- •1) Микроорганизмы – важнейшие объекты селекции продуцентов
- •2) Цели и задачи селекции продуцентов
- •3) Основные направления развития селекции продуцентов
- •4) Принципы подбора исходного штамма для селекции
- •5) Требования предъявляемые к промышленным штаммам
- •6) Подготовка исходного штамма к селекции
- •7) Мутагенез in vivo. Типы мутагенов, используемых при индуцированном мутагенезе.
- •8) Способы отбора мутантов
- •9) Методы повышение продуктивности мутантов
- •10) Получение рекомбинантов у грибов и дрожжей методом гибридизации.
- •11) Конъюгация у бактерий
- •12) Создание систем конъюгационного переноса плазмид
- •13)Трансдукция как метод создания рекомбинантных геномов
- •14)Способы сближения att-сайтов
- •15) Трансформация бактерий фаговыми и плазмидными днк.
- •16) Особенности трансформации у дрожжей
- •17) Мобильные генетические элементы эу- и прокариот.
- •Мобильные генетические элементы эукариот
- •18) Характер мутаций, вызываемых мгэ
- •19) Транспозонный матугенез
- •20) Векторы, используемые для введения транспозонов
- •21) Методы получения рекомбинантной днк
- •22) Протопласты и сферопласты микрорганизмов
- •23)Способы получения протопластов у грамположительных, грамотрицательных бактерий, грибов и дрожжей. Отредачить
- •Подавление синтеза
- •24)Метод слияния протопластов и его использование для получения рекомбинантов у бактерий, грибов и дрожжей
- •25) Характеристика ферментов, используемых в генной инженерии
- •26) Векторные молекулы днк
- •27) Определение вектора. Требования, предъявляемые векторам.
- •28) Плазмидные векторы, используемые для клонирования в клетка прокариот.
- •29) Векторы для клонирования крупных фрагментов днk
- •30) Космиды. Особенности клонирования генов с помощью космид.
- •31) Фазмиды. Характеристика фазмидных векторов
- •32. Векторы на основе днк нитевидных фагов
- •33. Создание геномной библиотеки
- •34. Скрининг полученной коллекции???
- •35. Скрининг с помощью гибридизации, иммуннологический скринин, скрининг по активности белка
- •36. Селекция продуцентов ак
- •37. Характеристика основных групп микроорганизмов-продуцентов аминокислот редачить
- •38. Основные тенденции в развитии селекции продуцентов аминокислот
- •39. Селекция продуцентов аминокислот семейства аспарагиновой кислоты редачить
- •40. Селекция продуцентов ароматических аминокислот
- •41. Селекция продуцентов аминокислот семейства глутаминовой кислоты
- •42. Селекция продуцентов пролина и гистидина
- •43. Селекция продуцентов ферментов.
- •44. Преимущества использования микроорганизмов для создания продуцентов ферментов
- •45. Основные тенденции в развитии селекции продуцентов ферментов
- •46. Важнейшие классы ферментов, получаемые ферментов, получаемых микробиологическим способом, их основные продуценты. Способы создания продуцентов ферментов.
- •47. Мировое производство ферментов, основные производители
- •48. Селекция продуцентов полисахаридов(?)
- •49. Использование полисахаридов, получаемых микробиологическим способом
- •50. Тенденции в развитии селекции продуцентов полисахаридов
- •51. Селекция продуцентов липидов
- •52. Характеристика микробных липидов
- •53. Основные продуценты липидов среди бактерий, грибов и дрожжей
- •54. Селекция продуцентов липидов у дрожжей
- •55. Селекция продуцентов органических кислот
- •56. Селекция продуцентов витаминов
- •57. Характеристика микробных витаминов
- •58. Использование бактерий, грибов и дрожжей для создания витаминов.
- •59. Селекция продуцентов фитогормонов
- •60. Селекция продуцентов антибиотиков.
- •61. Разнообразие антибиотических веществ, продуцируемых микроорганизмами.
- •62. Методы создания продуцентов антибиотиков и способы повышения их продуктивности редачить
62. Методы создания продуцентов антибиотиков и способы повышения их продуктивности редачить
Нельзя сказать, что настоящее время традиционные подходы в селекции продуцентов антибиотиков (мутагенез и длительный ступенчатый отбор) исчерпали себя полностью, но они постепенно вытесняются генно- инженерными методами, а также принципиально новым методом – методом мутасинтеза.
В целях создания новых более продуктивных штаммов должны быть решены следующие задачи:
Повышение эффективности традиционного мутагенеза за счет его направленности.
Создание клонирующих векторов на основе трансмиссивных плазмид или фагов.
Разработка методов обнаружения внехромосомной ДНК у продуцентов.
Создание рекомбинантного генома путем слияния протопластов продуцентов и путем их трансформации.
Получение новых антибиотиков на основе мутасинтеза.
Повышение эффективности мутагенеза при селекции продуцентов антибиотиков современными методами может быть достигнуто за счет уменьшения специфической мишени для мутагена.
В связи с этим ключевое значение в современной селекции продуцентов антибиотиков придается конструированию клонирующих векторов на основе трансмиссивных плазмид и фагов. О существенной роли плазмид в антибиотикообразовании свидетельствуют данные по продуцентам аминогликозидов, тетрациклинов, хлорамфеникола, цефамезина и др.
Большой вклад в селекцию продуцентов антибиотиков внесло применение метода слияния протопластов. Особенно эффективно он используется при получении полиауксотрофных мутаций, а также при слиянии геномов близкородственных штаммов.
Метод слияния протопластов используется в основном на работе с продуцентами β-лактамных антибиотиков.
Что касается нового направления в получении антибиотиков – мутасинтеза, то следует отметить, что это метод, при котором развивается резистентность продуцента к химическим аналогам уже полученных антибиотиков, в результате чего нарушаются регуляторные механизмы антибиотикообразования. Генетики и химики здесь действуют однонаправленно. На первом этапе генетики получают из продуцентов мутанты, которые для образования антибиотиков требуют специфических предшественников. Химики синтезируют разнообразные аналоги фрагментов молекулы антибиотика.
Огромное значение для максимального образования антибиотиков имеет подбор благоприятных условий культивирования. При разработке состава сред должно учитываться то обстоятельство, что азот усваивается многими продуцентами антибиотиков только в окисленной форме (в виде нитратов). Концентрация фосфора в среде строго видоспецифична и для продуцентов тетрациклина, например, не должна превышать 10 %, стрептомицина – 15 %, а новобиоцина и грамицидина – 20 %.