Качественные реакции на гормоны.

Реактивы и оборудование: 1. 10% раствор NaOH; 2. 1% раствор CuSO₄; 3. HNO₃ - (конц.); 4. (NH₄)OH - (конц.). 5. 1 % раствор Pb(CH₃COO)₂; 6. 1 % раствор FeCl₃; 7. 1 % раствор йодата калия (KIO₃); 8. 10% раствор CH₃COOH; 9. 1% раствор сульфаниловой кислоты; 10. 5% раствор NaNO₂; 11. 10% раствор Na₂CO₃; 12. 10% раствор сахарозы; 13. H₂SO₄ - (конц.); 14. Хлороформ; 15. Инсулин; 16. Раствор адреналина, 0,1% разведение (1:10); 17. Тиреоидин; 18. Спиртовой раствор фолликулина или кортизона-ацетата; 19. Пробирки; 20. Водяная баня; 21. Штативы для пробирок.

1. Качественные реакции на инсулин.

Цветные реакции на инсулин, которые доказывают его белковую природу: а) биуретовая реакция; б) ксантопротеиновая реакция на циклические аминокислоты (фенилаланин, тирозин и триптофан);

в) реакция на слабосвязанную серу (цистеин, цистин). См. занятие «Цветные реакции на белки».

1. Биуретовая реакция

Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить 5 капель 10% раствора едкого натра и 1 каплю (избыток мешает чтению результатов реакции!!!) 1% раствора сернокислой меди. Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

2. Ксантопротеиновая реакция

Ход работы: к 5 каплям инсулина добавить З капли концентрированной азотной кислоты; образуется осадок белка, который при осторожном нагревании на водяной бане окрашивается в желтый цвет. К охлажденной пробе (!!!) добавляют избыток аммиака - появляется оранжевое окрашивание вследствие образования хиноидного производного тирозина.

3. Реакция Фоля на слабосвязанную серу

Ход работы: вначале денатурируют белок, добавляя к 5 каплям раствора инсулина 1% раствор уксуснокислого свинца по каплям до выпадения осадка. Затем также по каплям добавляют 10% раствор NaOH до полного просветления жидкости (растворение осадка денатурированного белка). Пробирку нагревают в кипящей водяной бане, пока раствор не окрасится в темный (черный) цвет за счет образования осадка сульфида свинца.

2. Качественные реакции на адреналин.

Обусловленные наличием кольца пирокатехина в его молекуле.

1. Реакция с хлорным железом: адреналин, в молекулу которого входит фенольное кольцо, образует с хлорным железом соединение типа фенолята.

Ход работы: в пробирку внести 2 - 3 капли раствора адреналина (1:10) и 1 каплю 1% раствора хлорного железа. Жидкость окрашивается в изумрудно-зеленый цвет, переходящий при стоянии в желтый.

2. Реакция с йодатом калия (KIO₃): продукты хиноидного окисления адреналина окрашивают раствор адреналина в цвета от розового до бурого. В условиях опыта адреналин окисляется а пигмент - галохром, имеющий красно-фиолетовую окраску.

Ход работы: в пробирку внести 2 - 3 капли раствора адреналина (1:10), 2 капли 1% раствора йодата калия и 2 капли 10% раствора уксусной кислоты. При легком нагревании появляется красно-фиолетовое окрашивание.

3. Диазореакция: при взаимодействии адреналина с диазореактивом образуется азокраситель красного цвета.

Ход работы: в пробирку внести З капли 1% раствора сульфаниловой кислоты, 3 капли 5% раствора азотистокислого натрия, 5 капель адреналина (1:10) и 3 капли 10% раствора углекислого натрия. Жидкость окрашивается в красный цвет.