Правила отбора и пересылки патологического материала для лабораторного исследования на инфекционные болезни. Учебное пособие

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

А.И. Трубкин, Т.М. Закиров, Г.С. Фролов

ПРАВИЛА ОТБОРА И ПЕРЕСЫЛКИ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ

ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НА ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

Учебное пособие

Казань

2021

УДК 619:616:001.891.53

ББК 48.7-322я73 Т77

Печатается по решению Ученого совета факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ (протокол № 6 от 22.11.2021г.)

Авторы-составители:

Трубкин Анатолий Иванович – кандидат ветеринарных наук, доцент кафедры эпизоотологии и паразитологи;

Закиров Тагир Мунирович – кандидат биологических наук, старший преподаватель кафедры эпизоотологии и паразитологии;

Фролов Геннадий Сергеевич – кандидат сельскохозяйственных наук, ассистент кафедры эпизоотологии и паразитологии.

Рецензенты:

Исхаков Г.М. – кандидат ветеринарных наук, главный ветеринарный врач по лечебно–профилактической и противоэпизоотической работе ГБУ ГВО г.Казани;

Залялов И.Н. – доктор ветеринарных наук, профессор кафедры анатомии, патологической анатомии и гистологии ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ.

Трубкин А.И.

Правила отбора и пересылки патологического материала для лабораторного исследования на инфекционные болезни: учебное пособие/ А.И. Трубкин, Т.М. Закиров, Г.С. Фролов. – Казань: ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ, 2021. – 94 с.

В учебном пособии даны правила отбора и пересылки патологического материала для бактериологических исследований. Учебное пособие написано на основе современных нормативных и директивных документов Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Татарстан по лабораторным исследованиям.

Предназначено для специалистов государственной ветеринарной службы, работников ветеринарных лабораторий, а также для сотрудников научно-исследовательских ветеринарных учреждений, студентов и преподавателей высших учебных заведений.

УДК 619:616:001.891.53 ББК 48.7-322 я 73

©А.И. Трубкин, Т.М. Закиров, Г.С. Фролов, 2021

©ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ, 2021

2

3

ВВЕДЕНИЕ

В условиях крупных специализированных хозяйств, когда на ограниченной территории концентрируется большое поголовье продуктивных животных, резко увеличивается опасность распространения заразных болезней, особенно вирусной природы. Для предупреждения заноса в хозяйства бактериальных, вирусных болезней необходимо хорошо знать отдельные звенья эпизоотического процесса, во время предотвратить проявление болезни, используя последние достижения науки и передового опыта. При появлении болезни важно своевременно и точно поставить диагноз для того, чтобы организовать рациональное лечение, предупредить распространение инфекции. В табл. 1 приведены наиболее распространенные заболевания животных и птицы.

Известно около 100 заболеваний зооантропонозной природы.

Зооантропонозные инфекции – это заболевания общие для животных и человека, этими болезнями (зооантропонозами) люди заражаются от животных.

4

При патологоанатомическом вскрытии трупа животного очень важно обнаружение видимых изменений в органах и тканях. Однако при вскрытии визуально не всегда удается определить причину гибели животного. Поэтому лабораторные исследования патологического материала проводятся в комплексе с микроскопическим, бактериологическим, биологическим,

серологическим и гистологическим методами. Своевременно отбирают патматериал из органов, тканей, характерных для инфекционных болезней.

Для правильного достоверного заключения о болезни отбирают патматериал от трупов нелеченых животных.

Вместе с материалом на все виды исследования обязательно посылают сопроводительное письмо с указанием, - какой материал, от какого животного и для каких лабораторных исследований пересылается.

Указывают предполагаемый диагноз и краткая характеристика эпизоотического состояния хозяйства, данные о количестве заболевших и павших, результаты клинико-анатомических исследований.

Всегда врач должен иметь ввиду основные заповеди профилактики болезни: 1) не заразить самого себя и людей; 2) не инфицировать при вскрытии окружающую внешнюю среду.

Нарушение этих принципов может привести, к тяжким последствиям вплоть до заболевания и смерти людей, к массовой заболеваемости и гибели животных.

5

ГЛАВА I. ОТБОР ПАТОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ

ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ

БОЛЕЗНЕЙ

Отбор проб, упаковка и пересылка материала проводятся в строгом соответствии с правилами, предусмотренными ветеринарным законодательством. При подозрении на отравление обязательно направлять трупный материал для химических, а в случае необходимости, для гистологического и бактериологического исследования.

Особенности патологоанатомического вскрытия:

1)тщательный наружный осмотр трупа;

2)естественных отверстий;

3)слизистых оболочек;

4)ротовой, грудной, брюшной полостей;

5)содержимого разных отделов пищеварительного тракта с определением его объёма или массы, степени густоты, общего вида,

цвета, запаха, реакции.

Одновременно отмечают макроскопические изменения глотки и пищевода, внутренних органов, слизистых и серозных оболочек,

лимфоузлов, мочевого пузыря, головного мозга. Пробы материала отбирают в химически чистую сухую стеклянную посуду с притёртыми стеклянными,

корковыми пробками. Для химического исследования в отдельных банках направляют по 0,5 кг: часть желудка со средней пробой содержимого, часть тонкого и толстого кишечника с содержимым (перевязанным с обеих сторон), часть печени с желчным пузырём, одну почку, мочу, скелетную мускулатуру. В некоторых случаях дополнительно посылают часть кожи с подкожной клетчаткой и мышцами, наиболее полнокровную часть лёгкого,

трахею, часть сердца, селезёнки, головного мозга и кровь. От мелких животных и птиц посылают целые органы или трупы. Иногда с целью судебной экспертизы проводят эксгумацию. В этом случае для исследования

6

направляют сохранившиеся внутренние органы до 1 кг, скелетную мускулатуру до 1 кг, землю под трупом и над трупом 0,5 кг.

При жизни животных отбирают пробы рвотных масс, мочу, кал,

содержимое желудка, полученное с помощью зонда, корма и все подозреваемые вещества.

Материал, взятый для химического исследования, не следует обмывать и консервировать. Если отправка его задерживается или на пересылку требуется 3-5 дней разрешается залить его спиртом-ректификатом в соотношении 1: 2, при этом пробу спирта 50 мл посылают вместе с патматериалом в отдельной посуде. Поверх пробки банку обёртывают чистой бумагой, обвязывают тонким шпагатом, концы которого припечатывают сургучной печатью. На каждую банку наклеивают этикетку, где записывают характер материала, его массу, вид и кличку животного, дату падежа и вскрытия трупа животного, какое отравление подозревается. Материал

(сколько банок с и что в каждой банке) немедленно отправляется в лабораторию. С нарочным одновременно отправляют и посылают в запечатанном конверте почтой или с нарочным сопроводительное письмо с подтверждённой формой, копию истории болезни и акта вскрытия. В

сопроводительном письме указывают вид кличку пол и возраст животного.

Сопроводительный документ подписывает ветеринарный врач или другое должностное лицо, направляющее пробы на исследование. Лаборатория выдаёт расписку о приёме проб с указанием времени получения, целостности упаковки и печати. В копиях истории болезни животного особое внимание уделяют анамнестическим данным, характеру клинических признаков отравления и применённому лечению. В копии акта вскрытия подробно описывают характерные патологоанатомическое изменения.

Правила отбора материала, способы консервирования материала.

При подозрении на какую-либо инфекционную болезнь патологический материал берут у клинически больных животных. В зависимости от вида инфекции берут соответствующий специфический для данной болезни

7

материал. В качестве патологического материала для пересылки в лабораторию могут служить: кровь, различные истечения из естественных отверстий, слизь, гной, экссудат, моча, фекалии, молоко у лакирующих животных, соскобы и мазки с видимых слизистых оболочек, плод, плодная жидкость, патологические новообразования кожи и т.д.

Кровь у крупных животных, овец и коз берут из яремной вены до кормления животных. Шерсть на месте взятия крови выстригают, кожу дезинфицируют. Кровь берут в стерильную пробирку по стенке, пробирку закрывают ватной пробкой и держат вертикально. У свиней кровь берут из уха (иглой или шприцом) или из кончика хвоста, у птиц из вены крыла или гребешка. Взятую кровь выдерживают около часа при 30-35оС для свертывания сгустка, а сыворотку отделяют в другую стерильную пробирку пути отстаивания пипеткой. Если лаборатория расположена близко, то свернувшуюся кровь отправляют без отделения сгустка. Сыворотка крови должна быть доставлена в лабораторию в течение первых суток, а в исключительных случаях не позже 3-х дней взятия крови. При пересылке сыворотки на большие расстояния, особенно в жаркую погоду, ее необходимо консервировать. Сыворотку можно консервировать путем высушивание на фильтровальной бумаге размеров 5 х 5 см в количестве 0,4

мл и выдерживают при комнатной температуре до высыхания. Каждую пробу маркируют простым карандашом. Замораживание сыворотки крови не допускается, при отдельных исследованиях (лептоспироз) следует посылать цитированную кровь, ее смешивают 1:2 с 1,5 %-м раствором лимоннокислого натрия. Кал, мочу, пробы молока берут в стерильные стаканы, укупоренные пергаментной бумагой. Различные истечения, соскобы со слизистых оболочек берут либо стерильными марлевыми тампонами, либо шпателем в стерильные стаканы или флаконы в отдельности от каждого животного.

Флаконы хорошо закрывают резиновыми пробками и маркируют. Кожные новообразования осторожно берут пинцетом или шпателем, или отделяют ножницами и помещают в стерильные флаконы.

8

Специалист, направляющий материал для исследования, обязан соблюдать условия консервирования, упаковки проб, обеспечить сохранность их и безопасность для лиц, получающих материал. Материал отбирают, учитывая цель исследования, патогенез болезни (входные ворота,

места локализации, пути распространения и выведения возбудителя из организма) и тропизм - способность микроорганизмов поражать определенные органы и ткани.

Тщательное соблюдение порядка и условий отбора, хранения,

транспортировки материала - требования к температурному режиму, времени доставки, первичной пробоподготовки и т.д. - способствует повышению достоверности результатов лабораторных исследований.

Патологический материал необходимо брать стерильными инструментами в стерильную посуду, не содержащую клеток живых или убитых возбудителей и их фрагментов. Обычно применяемые методы стерилизации (кипячение, автоклавирование и т.д.) недостаточны для разрушения ДНК. После автоклавирования лабораторную посуду дополнительно выдерживают в течение 2 ч в сухожаровом шкафу при температуре не ниже 18оС или обрабатывают в течение 1-2 часов: 1 н.

раствором соляной кислоты, 10 %-м раствором гипохлорита натрия или хлорамина Б, смесью концентрированной серной кислоты с двухромовокислым калием K2Cr2O7 (хромпик). Затем промывают дистиллированной водой.

Патологический материал отбирают не позднее двух часов с момента убоя или гибели животного. Материал упаковывают в отдельные пакеты с номерами, составляют направление, в котором указывают дату взятия и условия хранения материала до момента доставки в лабораторию.

Температура является определяющим фактором, влияющим на сохранность возбудителя во время транспортировки.

Следует избегать колебаний температуры, особенно резких ее перепадов,

недопустимо повторное оттаивание и замораживание. Недопустимо

9

замораживание образцов цельной крови, молока, фекалий. Для транспортировки материала целесообразно использовать специальные транспортные среды, разработанные и рекомендованные производителями наборов реагентов.

1.1.Отбор патологического материала для посмертной

диагностики инфекционных болезней

Патологический материал берут в ходе вскрытия трупа животного.

Простые исследования в ходе вскрытия врач может провести сам, если имеется соответствующее оборудование. Но чаще всего патологический материал для исследования отправляют в лабораторию. Для лабораторного исследования можно правильно взять и законсервировать материал или отправить его для исследования в свежем виде.

В качестве патматериала для лабораторного исследования берут: кусочки кожи слизистых оболочек, трубчатую кость, головной, спинной мозг,

кусочки паренхиматозных органов, лимфатические узлы, пробы грудной и брюшной жидкости, изолированный лигатурами отрезок кишечника и т.д.

Пробы из каждого органа помещают в отдельную посуду и маркируют.

Однако в каждом случае необходимо брать тот материал, который характерен для постановки диагноза на данную болезнь.

На бактериологическое исследование посылают отдельные органы, части органов, кости или целые трупы мелких животных с нарочным. Патматериал должен быть завернут в мешковину, смоченную дезраствором, хорошо упакован в плотный деревянный или металлический ящик, выстланный полиэтиленом. Целые трупы или органы отправляются для исследования в стеклянных банках, металлических ведрах или банках с крышками.

В случаях, когда из-за дальности расстояния в свежем виде материал доставить невозможно, его консервируют в 30 %-м водном растворе глицерина.

10