап
Основной метод диагностики сапа — серологический. Материалом для
такого исследования служит сыворотка крови. При необходимости направляют
кровь, гнойное отделение язв, носовые выделения, пунктат лимфатических
узлов, гной из абсцессов. От убитых животных — участки пораженных
паренхиматозных органов, лимфатических узлов, носовой перегородки, трахеи,
бронхов и др., при отсутствии патологоанатомических изменений направляют
легкие с регионарными лимфатическими узлами, подчелюстные и заглоточные
лимфатические узлы. Для гистологического исследования используют кусочки
органов и тканей, указанных выше, законсервированных в 10%-ном растворе
нейтрального формалина.
Лептоспироз
Материалом для прижизненной диагностики служат кровь и моча. Кровь
для бактериологического исследования берут в период лихорадки на 1—7-й
день болезни. Для серологического исследования берут кровь не ранее, чем
через 5—7 дней после проявления клинических признаков болезни или через 60
дней после введения вакцины. Мочу собирают в стерильные пробирки.
Микроскопия мочи должна быть закончена при температуре 30—40°С в течение
3 ч, при 25—300С — 4—5 ч, при 20—25° С — 6—8 ч, при 16—20° С в течение
10—12 ч с момента взятия.