Правила отбора и пересылки патологического материала для лабораторного исследования на инфекционные болезни. Учебное пособие

Аутолизированный патматериал для бактериологического исследования не пригоден. Начавшееся разложение может стереть картину исследования.

Трубчатые кости павших животных (телят, ягнят, поросят) посылают в целом виде, с неповрежденными концами, тщательно очистив их от тканей.

Кости завертывают в марлю или полотно, смоченное дезинфицирующей жидкостью (50-ти %-м раствором карболовой кислоты) или пересыпают поваренной солью с последующей упаковкой пергаментной бумагой и полотенцем или марлей. Отрезок кишечника освобождают выжиманием от фекальных масс, а концы перевязывают лигатурой. На исследование посылают части кишечника с наиболее характерными патологическими изменениями. Кишечник помещают в банки с 30-40 %-м водным раствором глицерина или насыщенным раствором поваренной соли. Объем консервирующей жидкости должен превышать объем взятого материала в 5-

7 раз.

При посылке для исследования участков кожи берут наиболее пораженные кусочки ее размером 10 х 10 см, которые посылают в стерильной герметически закрытой посуде.

Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу, желчь и другой жидкий патологический материал посылают в запаянных пастеровских пипетках,

стерильных пробирках или во флаконах, хорошо закрытых стерильными резиновыми пробками.

Различные выделения можно посылать в виде мазков на заранее подготовленных чистых предметных стеклах. Мазки из тканей, гноя, органов и различных выделений готовят путем размазывания материала на предметных стеклах стерильной стеклянной палочкой или ребром другого предметного стекла до тонкого слоя. Частицы органов плотной консистенции или вязкий материал лучше заключать между двумя предметными стеклами.

После размозжения помещенного между ними материала стекла разъединяют в противоположные стороны. Можно приготовлять мазки-отпечатки

11

обычным способом. Предметы на предметных стеклах фиксируют на воздухе и обертывают в отдельности пергаментной бумагой и маркируют.

Небольшие трупы павших животных (поросят, ягнят, телят), а также трупы мелких животных, птиц лучше посылать целыми в непроницаемой таре.

Большую осторожность следует проявлять при отборе патологического материала от трупа животных, павших от вирусных инфекций, особенно высококонтагиозных, имевших тенденцию к быстрому распространению

(ящур, чума), а также опасных для здоровья человека (сибирская язва,

бешенство, чума верблюдов, лептоспироз, туляремия, вызываемая бактерией

Francisella tularensis, туберкулез, столбняк, сап и некоторые другие). Особое внимание следует уделять экипировке врача, дезинфектантам – противомикробным веществам, используемым в целях дезинфекции и надежной изоляции места вскрытия от окружающей среды.

При подозрении на экзотическую болезнь, (инфекционные заболевания,

не встречающиеся в данной стране – чума крупного рогатого скота,

африканская чума свиней, чума верблюдов, повальное воспаление легких крупного рогатого скота и т.д.) отбор патологического материала проводится комиссионно и отправляется в термосах со льдом в плотной непроницаемой упаковке с нарочными со спешным поручением во ВНИИВВиМ – в

уникальный специализированный научно-исследовательский институт,

созданный с целью разработки и внедрения средств и методов ветеринарной защиты животных от особо опасных и экзотических инфекционных болезней, включая зооантропонозы (болезни, общие для человека и животных), а также - для защиты животноводства от химических и радиационных воздействий. Проведение диагностических исследований патологического материала при подозрении на экзотическую болезнь обычными ветеринарными лабораториями запрещается.

Патологический материал необходимо взять как можно раньше: не позднее 12 ч после гибели животного зимой и 6 ч — в теплое время года,

12

законсервировать или отправить в свежем виде. Для бактериологического исследования в лабораторию отправляют кусочки кожи, слизистых оболочек,

паренхиматозных органов, трубчатую кость, спинной и головной мозг,

лимфатические узлы пробы жидкости из грудной и брюшной полостей,

отрезок кишечника, изолированный лигатурами, плод, плодные оболочки и т.

д. Пробы из каждого органа помещают в отдельную посуду и маркируют. В

каждом случае необходимо брать тот материал, в котором можно обнаружить характерные для данной болезни изменения.

13

ГЛАВА II. ВЗЯТИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ПРИ

ПОДОЗРЕНИИ НА БАКТЕРИАЛЬНУЮ ИНФЕКЦИЮ

Бактерии в отличие от вирусов могут развиваться самостоятельно.

Большую опасность таят в себе продукты жизнедеятельности бактерий – токсины. Свойство продуцировать яды характеризует бактерии как патогенные, а если речь идет о представителях растительной, грибковой,

животной природы, то они считаются ядовитыми.

Величина большинства бактерий колеблется от 0,2 до 1,3 мкм. Форма бактерий достаточно разнообразна. Бактериальные болезни животных,

вызываемых бактериями, представляющими собой огромную группу заболеваний. Возбудителями бактериальных болезней могут быть неспорообразующие бактерии – кокки (стрептококкозы, стафилококкозы),

палочковидные (листериоз, рожа, сальмонеллез), спорообразующие аэробные бактерии – бациллы (сибирская язва), анаэробные – клостридии (брадзот,

столбняк), вибрионы (кампилобактериоз), спириллы (лептоспироз),

микобактерии (туберкулёз), актиномицеты (актиномикоз) и др.

Животные заражаются алиментарными (колибактериоз, сальмонеллёз),

респираторными (пастерелез, туберкулез), трансмиссонным (туляремия)

путями и через наружные покровы – без участия переносчиков (столбняк,

некробактериоз). Большинство бактериальных болезней способно нанести большой экономический ущерб животноводству, многие из них – зооантропонозы (например, бруцеллёз, сибирская язва, листериоз и другие.

При лечении бактериальных болезней (в отличие от вирусных) эффективны антибиотики, сульфаниламиды и другие препараты. Для профилактики используют специфические препараты – вакцины, сыворотки, бактериофаги.

Микобактерии — палочковидные бактерии, имеющие на концах включения в виде четок и гранул. Отличительная черта всех микобактерий — морфологическая пластичность. Под воздействием различных экзогенных и

14

эндогенных факторов палочки видоизменяются: удлиняются или ветвятся,

приобретают форму кокков, трансформируются в L-формы и фильтрующиеся формы, сохраняя свою патогенность.

По способности вызывать заболевания человека и животных микобактерий можно разделить на 3 группы: патогенные, условно патогенные и сапрофитные. В группу патогенных (опасных) для человека и животных микобактерий входят: М. tuberculosis, M. africanum и M. bovis -

возбудители туберкулеза у человека и животных; M. leprae - возбудитель проказы, M. paratuberculosis, - возбудитель паратуберкулеза, M.avium –

возбудитель туберкулеза у птиц. Группу потенциально патогенных

микобактерий составляют: M. avium, M.intracellulare, M. kanssasii, M.

malmoense, M. xenopi, M. fortuitum, M. chelonai.

К третьей группе относятся сапрофитные микобактерии, которые свободно живут в окружающей среде и, как правило, не опасны для человека.

Типовым видом рода Mycobacterium является M.

tuberculosis. Микобактерии этого вида вызывают туберкулез у человека, а

также патогенны для многих видов сельскохозяйственных и лабораторных животных. M. bovis - патогенен для крупного рогатого скота, свиней,

кроликов, морских свинок, белых мышей, коз, овец, лошадей, дики животных. У человека чаще вызывает внелегочные форы болезни.

Отличается медленным ростом на питательных средах с образование; мелких сухих колоний, плохо эмульгируемых в физиологическом растворе. M. africanum - занимает промежуточное положение между М. tuberculosis и M. bovis. Вызывает туберкулез у людей в тропической зоне Африки. Патогенен для морских свинок, мышей, отчасти кроликов. Растет только при 37°С на яичных и агаровых средах с бычьей сывороткой.

2.1. Сибирская язва

Сибирская язва – острое инфекционное заболевание животных и человека (зооантропоноз), вызываемое сибиреязвенной бациллой Bacillus anthracis и сопровождающееся явлениями септицемии. Она представляет собой крупную спорообразующую грамположительную палочку размером

(5-10)×(1,0-1,5) мкм.

Этиология. Возбудитель Bacilla anthracis. Заражение животных происходит алиментарно, аэрогенно, через поврежденную кожу и укусы жалящих насекомых. Источником инфекции являются больные животные,

сибиреязвенные трупы, продукты убоя, инвентарь, корма, почвы, вода,

загрязненные спорами сибиреязвенной бациллы.

Патогенез. Сибиреязвенные бациллы очень быстро размножаются в органах и в крови, подавляют лейкоцитоз, вызывают иммунодефицит.

Вегетативные сибиреязвенные бациллы способны активно вырабатывать экзотоксины, оказывающие цитотоксическое действие и способствующие развитию тканевой отечности, легочного отека, токсических шоков и т.д.

Клиника. Сибирская язва поражает лёгкие, вызывает карбункулы кожи

(самый характерный признак) и изменения лимфоузлов. Инкубационный период 1-3 дня, течение молниеносное, острое, подострое и хроническое. В

зависимости от пути заражения и локализации воспалительных процессов различают следующие формы болезни: карбункулезную (кожная, кишечная,

легочная, ангинозная), септическую и апоплексическую (молниеносную).

Карбункулезная форма – проявляется очаговым серозно-геморрагическим воспалением образованием карбункулов в коже (кожная форма), кишечнике

(кишечная форма), фибринозно-геморрагическим воспалением легких, чаще у человека (легочная форма), а также геморрагически-некротическим воспалением миндалин, заглоточных и подчелюстных лимфоузлов, серозно-

геморрагическим отеком подкожной клетчатки в области межчелюстного пространства у свиней (ангинозная форма).

16

Диагноз. Учитывают эпизоотическую ситуацию, клиническое проявление, используют бактериологическое исследование. В лабораторию посылают мазки крови или ухо животного с той стороны, на которой лежит труп. Вскрывать трупы запрещено. Соблюдают меры личной безопасности.

Дифференцировать надо от сепсиса, эмкара крупного рогатого скота,

злокачественного отека, пастереллеза, гироплазмидозов, инфекционной анемии лошадей, колик у лошадей, тимпании у крупного рогатого скота. При сепсисе имеется септический очаг; при эмкаре некроз и газовая гангрена мышц, селезенка не изменена или слабо увеличена; при злокачественном отеке некроз, иногда газовая гангрена мышц в области раны; при пастереллезе крупозная пневмония, селезенка не изменена; при пироплазмидозах желтуха, гемоглобинурия, исследование мазков крови; при инфекционной анемии лошадей – нет септического очага, имеется мускатная печень, проводится гистоисследование печени, селезенки, почек; при тимпании у коров нет сепсиса; при коликах у лошадей нет сепсиса.

При молниеносном течении у животного наблюдаются судороги,

тахикардия, учащенное дыхание, цианоз видимых слизистых оболочек,

иногда кровянистые истечения из носового и ротовой полостей и анального отверстия. При остром течении наблюдается повышение температуры до 41420С, отсутствие аппетита, прекращение жвачки, гематурия, аборты у стельных коров.

Карбункулезная форма сопровождается появлением в коже, подкожной клетчатке, легких, в слизистой оболочке кишечника серозно-геморрагиче-

ских воспалительных очагов (карбункулез).

К сибирской язве восприимчивы все теплокровные животные, в первую очередь крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, олени, верблюды,

буйволы, ослы, слоны и др. Заболевать сибирской язвой могут также и плотоядные животные, а также всеядные, например, свиньи. Птицы, за редким исключением (хищные птицы), сибирской язвой не болеют. Очень восприимчивы к заболеванию кролики. Более устойчивы к болезни собаки и

17

кошки. Источниками инфекции являются больные животные, из организма которых возбудитель выделяется с фекалиями, мочой, слюной, выделениями из носа и частей организма. Факторами передачи являются различные предметы, содержащие споры трупов животных – шерсть животных, их кожа, кости, предметы ухода и др.

Максимальной восприимчивостью к бациллам обладают овцы, козы,

коровы, кони, а также дикие животные – олени, буйволы, верблюды.

Возбудитель болезни - бактерия (бацилла), одна из важнейших особенностей которой состоит в том, что она обладает способностью сохранять свои болезнетворные свойства, находясь во внешней среде (почве, воде)

неопределенно долгое время. Эта способность связана с тем, что во внешней среде возбудитель образует оболочку - спору. Такая спора выдерживает даже кипячение в течение 10-15 мин. Патологический процесс протекает в различных морфологических формах - кожной, легочной, кишечной и септической.

Плюсовые температуры бациллы выдерживают недолго. Прямой солнечный свет убивает их за несколько часов. При нагревании до 50-55 °С

они гибнут в течение часа, при 60 °С - через 15 мин, при 75 °С - через минуту, при кипячении - моментально. Быстрое высушивание убивает бациллу, а медленное приводит к образованию спор. В почве, куда возбудитель попадает с испражнениями, мочой больных животных или трупами, сибиреязвенные палочки образуют споры. Они высокорезистентны:

в почве остаются живыми в течение многих лет, выдерживают кипячение в течение 20 минут.

Убить их можно сухим жаром или автоклавированием в режиме стерилизации. Бациллы могут погибнуть через 2 недели при температуре 2-

4°С. В желудочном соке животных бациллы погибают за 30 мин,

в засоленном мясе сохраняются до 15 дней.

Инкубационный период сибирской язвы длится 1–3 суток, иногда до 14

суток. При быстром течении смерть наступает через 1–3 часа.

18

В связи с опасностью заболевания при выявлении даже небольшого

очага немедленно объявляется карантин по сибирской язве. Бациллы

чувствительны к действию антибиотиков - пенициллина стрептомицина,

окситетрациклина, тетрациклина н биомицина. Минимальные концентрации стрептомицина, задерживающие рост бацилл, колеблются о пределах 1,15—

2,34 мкг/мл; окситетрациклина — 0,22— 1,87 мкг/мл (Ипатенко, 1983).

Бациллы сибирской язвы хорошо растут на мясопептонных средах,

содержат капсульный и соматический антигены и способны

выделять экзотоксин, представляющий собой белковый комплекс, состоящий

из вызывающего отёк (повышение концентрации цАМФ), протективного

(взаимодействует с мембранами клеток, опосредует активность других компонентов) и летального (цитотоксический эффект, отёк лёгких)

компонентов.

Капсула — антифагоцитарная активность. Сибиреязвенная бактерия вне организма при доступе кислорода образует споры, вследствие чего обладает

сохраняться годами; пастбище, заражённое испражнениями и мочой больных животных, может долгие годы сохранять сибиреязвенные споры.

Вынужденный убой является очень опасным мероприятием, так как это приводит к обсеменению окружающей среды, почвы, бациллами сибирской язвы. Основным путем заражения является алиментарный, при котором возбудитель попадает в организм животного с кормом или водой, однако возможно заражение и через кожу, слизистые и дыхательные пути.

Кровососущие насекомые также могут передавать возбудителя от больного животного здоровому.

Для исследования на сибирскую язву от невскрытых трупов посылают ушную раковину или мазки крови, от вскрытых — селезенку, а при карбункулезной форме — место поражения.

19

При подозрении на сибирскую язву вскрывать трупы запрещается. Для исследования от трупа животного берут кровь из надреза уха,

периферических сосудов или отрезают и отсылают в лабораторию ухо.

Если подозрение на сибирскую язву появилось в процессе вскрытия трупа, вскрытие тотчас же приостанавливают и для исследования посылают ухо, как указано ниже.

Подозрение на заболевание сибирской язвой свиней обычно возникает при наличии опухоли в области шеи. Если подозрение возникло во время вскрытия трупа свиньи, то дальнейшее вскрытие прекращают, а для бактериологического исследования берут участки отечной соединительной ткани, заглоточные лимфатические узлы.

Место надреза предварительно тщательно дезинфицируют и после взятия крови прижигают огнем или раскаленным металлическим предметом. Кровь наносят на стекло толстым слоем и высушивают на воздухе без дополнительной фиксации.

Ухо отрезают с той стороны, на которой лежит труп. Предварительно его туго перевязывают шпагатом у основания в двух местах и отрезают между перевязками. Не снимая шпагата, отрезанное ухо завертывают в чистую тряпочку или марлю, пропитанную 3%-ным раствором карболовой кислоты,

а затем обертывают целлофаном, полиэтиленовой пленкой или пергаментной бумагой и помещают в герметически закрытую посуду. Место отреза уха на трупе прижигают огнем.

Для исследования на сибирскую язву кожевенного сырья реакцией преципитации посылают кусочки кожи величиной 5х5 см в порядке,

предусмотренном “Указаниями по ветеринарно-санитарной обработке заготовляемого кожевенного и мехового сырья.

20