Реферирование научной литературы по специальности. Английский язык. Учебное пособие

частоты инфицированности в популяциях и для первичной диагностики инфекции. Однако этот метод малоинформативен при обследованиях детей в возрасте до 14 лет в связи с меньшей выраженностью иммунного ответа. С помощью этого метода невозможно различить прошедшую или текущую инфекцию, поэтому он не рекомендован для оценки эффективности уничтожения (эрадикации) H. pylori. Выбор оптимального метода детекции H. pylori основывается прежде всего на его экспрессности и пределе обнаружения. Исходя из этих критериев несомненными преимуществами обладают активно разрабатываемые в последнее время иммунохроматографические методы анализа. При проведении иммунохроматографии (ИХ) контакт пробы с тест-полоской инициирует движение реагентов по мембранам тест-полоски и все происходящие при этом специфические реакции, завершающиеся окрашиванием определенных ее зон. Наличие или отсутствие окрашивания позволяет сделать вывод о результатах тестирования, причем для этого вывода достаточно визуальной оценки. Таким образом, ИХ обеспечивает возможность быстрой (5–15 мин) и нетрудоемкой диагностики непосредственно на месте отбора пробы. Для документирования результатов ИХ и, при необходимости, их количественной оценки могут быть дополнительно использованы различные портативные средства видеорегистрации – как специализированные, так и серийные (сканеры, мобильные телефоны) устройства. На мировом рынке представлен широкий спектр иммунохроматографических тестов, позволяющих определять антитела к H. pylori в сыворотке крови,

41

например, фирм “ACON Laboratories”, “Diagnostic Automation”, “BD Diagnostic Systems”, “Quidel” (США), “Cypress Diagnostics” (Бельгия), “Novamed” (Израэль), “Otsuka Pharmaceutical” (Япония), “Tsatsu Medical Services” (Индонезия) и антигены H. pylori в кале фирм “Immunospec” (США), “Standard Diagnostic” (Корея), “Coris BioConsept” (Бельгия), “CerTest Biotec” (Испания) и др. Сравнительная характеристика 22 коммерческих иммунохроматографических тест-систем для обнаружения антител к H. pylori и 14 тест-систем для обнаружения антигенов H. Pylori показала, что диагностическая чувствительность и специфичность тест-систем варьировали от 85 до 100%, время определения от 2 до 20 мин и стабильность при хранении от 12 до 24 мес. Однако описания процесса разработки иммунохроматографических тестов для обнаружения H. pylori в литературе практически не представлены, за исключением статьи C. Каракуса, в которой рассматривается разработка иммунохроматографического теста для определения цитотоксина CagA, секретируемого клетками H. pylori. Следует отметить, что для эффективной диагностики востребованы высокочувствительные методы детекции H. pylori. При работе с данным микроорганизмом не используется универсальный антигенный препарат, производители тест-систем ограничиваются сведениями о минимальной выявляемой концентрации препарата, используемого ими для получения градуировочной зависимости или контроля качества. Несмотря на отсутствие данных сравнительного испытания таких стандартов, оценка с их помощью возможностей иммунохимических методов

42

достаточно информативна. Так, иммуноферментные тестсистемы разных производителей (“Eagle Biosciences”, США; “Diagnostic Automation”, США; “Arigo Biolaboratories”, Тай-

вань), реализованные с применением различных антител, обеспечивают пределы обнаружения антигенов H. pylori в диапазоне 3–50 нг/мл. Для коммерческих иммунохроматографических тестов порог детекции, как правило, не указывается. В статье C. Каракуса сообщается, что данная величина составляла 4 мкг/мл. Учитывая, что по чувствительности иммунохроматографический анализ (ИХА), как правило, уступает ИФА, представлялось оправданным в рамках разработки иммунохроматографического теста на антигены H. pylori охарактеризовать возможности снижения предела его обнаружения. С этой целью в работе был изучен подход, основанный на сочетании наночастиц золота (НЧЗ), как маркера иммунных комплексов и последующего усиления окрашивания зон связывания тест-полоски в присутствии солей серебра. Эффективность данного подхода показана в ряде работ. Так, в статье Л. Анфосси с соавт. описывается снижение предела обнаружения охратоксина А в иммунохроматографическом анализе более чем в 10 раз. C. Лиу с соавт. отмечают, что усиление с помощью солей серебра обеспечило снижение предела иммунохроматографического обнаружения возбудителей сальмонеллеза с 107 до 104 кл/мл. Использование дополнительных обработок с целью усиления окрашивания в тест-полосках для детекции H. pylori и соответствующего снижения предела обнаружения ранее не описывалось. Цель работы – разработка и характеристика иммуно-

43

хроматографической тест-системы, обеспечивающей высокочувствительное выявление антигенов H. pylori.

ПРИКЛАДНАЯ БИОХИМИЯ И МИКРОБИОЛОГИЯ, 2013, том 49, № 6, с. 606–612

Разработка иммунохроматографической тест-системы для детекции эпидермального фактора роста

Эпидермальный фактор роста (ЭФР) – одноцепочечный глобулярный белок с м.м. 6.4 кДа, состоящий из 53 аминокислотных остатков. ЭФР синтезируется преимущественно

вслюнных железах и присутствует во всех основных биологических жидкостях организма – в моче (в которой был описан как урогастрон), крови, цереброспинальной жидкости, молоке, слюне, желудочном и панкреатическом соках. ЭФР стимулирует пролиферацию различных эпидермальных и эпителиальных клеток (включая фибробласты, почечный эпителий, глиальные клетки, клетки гранулезы яичников и тиреоидные клетки), а также эмбриональных клеток, способствуя высвобождению кальция из костной ткани и резорбции костей. Действие ЭФР вносит существенный вклад в процессы заживления ран и ангиогенеза. ЭФР играет важную роль

вканцерогенезе, индуцируя в частности протоонкогены c-fos и c-myc. Повышенный уровень ЭФР в крови и моче характерен для ряда онкологических заболеваний. Показано, что блокирование ЭФР антителами, препятствуя связыванию

44

ЭФР со специфическим рецептором, тормозит развитие опухолей. Этот эффект используется в ряде разработок противоопухолевых вакцин. Так, показана эффективность вакцины CimaVax-EGF для лечения немелкоклеточного рака легкого. При этом установлено, что ее терапевтический эффект зависит от уровня ЭФР в крови пациента. На сегодняшний день в медицинской практике для определения концентрации ЭФР используются иммунохимические методы. Коммерчески доступны иммуноферментные микропланшетные наборы фирм “RnD Systems”, “eBioscience”, “RayBio”, “Invitrogen”, “Thermo Scientific”, “Abnova”, позволяющие определять при-

родный и рекомбинантный ЭФР в среде для культивирования клеток, моче, сыворотке и плазме крови в концентрациях от 1 до 1000 пг/мл. Однако иммуноферментный анализ (ИФА) в силу диффузионных ограничений требует довольно продолжительных инкубаций реагентов, вследствие чего продолжительность ИФА составляет от 2 до 4 ч. В последние годы в иммунохимическом анализе интенсивно идет замена традиционных форматов, таких как ИФА, на экспрессные тесты – иммуносенсорные, иммунохроматографические и др., позволяющие существенно (до 5–15 мин) сократить продолжительность определения и снизить его трудоемкость. Особый интерес в ряду этих методов представляет иммунохроматографический анализ (ИХА), в котором достигнуто максимальное методическое упрощение. Все необходимые для анализа реагенты предварительно наносятся на тестполоску (мультимембранный композит). После ее контакта с тестируемой жидкой пробой одновременно с движением

45

по тест-полоске впитавшейся жидкости осуществляются иммунохимические взаимодействия и формирование на определенных участках тест-полоски окрашенных зон, свидетельствующих о присутствии (а в ряде случаев – и о содержании) в пробе контролируемого соединения. Таким образом, ИХА не предполагает использования устройств и реагентов, дополняющих тест-полоску, а также каких-либо действий оператора в ходе анализа. Это позволяет проводить тестирование вне специализированных лабораторий и регистрировать его результат либо визуально, либо с помощью портативных детектирующих устройств – от видеокамеры мобильного телефона или офисного сканера до серийно производимых видеоцифровых детекторов. Иммунохроматографические тест-системы для определения ЭФР на сегодняшний день не описаны в научной литературе и не представлены на рынке как коммерчески доступные изделия. Учитывая практическую значимость контроля содержания ЭФР для онкодиагностики и терапии, целью проведенного исследования была разработка иммунохроматографической тестсистемы для определения ЭФР в водных растворах, моче, сыворотке и плазме крови. Достижение этой цели предполагало решение ряда методических задач, связанных с характеристикой взаимодействия иммунореагентов в проточной мембранной системе и оптимизации условий проведения иммунохроматографии. В настоящей статье представлены результаты, полученные при решении этих задач и характеристике разработанной тест-системы.

46

Полученные результаты свидетельствуют о возможности применения разработанной системы для детектирования ЭФР во всем физиологическом диапазоне концентраций – вплоть до 10 пг/мл. Регистрация интенсивности окрашивания аналитической зоны позволяет проводить количественное определение содержания ЭФР. Продолжительность анализа составляет всего 5 мин, причем тестирование биопроб (плазма, сыворотка, моча) не требует какой бы то ни было их предварительной подготовки. Нетривиальным результатом является универсальность тест-системы – пригодность одной и той же ее комплектации для характеристики и мочи, и препаратов крови. Впервые разработанная иммунохроматографическая система представляется перспективным аналитическим средством при диагностике онкологических заболеваний, планировании и контроле терапевтических мероприятий.

БИОЗАЩИТА И БИОБЕЗОПАСНОСТЬ

2013, № 1 (14), с. 24–27

Экспрессное иммунохроматографическое определение антибиотиков в продуктах питания

В настоящее время антибиотики широкого спектра действия используются не только для лечения инфекционных заболеваний человека, но и для профилактики и лечения заболеваний животных. Поступление антибиотиков с продук-

47

тами питания в организм человека может вызывать ряд нежелательных эффектов: дисбактериозы, развитие устойчивых форм микроорганизмов, аллергические реакции и др. Поэтому содержание антибиотиков является важным параметром при оценке безопасности продуктов питания. Для контроля антибиотиков существует широкий спектр аналитических методов, таких как микробиологическое тестирование, хроматография с масс-спектрометрической детекцией, капиллярный электрофорез и др. Особый интерес представляют иммунохимические методы анализа, что обусловлено их высокой специфичностью, чувствительностью и производительностью. В последние годы активно развиваются иммунохроматографические системы, обеспечивающие максимальную экспрессность и простоту тестирования. В этих системах все реагенты, необходимые для анализа, нанесены на мультимембранный композит (тест-полоску). Контакт тестполоски с анализируемой жидкой пробой инициирует протекание специфических взаимодействий в ходе движения жидкости по мембранам и формирование в определённых зонах тест-полоски окрашенных линий, свидетельствующих о наличии или отсутствии в пробе определяемого соединения. В статье представлены результаты разработки и характеристики экспрессного иммунохроматографического анализа (ИХА) интенсивно применяемых в животноводстве антибиотиков: хлорамфеникола (ХАФ), стрептомицина (СТР) и ампициллина (АМП).

Особенностью предложенных тест-систем является возможность с их помощью осуществлять контроль широко-

48

го диапазона молочных продуктов, что и требуют действующие нормативные документы. Показана принципиальная возможность использования тест-систем для определения антибиотиков в образцах мяса. Однако для обеспечения максимальной полноты выявления антибиотиков необходима адаптация пробоподготовки к разным видам продуктов. На основании данных, полученных при разработке иммунохроматографических тестов на индивидуальные антибиотики, была изготовлена тест-система для одновременного определения хлорамфеникола, стрептомицина и ампициллина. Показано, что рабочие диапазоны и пороговые уровни определения антибиотиков для мультиплексной тест-системы такие же, как и для монотестов. При этом мультиплексный формат обеспечивает рост производительности и снижение стоимости анализа. Применение предлагаемых иммунохроматографических тест-систем для контроля содержания антибиотиков позволит принимать оперативные технологические решения при производстве продуктов питания, осуществлять широкий мониторинг готовой продукции и таким образом предотвращать риски для здоровья населения.

49

ПРИЛОЖЕНИЕ №4

ABSTRACTS, SUMMARIES, REWIEWS, RESUMÉ

СТАНДАРТИЗИРОВАННЫЙ НАБОР ЯЗЫКОВЫХ СРЕДСТВ ОФОРМЛЕНИЯ КОМПОЗИЦИОННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ВТОРИЧНОГО НАУЧНОГО ТЕКСТА

Научные тексты обладают многоуровневой организацией. В зависимости от жанровой принадлежности им свойственны типизированные схемы расположения содержательной информации.

Основные письменные жанры научной речи (первичные – научная статья, монография, диссертация, и вторичные – реферат, аннотация, резюме, рецензия, научный отзыв, обзор) имеют определенную, свойственную им композиционную организацию, то есть порядок расположения смысловых частей текста, а также более или менее стандартизированный набор языковых средств оформления перехода от одной содержательной части к другой.

TEXT ORGANIZATION

Compostional formulas, links and connectors:

В целях обеспечения последовательности и логичности изложения в процессе создания вторичного текста (переска-

50