Правила отбора и пересылки патологического материала для лабораторного исследования на инфекционные болезни. Учебное пособие

летальный исход колеблется от 20 до 80 %, значительные расходы требуются на проведение мероприятий по профилактике и ликвидации болезни.

Возбудитель болезни – вирус чаще имеет шарообразную форму с выступающими шипами (90-200 нм); содержится в крови, во всех органах и тканях больных животных. Из организма больной лошади вирус попадает во внешнюю среду с секретами и экскрементами, содержащими белок – мочой,

калом, носовой слизью, конъюнктивальным секретом, молоком.

В организм восприимчивых животных вирус попадает через кожу,

слизистые оболочки, пищеварительных тракт. Массовым источником распространения инфекции являются кровососущие насекомые, особенно слепни, мухи-жигалки, в слюне которых вирус сохраняется 3-4 часа.

На вирус организм отвечает лихорадкой, усилением фагоцитарной деятельности клеток ретикулоэндотелиальной системы. Эритроциты,

нагруженные вирусом, поглощаются клетками РЭС, но уничтожение вируса при этом не происходит.

Вирус слабоустойчив к теплу и при 600С теряет вирулентность в течение часа. Кипячение разрушает его через 1-2 минуты, солнечные лучи (20-28о)

обезвреживают в течение 1-3 часов. При 0-2оС вирус сохраняется до двух лет. При биотермической обработке навоза он погибает через 30 дней, в моче и навозной жиже сохраняется до 2,5 месяцев.

2 %-й раствор едкого натра обезвреживает вирус через 20 минут, 3 %-ный раствор креолина – через 30 минут. 20 %-ная взвесь, приготовленная из извести, содержащей 29,5 % активного хлора, обезвреживает вирус в сточных водах через трое суток.

Материалом для исследования служат соскобы кожи т волосы из периферических участков очага поражения, не подвергшийся лечению.

3.7. Лейкоз

Лейкоз (Leucosis) - вирусное заболевание, характеризующееся

пролиферацией клеток кроветворной системы и проявляется появлением в

61

крови животных малодифференцированных клеток миелоидного ряда.

Наиболее часто заболевание лейкозом встречается у КРС, реже у овец, коз,

свиней, лошадей и кошек. Регистрируется болезнь по всему миру.

Возбудитель лейкоза - РНК-содержащий вирус, относящийся к роду

Oncovirus семейства Retrovidae. Возбудители лейкоза разных видов животных морфологически сходны, но различаются антигенным строением.

У крупного рогатого скота инкубационный период может длиться от 2-х

месяцев до 6-и лет. Предлейкозную стадию, при которой клиническая картина не проявляется, определяют с помощью серологического исследования крови. При этом учитывается гематологическая картина. В

крови увеличивается количество лейкоцитов, и малодифференцированных клеток крови.

Рис. 4. В крови увеличивается количество лейкоцитов, и малодифференцированных

клеток крови.

Далее лейкоз проявляется специфическими и неспецифическими симптомами. Отмечается общее угнетение, снижение продуктивности

(приросты живого веса и надои молока), прогрессирует истощение на фоне сохранённого аппетита. При этом происходят нарушения в работе желудочно-кишечного тракта (атонии, запоры, поносы, тимпании).

62

При усугублении процесса нарастают отёки подгрудка, нижней части шеи, живота, вымени.

Реагирует на вирус и репродуктивная система. Наблюдаются аборты,

мертворождения, яловость.

В последнее десятилетие проведение мероприятий и оздоровления хозяйств, привело к значительному улучшению ситуации и ликвидации заболевания лейкозом во многих странах мира.

Во внешней среде вирус не устойчив. При нагревании до 600C погибает через 1 минуту. Едкий натр, формальдегид, и другие дезинфектанты быстро инактивируют вирус. Нагревание молока до 750С или простое прокисание

(при понижении рН до 4,75) инактивирует вирус. Возбудитель может долгое время находиться в спящем состоянии. В живой клетке вирус живёт годами.

Источник инфекции — больные животные. Наиболее часто заболевают животные в возрасте 4-7 лет. Контаминированные вирусом секреты и экскреты животного (слюна, молозиво, молоко, плацента), попадая на объекты ухода, могут служить путём заражения. Вирус переносят также насекомые.

Огромную роль в заражении играет генетическая и фенотипическая предрасположенность к заболеванию, а также иммунный статус организма.

Лейкоз чаще протекает в скрытой форме. Под влиянием различных факторов вирус активизируется и вызывает пролиферацию лейкоцитов. В

начальный период отмечается увеличение лейкоцитов (лейкоцитоз). Картина крови меняется в сторону увеличения незрелых клеток. Вирус локализуется в лимфатической системе и региональные лимфатические узлы увеличиваются.

В лабораторию направляют материал для гематологического и гистологического исследований.

Для гематологического исследования направляют:

а) стабилизированную кровь, взятую из яремной вены в пробирку с резиновой пробкой. В качестве стабилизаторов применяют:

63

лимонно или щавелевокислый натрий, добавляемые соответственно по 30

и 15 мг на 10 мл крови. Хранить такую кровь можно не более суток;

гепарин – из расчета 5 ЕД на 1 мл крови,

ЭДТА (двунатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты) – 1–2

капли 10%-ного раствора на 5 мл крови;

б) мазки крови для выведения лейкограммы. Их готовят на предметных стеклах при взятии крови из вены и быстро высушивают на воздухе, после чего на мазке обозначают номер животного и дату взятия крови. Мазки должны быть равномерно тонкими. Фиксируют и окрашивают их не позже 1– 2 суток с момента изготовления.

Для подсчета ядерных элементов готовят мазки из костномозгового пунктата, а также берут пунктат в пробирки (Флоринского, Уленгута) в

количестве 0,2 мл.

Мазки из костномозгового пунктата высушивают на воздухе. У крупного рогатого скота пунктат берут из грудной кости.

Для гистологического исследования в лабораторию направляют от павших или убитых животных кусочки селезенки, лимфатических узлов,

печени, почек, легких, предсердии, скелетных мышц, грудной кости и отдельных участков желудочно-кишечного тракта. Материал (кусочки 1х 1

см) фиксируют 10%-ным водным раствором нейтрального формалина.

64

ГЛАВА IV. ВЗЯТИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ ПОДОЗРЕНИИ НА МИКОПЛАЗМОЗНУЮ БОЛЕЗНЬ

Микоплазмоз - контагиозная болезнь животных, характеризующаяся поражением верхних дыхательных путей, серозно-катаральным воспалением легких, серозных покровов, кератоконъюнктивитами, артритами у молодняка, абортами у беременных животных, эндометритами, маститами и рождением мертвого нежизнеспособного приплода. Микоплазмы - это свободноживущие прокариотические микроорганизмы. В природе существует множество различных видов микоплазм, среди которых имеются патогенные, условно-патогенные и сапрофиты. По уровню структурной организации они занимают промежуточное положение между вирусами и бактериями. Микоплазмы очень мелкие полиморфные организмы, плохо окрашиваются обычными красителями, граммотрицательны, неподвижны.

Они не имеют клеточной стенки, присущей бактериями, а окружены трехслойной цитоплазматической мембраной, состоящей из полярных липидов (фосфолипидов и гликолипидов) и протеинов. Клетки содержат ядерный материал ДНК и другие присущие бактериям структуры.

Патогенное действие микоплазм на организм животного определяется способностью этих микроорганизмов прикрепляться к клеткам хозяина. В

этом процессе участвуют гликопротеиды микоплазм, а также специальные органеллы, обнаруженные у некоторых видов. Некоторые виды микоплазм образуют токсины.

Экономический ущерб при данной болезни складывается из падежа,

вынужденного убоя, недополучения живой массы, приплода, качества получаемой продукции, затрат на лечение, профилактику и ее ликвидацию.

Микоплазмы являются этиологическим фактором особо опасных болезней: контагиозной плевропневмонии крупного рогатого скота;

65

контагиозной плевропневмонии коз, а также инфекционной агалактии коз и овец, микоплазмоза свиней, вызывают инфекцию у птиц, собак, кошек,

лошадей, верблюдов, оленей, диких животных. У крупного рогатого скота микоплазмы, кроме того, вызывают маститы, артриты, аборты, полиартриты,

пневмонии, катаральные бронхопневмонии у телят и молодняка. Заболевания плохо поддаются лечению и нередко оканчиваются летально.

Для исследования в лабораторию направляют бронхиальные,

средостенные лимфоузлы, кусочки пораженных легких (на границе здоровой и пораженной ткани), селезенки, печени, головной мозг, абортированные плоды, мертворожденные плоды (или их органы), невскрытые пораженные суставы, при маститах - молоко. При воспалении верхних дыхательных путей можно исследовать носовую слизь и смывы из носовой полости.

Патологический материал отбирают не позднее 2-4 ч после диагностического убоя или падежа животного и направляют в лабораторию в термосе со льдом в замороженном виде. Материал должен быть получен от животного, не подвергавшегося лечению. Для прижизненной диагностики можно отбирать парные пробы сыворотки крови (первую пробу - в начале заболевания, повторно - через 14-20 дней).

В лаборатории проводят микроскопию мазков-отпечатков, посев на питательные среды, идентификацию выделенных культур по культуральным и биохимическим свойствам, а также на основании серологических свойств

(для этого используют РА, РНГА, РСК и иммуноферментный метод).

Диагноз считается установленным при выделении культуры возбудителя из первичного патологический материала и его идентификации; при нарастании титра антител в 4 раза и более в парных пробах сыворотки крови.

4.1. Контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота

Контагиозная плевропневмония крупного рогатого скота (повальном

воспалении легких (ПВЛ), контагиозной плевропневмонии (КПП) -

66

высококонтагиозная болезнь, характеризующаяся лихорадкой, фибринозной интерстициальной пневмонией, серозно-фибринозным плевритом с последующим образованием анемических некрозов и секвестров в легких,

скоплением большого количества экссудата в грудной полости.

Эпизоотический процесс при контагиозной плевропневмонии в стаде развивается медленно и может длиться годами (стационарность). В

неблагополучном стаде поражаются не все животные: 10...30 % крупного рогатого скота резистентный к естественному или экспериментальному заражению, у 50 % животных проявляется клиническая картина болезни, у 20...25 % развивается субклиническая инфекция (выявляют лишь лихорадку и комплементсвязывающие антитела без поражения легких), и 10 %

животных могут стать хроническими носителями инфекции. Животные двух последних групп эпизоотологический наиболее опасны. Смертность от КПП в зависимости от породы животных, их общей резистентности, длительности содержания больных животных варьируется от 10 до 90 %.

В естественных условиях к контагиозной плевропневмонии восприимчивы только жвачные: крупный рогатый скот, зебу, буйволы,

бизоны, яки. В эксперименте материалом от больных животных удается заразить овец, коз, верблюдов и северных оленей. Животные других видов, а

также человек, находясь в контакте с больными, не заболевают. Мелкие лабораторные животные считаются невосприимчивыми к возбудителю КПП.

В механизме развития клинико-морфологических изменений при КПП крупного рогатого скота ведущую роль играет явление сенсибилизации.

Полагают, что возбудитель болезни, проникнув в альвеолярные полости легких, начинает там репродуцироваться, попадает затем в межклеточное пространство и заносится в паренхиму легких и легочные лимфатические узлы. В первичных очагах инфекции происходит репродукция микоплазм,

которые становятся для организма постоянными источниками микоплазменного антигена.

67

В местах скопления антигена, главным образом в бронхиальных и средостенных лимфатических узлах, происходит взаимодействие антигена с антителом и возникают изменения, характерные для феномена Артюса,

выражающиеся нарушением порозности сосудов, развитием местного воспаления, закупоркой кровеносных и лимфатических сосудов и усиленной экссудацией в грудную полость. В результате эмболии кровеносных и лимфатических сосудов образуются обширные очаги некроза с последующей секвестрацией долек легкого.

Немаловажную роль в патогенезе КПП играют также экзо- и

эндотоксины возбудителя болезни, а также липополисахарид, содержащий галактан, которые вызывают лихорадку, лейкопению, внезапный сильный стресс и депрессию (коллапс), поражения суставов и почек, продолжительное нахождение микоплазм в крови, плеврит. В ходе дальнейшего развития инфекционного и патологического процессов, сопровождающихся интоксикацией за счет токсинов микробов и продуктов клеточного распада омертвевших долей воспаленного, чрезвычайно увеличенного (до 20 кг)

легкого, происходят глубокие нарушения функции нервной,

сердечнососудистой, выделительной систем, печени и других органов, что приводит к декомпенсированному расстройству гомеостаза и смерти животного.

Возбудитель КПП лишен клеточной стенки, присущей бактериям, и

окружен лишь трехслойной цитоплазматической мембраной. Микроб неподвижный, грамотрицательный, хорошо окрашивается анилиновыми красителями, аэроб. Устойчивость возбудителя к физическим, химическим и другим факторам внешней среды относительно низкая. Солнечный свет и высушивание убивают его в течение 5 ч, влажное прогревание при 55 "С - за

5 мин, при 60 °С - за 2 мин, сухой жар - за 2 ч. В гниющем материале сохраняется до 9 дней, а в замороженных кусках пораженных легких - от 3

мес до 1 года. Микоплазмы погибают при 10-кратном замораживании и

68

оттаивании, а также после 6-часового воздействия этилового спирта (96%-

ного) и эфира.

Возбудитель обладает высокой устойчивостью к препаратам группы пенициллина и сульфаниламидам, но чувствителен к стрептомицину,

тетрациклину, хлорамфениколу, окситетрациклину и тилозину. Обычные дезинфицирующие средства в общепринятых концентрациях, а также детергенты достаточно быстро и надежно обезвреживают возбудитель на объектах внешней среды.

Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие КПП животные, у которых до наступления полной инкапсуляции пораженных очагов возбудитель длительное время выделяется в окружающую среду с истечениями из носа, бронхиальным секретом при кашле, а также с мочой,

калом, молоком и околоплодной жидкостью. Основной путь передачи -

аэрогенный. В естественных условиях не исключается также передача микоплазм через желудочно-кишечный тракт (с фуражом); половым,

трансплацентарным и трансмиссивным путями.

Больной скот служит источником возбудителя инфекции на всех стадиях инфекционного процесса. Жизнеспособность возбудителя КПП в легких переболевших животных сохраняется до 5...6 мес. У животных,

подвергшихся лечению, но имевших инкапсулированные очаги, установлена жизнеспособность возбудителя через 6 месяцев после лечения.

Аэрогенная передача возбудителя возможна на расстоянии 45 м от больного до восприимчивого животного. Поэтому болезнь чаще распространяется при торговле и перевозке скота, скученном совместном содержании больных и здоровых животных, частых перегруппировках.

Факторами передачи возбудителя могут быть фураж, моча (в аэрозольном состоянии), навоз и предметы ухода за животными.

69

4.2. Инфекционная плевропневмония коз

Инфекционная плевропневмония коз – (pleuropneumonia infectiosa caprarum) — контагиозная болезнь, вызываемая микоплазмой и сопровождающаяся лихорадкой и крупозной пневмонией, серозно-

фибринозным плевритом. В естественных условиях болеют только козы, в

основном до трехлетнего возраста. Козы старшего возраста и козлята-сосуны болеют реже. Источник микоплазм — больные и переболевшие козы,

выделяющие их при кашле, с носовым экссудатом и мочой. Инкубационный период 5-20 дней. Болезнь протекает чаще остро, реже — хронически.

Симптомы сопровождаются быстрым повышением температуры тела до 41-

42 °С, отказом от корма, угнетением, мышечной дрожью, отсутствием жвачки. Животные отстают от стада, не едят. Отмечают кашель, вначале сухой, отрывистый, затем влажный. Одновременно наблюдают серозные,

переходящие в слизисто-гнойные истечения из носа, конъюнктивиты.

Дыхание затруднено, сопровождается хрипами и стонами; 70-80% коз абортируют. Животные погибают на 7-10-й день болезни. При хроническом течении симптомы выражены стерто, но также часто болезнь заканчивается летально.

Патологоанатомические изменения обнаруживают в легких уже в ранней стадии болезни в виде мелких очагов воспаления, располагающихся в разных долях под плеврой. Процесс охватывает обычно верхние, а позже нижние доли легкого; пораженная доля увеличена, уплотнена. При остром течении болезни в грудной полости часто обнаруживают от 1 до 2 л мутноватой соломенно-желтоватого цвета жидкости, из которой на воздухе выпадает фибринозный осадок. Пораженные легкие часто спаяны с грудной клеткой,

диафрагмой и участками перикарда. В легких преобладают участки серо-

красной гепатизации, которые на разрезе часто мраморного вида.

Средостенные и бронхиальные лимфатические узлы увеличены в 4-5 раз, на разрезе сочны и усеяны точечными кровоизлияниями, на сердечной оболочке

признаки воспаления, сердце увеличено. В сердечной сорочке содержится

70