Микробиология. В 2 частях. Ч.2. Учебное пособие

Клинически чувствительными являются бактерии (с учетом параметров, полученных in vitro), если при лечении стандартными дозами антибиотика инфекций, вызываемых этими микроорганизмами, наблюдают хороший терапевтический эффект. К резистентным (устойчивым) относят бактерии, когда при лечении инфекции, вызванной этими микроорганизмами, нет эффекта от терапии даже при использовании максимальных доз антибиотика. Такие микроорганизмы имеют механизмы резистентности.

4. ИСТОЧНИКИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ЗАРАЖЕНИЯ КОСМЕТИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ И ТРЕБОВАНИЯ

КПАРФЮМЕРНО-КОСМЕТИЧЕСКОЙ ПРОДУКЦИИ

4.1.Источники микробиологического загрязнения

иантимикробная защита косметической продукции

На антимикробную защиту косметической продукции влияют использование химических консервантов, характеристики продукции, конструкция упаковки и процесс производства.

Источниками заражения косметических средств могут быть зараженное микроорганизмами сырье, неблагоприятные условия производства, а также условия пользования косметикой. Производство косметической продукции должно происходить в стерильных условиях, при которых полностью исключается попадание микробов из окружающей среды. Для этого необходимо создание оптимальных условий производства:

−все сырье проверяют на содержание микроорганизмов;

−емкости, используемые для приготовления составов, подлежат стерилизации;

−используемую воду стерилизуют перед употреблением;

−при изготовлении составов соблюдают максимальную чистоту (спецодежду меняют ежедневно, используется автоматическая и герметичная расфасовка);

−в рецептуре используют разрешенные к применению консер-

ванты.

Особенно важно соблюдение стерильности для косметики в ампулах, средств для детей и декоративной косметики для глаз.

61

Порошки (тальк, крахмал), как правило, содержат споры различных микроорганизмов. Большинство восков и эмульгаторов, растительных и животных экстрактов, протеинов, минеральных солей, входящих в состав косметических средств, являются питательной средой для многих микроорганизмов. Биологически активные добавки, применяемые в косметике, способны стимулировать рост бактерий и грибов. Плохо очищенная вода также может стать источником микробного заражения косметики.

В производстве косметических средств не рекомендуется оставлять в оборудовании моющие растворы, в которых могут развиваться микроорганизмы. Обязательным является применение антисептиков. Банки и флаконы, предназначенные для упаковки косметических изделий, должны быть хорошо промыты раствором антисептика.

Консерванты широко применяются в косметических средствах и играют основную роль в поддержании их безопасности и стабильности свойств. Меры по консервации гарантируют микробиологическую стабильность продукта. Благодаря этим мерам попавшие в продукт микроорганизмы не размножаются и не могут нанести вред самому продукту и его потребителям.

Для размножения микроорганизмов нужна вода, поэтому средства с высоким содержанием воды, такие как тушь, требуют большего количества консервантов, чем средства с низким ее содержанием, такие как тени для век. Консерванты удлиняют срок годности косметических продуктов, однако некоторые из них сами являются наиболее частыми причинами развития чувствительности кожи и аллергических реакций.

Натуральные консерванты – это безопасные компоненты косметических средств. Наиболее часто используемые природные консерванты: мед, пчелиный воск, прополис, поваренная соль, винный уксус и этиловый спирт, экстракты некоторых растений, базовые и эфирные масла.

Синтетические консерванты – это искусственно синтезированные вещества. Они препятствуют размножению патогенных микробов, но в то же время угнетают нормальную микрофлору кожи.

Консерванты, разрешенные к применению в странах Европейского Союза, США и Японии: парабены, в том числе метилпарабен, пропилпарабен, этилпрабен, бутилпарабен, изопропилпарабен, изобутилпарабен; бензиловый спирт, феноксиэтанол, хлоргексидин, хлорфенезин, дегидроацетовая кислота, сорбиновая кислота.

62

Парабены – это сложные эфиры парагидроксибензойной кислоты. Они применяются в косметической, фармацевтической и пищевой промышленности, обладают противогрибковым и антибактериальным действием. Больше всего применяется парабенов в изделиях с жирной и жидкой текстурой, содержащих множество активных или быстро распадающихся компонентов. Чаще всего это помады, тональные средства, кремообразные тени, румяна, кремы, шампуни и маски для волос.

Формальдегид препятствует образованию плесени и росту бактерий в косметике. Чаще всего в косметике присутствуют релизеры формальдегида, такие как: Imidazolidinyl urea (имидазолидинил-мочевина), Diazolidinyl urea (диазолинидил-мочевина), DMDM hydantoin (ДМДМгигантоин), Sodium hydroximethyl glycinate (содиум гидроксиметилгл-

цинат), 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane (5-бромо-5-нитро-1,3-диоксан, бронидокс), 2-bromo-5-nitropropane-1,3-diol (2-бромо-2-нитропропан-1,3-

диол, бронопол), Methenamine (метенамин), Quaternium-15 (кватериний-

15), Benzylhemiformal (бензилгемиформал).

Косметика, в которой встречается формальдегид: шампунь, кондиционер для волос, пена для душа, увлажняющий крем для лица и тела, лосьон для лица и тела, лак для ногтей, тушь для ресниц.

Бензойная кислота должна быть использована в концентрации 0,2–0,4 %. Применение бензойной кислоты эффективно против дрожжей, грибов и бактерий. Устойчива к ультрафиолету и высоким температурам. Применяется в косметической и пищевой промышленности как консервант масел и жиров.

Сорбиновая кислота – белый кристаллический порошок без запаха. В косметике играет роль увлажняющего компонента, консервирующей и пластифицирующей добавки. Как и сорбит, применяется в кремах и эмульсиях различного назначения, зубной пасте, дезодорантах, декоративной косметике. Оптимальная антимикробная активность достигается при рН 4,5 и ниже. Разрешен к использованию как консервант в максимально допустимой концентрации 0,6 %.

Эфирные масла обладают противогрибковым и антибактериальным действием. Экстракт можжевельника богат эфирными маслами, смолами и восками. Содержит в своем составе минеральные соли, органические кислоты и сахар. Все эти вещества способствуют активному восстановлению клеток, оказывают очищающее, дезинфицирующее и противовоспалительное действие на кожу.

Экстракт чабреца, гликолевый экстракт с содержанием тимола, обладает увлажняющими, смягчающими, тонизирующими, заживля-

63

ющими и вяжущими свойствами. Также оказывает противомикробное действие. Часто используется в косметических средствах для комбинированной и жирной кожи.

Этиловый спирт входит в состав многих косметических средств. Он обладает антисептическими, дезинфицирующими и подсушивающими свойствами.

Коллоидное серебро – это жидкий раствор очищенной от минералов воды и микроскопических частиц серебра. Коллоидное серебро – это антибактериальный и противовоспалительный препарат натурального происхождения. Подавляет размножение бактерий и грибов, в том числе стафилококков, стрептококков, сальмонелл, синегнойных палочек, кишечных палочек, грибов рода Candida. В косметических средствах применяется для ухода за проблемной кожей. Рекомендуемая концентрация коллоидного серебра в косметических средствах составляет не более 0,5 %.

Оценку консервирования массы косметического продукта выполняют путем внесения в нее калиброванной культуры, подготовленной из соответствующих штаммов микроорганизмов. Количество выживших клеток микроорганизмов измеряют с определенными интервалами в течение 28 дней. Логарифмический показатель снижения количества клеток микроорганизмов для каждого периода времени и каждого штамма высчитывают и сравнивают с необходимыми минимальными значениями для критериев оценки.

Консерванты лишь замедляют размножение бактерий в косметическом средстве. Со временем эффективность консервантов уменьшается, и косметическое средство подлежит замене. Согласно европейским требованиям к маркировке на всех косметических средствах должен быть указан срок годности после вскрытия – время, в течение которого продукт должен быть использован после того, как он был открыт, при условии его хранения в «нормальных» условиях. Продукты маркируются символом, элементом которого является открытая крышка, с указанием числа месяцев, на протяжении которых продукт пригоден к использованию после вскрытия упаковки. Следует принимать во внимание и форму упаковки. Форма упаковки играет важную роль в оценке рисков и в определении общей антимикробной защиты косметической продукции. Форма упаковки или решение использовать многоразовую упаковку во многом влияет на выбор консерванта. Вероятность заражения микроорганизмами возрастает, если у упаковки широкое отверстие, с которым потребитель контактирует напрямую.

64

Аналогично вероятность привнесения пользователем микроорганизмов снижается, если используется одноразовая упаковка, туба с пипеткой, односторонний клапан или другие механизмы, препятствующие контакту пользователя с продуктом. Также следует учитывать соответствие размера упаковки количеству продукта, которое используется однократно, так как крупная упаковка, содержащая большее количество продукта, приводит к увеличению срока пользования, благодаря чему возрастает риск заражения. Наличие дополнительных аппликаторов, таких как кисточки, подушечки или тампоны, также оказывает влияние на антимикробную защиту.

При оценке рисков продукции, связанных с упаковкой, следует учитывать следующие факторы:

1)одноразовая или многоразовая упаковка;

2)размер упаковки;

3)способ распределения продукта;

4)предположительный срок использования;

5)имеет ли упаковка прямой контакт с пользователем;

6)герметична ли упаковка.

Обсеменение продукта бактериями во время его использования неизбежно. Условно-патогенные бактерии, часто присутствующие на коже, включают в себя бактерии видов Haemophilus, Staphylococcus, Corynebacterium, Pneumococcus и Streptococcus. Эти бактерии не явля-

ются вредными, однако они легко обсеменяют и быстро размножаются внутри самого косметического средства, вызывая инфекции кожи и глаз при последующем его применении.

Большое содержание в кремах воды, соединений углерода и азота, доступ воздуха, а также хранение косметических кремов при температуре +20 градусов и выше создают благоприятные условия для развития в них микроорганизмов, которые могут использовать в них в качестве источника углерода и энергии такие компоненты, как глицерин, пентол, моносахарат, косточковое масло, кондитерский жир, ланолин, эмульсионные воски, азулен, эвкалиптовое масло, спермаце, гидрированные спирты кашалотового жира и др. Но наибольшая концентрация числа бактерий встречается в тех средствах, которые содержат пентол, апилак и глицерин.

При неправильном хранении косметики в косметических средствах могут встречаться плесневые грибы Penicillium glaucum,

Aspergillus niger, Aspergillus glaucus, дрожжи Torula, Candida,

65

Saccharomyces, бактерии из родов Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Aerobacter aerogenes, Escherichia coli и др.

4.2.Микробиологический контроль безопасности парфюмерно-косметической продукции

При производстве косметической продукции проводится обязательный микробиологический контроль различных косметических средств. Сертификация парфюмерно-косметической продукции осуществляется в соответствии с СанПиН 1.2.681-97 «Гигиенические требования к производству и безопасности парфюмерно-косметической продукции», СанПиН 1.2.676-97 «Гигиенические требования к производству и безопасности средств гигиены полости рта» и нормативными документами на продукцию, в которых установлены обязательные требования к микробиологической чистоте продукции и производства. Правилами сертификации установлена определенная последовательность проведения испытаний. Сначала проводятся химические и микробиологические, затем токсикологические и клинические испытания.

Микробиологический контроль необходим, поскольку микроорганизмы, попадающие в косметику, не только вызывают разрушение компонентов, входящих в ее состав, но, самое главное, могут явиться причиной возникновения кожных болезней. При наличии микроорганизмов в косметическом средстве может измениться его запах, вязкость, цвет, а также произойти вспучивание или расслоение эмульсии. Развитие микроорганизмов в косметических изделиях сопровождается накоплением в них как продуктов разложения, так и соединений, синтезированных микроорганизмами в процессе их жизнедеятельности, что оказывает неблагоприятное воздействие на кожу.

Показатели микробной загрязненности устанавливаются для всех наименований жидких, кремо-, геле- и пастообразных спиртонесодержащих (с содержанием этилового спирта менее 6 %) образцов косметической продукции. В то же время такие показатели не регламентируются и не определяются в парфюмерно-косметической продукции твердой консистенции (порошкообразные, компактные формы изделий, твердые мыла) и содержащей спирты, органические растворители, перекись водорода, пропелленты (парфюмерные и дезодорантные средства, средства по уходу за ногтями, для окраски, завивки, фиксации волос и др.).

66

При микробиологическом контроле парфюмерно-косметической продукции используют стандартизованные методы микробиологического посева. Определяют следующие группы микроорганизмов: мезофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы, дрожжи, дрожжеподобные и плесневые грибы, бактерии семейства Enterobacteriaceae, бактерии вида Staphylococcus aureus, бактерии вида

Pseudomonas aeruginosa.

Критериями микробиологической чистоты косметической продукции являются:

−ОКМ – общее количество микроорганизмов в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1 г (см3) продукции;

−грибы – общее количество плесневых и дрожжеподобных (рода Candida) грибов в КОЕ в 1 г (см3) продукции;

−Enterob. – содержание бактерий семейства Enterobacteriaceae (группы кишечной палочки и сальмонелл) в 10 г (см3) продукции;

−Ps. Aerug. – содержание бактерий семейства Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка) в 10 г (см3) продукции;

−St. Aur. – содержание бактерий семейства Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк) в 10 г (см3) продукции;

−стерильность продукции.

Определение показателей микробной загрязненности проводится путем посева образцов на соответствующие среды с последующим термостатированием в соответствии с СанПиН №10-33.3-96 «Методические указания по определению нормативных показателей микробиологической чистоты косметической продукции».

Метод определения общего количества микроорганизмов основан на выявлении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов при культивировании посевов в аэробных условиях при температуре 30 градусов в течение 72 ч в пересчете их количества на 1 г (куб. см) исследуемого продукта.

Для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных бактерий выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний. Посев осуществляют глубинным или двухслойным агаровым методами.

Определение количества дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов основано на выделении и количественном подсчете всех выросших колоний микроорганизмов, типичных по макро- и/или мик-

67

роскопической морфологии, на селективной агаризованной питательной среде Сабуро при культивировании посевов при температуре 30 градусов в течение 120 ч.

Для определения количества дрожжей и плесневых грибов выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 150 колоний для дрожжей и не менее 5 и не более 50 для плесеней. Посев осуществляется глубинным или двухслойным агаровым методами.

К семейству Enterobacteriaceae относятся грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают отрицательную оксидазную реакцию, ферментируют глюкозу с образованием кислоты и восстановливают нитраты в нитриты. Бактерии выявляют с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей индентификацией выявленных бактерий по биохимическим тестам.

Бактерии Pseudomonas aeruginosa представляют собой грамотрицательные неспорообразующие палочки, которые дают положительную оксидазную реакцию, образуют проникающий в субстрат пигмент феназинового ряда, имеющий буроватый оттенок с вариантами от сине-зеленого (пиоцианин) до коричнево-красного, способны к росту при температуре 42 0С. Pseudomonas aeruginosa выявляют с помощью накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей идентификацией выявленных бактерий по биохимическим тестам.

Бактерии Staphylococcus aureus представляют собой грамположительные кокки, обладающие лецитиназной активностью, сбраживающие маннит в аэробных и анаэробных условиях или мальтозу в анаэробных условиях и дающие положительную реакцию плазмокоагуляции. Золотистый стафилококк выявляют с использованием накопительных и селективных питательных сред с дальнейшей индентификацией выявленных бактерий по биохимическим тестам.

Допустимые уровни микробной загрязненности косметической продукции следующие:

−косметические средства по уходу за губами и кожей вокруг глаз, средства для интимной гигиены, косметические средства для детей, зубные пасты, гели, порошки, жевательная резинка, средства для отбеливания зубов – ОКМ не более 100, отсутствие грибов, Enterob., Ps. Аerug., St. Aur.;

−косметическая продукция для общего употребления (средства по уходу за кожей лица и тела, для и после бритья, для мытья волос и

68

кожи головы, для принятия ванны и душа и др.) – ОКМ не более 1000,

грибы не более 100, отсутствие Enterob., Ps. Аerug., St. Аur.;

−зубные эликсиры, полоскания, таблетки – ОКМ не более 100,

грибы не более 100, отсутствие Enterob., Ps. Аerug., St. Аur.;

−косметические средства в ампульной упаковке – стерильны. Обязательному микробиологическому контролю также подле-

жит сырье природного и синтетического происхождения и другие компоненты, входящие в состав косметических средств (биологически активные вещества, ингредиенты основы – структурообразующие эмульгаторы, поверхностно-активные компоненты, солюбилизаторы, консерванты и др.).

Не подлежат обязательному микробиологическому контролю готовые средства, содержащие более 25 % этилового спирта, окислительные краски для волос и ногтей.

Тесты для самоконтроля

1. Что такое стерилизация?

А. это обработка объектов для уничтожения всех видов микроорганизмов б. это предупреждение попадания микроорганизмов в рану

в. Это комплекс мероприятий для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов г. это удаление микроорганизмов с поверхностей изделий меди-

цинского назначения

2. Дезинфекция – это:

а. предупреждение попадания микроорганизмов в рану б. комплекс мероприятий для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов

в. Комплекс мероприятий, направленных на уничтожение патогенных микроорганизмов в окружающей человека среде

г. комплекс мероприятий по борьбе с инфекцией в ране

3. Антисептика – это:

а. предупреждение попадания микроорганизмов в рану б. комплекс мероприятий по борьбе с инфекцией в ране

в. Комплекс мероприятий для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов

69

г. удаление микроорганизмов с поверхностей изделий медицинского

назначения

4. Асептика – это:

а. комплекс мероприятий по борьбе с инфекцией в ране б. обработка объектов для уничтожения всех видов микроорганизмов в. Предупреждение попадания микроорганизмов в рану

г. комплекс мероприятий для уничтожения вегетативных форм

микроорганизмов

5. Методы стерилизации:

а. химический б. физический

в. Механический

г. биологический

6. Методы стерилизации:

а. термический б. химический в. Радиационный

г. все перечисленные

7. Наиболее распространенный метод стерилизации:

а. химический б. фильтрационный в. Термический

г. радиационный

8. Термическая стерилизация включает:

а. автоклавирование б. прокаливание в огне в. Кипячение

г. все перечисленное

9. Вегетативные формы бактерий погибают при кипячении:

а. в течение 15 мин б. в течение 30 мин в. В течение 45 мин

г. в течение 60 мин

10. Стерилизация бактериологических петель проводится:

а. химическим методом б. радиационным методом в. Кипячением г. прокаливанием в огне

70