I. Анализ зависимости светорассеивания эритроцитарной суспензии от концентрации клеток

Из концентрата эритроцитов (который нужно получить у преподавателя) приготовить суспензию этих клеток в физиологическом растворе (0,9%^растворNaCl) такой концентрации, чтобы величинаТ_о, измеренная на КФК-2, составляла около 50%. Обычно для этого необходимо разбавить исходный концентрат в 200-400 раз. Точное разведение концентрата подбирается эмпирически. Приготовив суспензию сТ_о50%, получить ее разведения в 2, 4, 6, 8 и 10 раз. Объем образца каждого разведения должен составлять 5 мл. Измерить величиныТ_о всех образцов (если исходная суспензия сТ_о50% готовилась заново, то следует и ее светопропускание измерить повторно). С использованием программы «MicrosoftExel» построить зависимостьТ_о и измеряемой оптической плотности суспензии (D_o = -lgT_o) от относительной концентрации эритроцитов, считая концентрацию клеток в образце сТ_о50% за условную единицу. Сопоставить полученные концентрационные зависимости друг с другом. По зависимостиD_o=f(C)определить величинуКдля используемого вами турбидиметра и принятых условий измерений.

II. Анализ кинетик гемолиза эритроцитов кролика под действием хлорамина в.

1. Приготовить по 1 мл растворов хлорамина В в физиологическом растворе с концентрациями 1,5; 2, 2,5% и 3%^.

^Примечание: Процентной концентрацией называется количество растворенного вещества в граммах, содержащееся в 100 граммах раствора.

2. Зарегистрировать кинетики гемолиза в образцах эритроцитарной суспензии с Т_о50%, вызвав его добавлением растворов хлорамина В указанных концентраций.

3. С помощью программы «MicrosoftExel» построить полученные кинетики в виде соответствующих зависимостейJ_пп = f(t). По этим зависимостям рассчитать величины периодов полураспада эритроцитов (₅₀, время, за которое с момента введения индуктора гемолиза распадается 50% присутствующих в суспензии клеток) в каждом образце.Обратите внимание: отсчет времени при определении₅₀начинается с момента введения хлорамина В в образец. Построить зависимость скорости гемолизаV_Г = 1/₅₀ от конечной концентрации хлорамина В в исследуемом образце. Эмпирически подобрав тип апроксимации полученной зависимости, определить ее аналитический вид и величины коэффициентов в полученном уравнении.

Приложение 1

Работа с аналогово-цифровым преобразователем ЛА-70

Аналогово-цифровой преобразователь ЛА-70 представляет собой электронную, встраиваемую в персональный компьютер, плату, преобразовывающую аналоговые электрические сигналы в цифровую форму. Отличается от других аналогичных устройств высоким входным сопротивлением и достаточно большим коэффициентом усиления, что позволяет подключать его к нагрузочным сопротивлениям фотодетекторов без сопрягающих устройств, напрямую. Для работы с ЛА-70 используется управляющая программа, устанавливаемая на персональный компьютер. Полученная с помощью ЛА-70 информация сохраняется в специально создаваемом файле, с которым далее можно работать в программе «MicrosoftExel».

Порядок работы с управляющей программой следующий:

1. Включить персональный компьютер.

2. После загрузки «Windows» запустить программу «MicrosoftExel». Открывшийся чистый лист сохранить как файл с расширением «.csv». Разделители – запятые. При сохранении следует указать место расположения (адрес) файла и его название. Этот файл будет местом сохранения данных.

3. Закрыть программу «MicrosoftExel».

4. Запустить управляющую программу ЛА-70, «щелкнув» двойным кликом мыши на ее значок, расположенный на рабочем столе.

5. В открывшемся окне программы задать частоту регистрации аналогового сигнала в миллисекундах (кнопка «Период опроса»). Этот параметр определяет количество точек, которое будет получено и сохранено. При слишком малом числе точек регистрируемая зависимость будет обладать неблагоприятным соотношением «сигнал/шум», а при слишком большом – с полученным файлом данных будет неудобно работать вследствие его большого размера. Введя нужный показатель, подтвердите его правильность кнопкой «Так».

6. Задать продолжительность регистрации сигнала в секундах (кнопка «Время записи»). Поскольку предполагается регистрация гемолиза, являющегося достаточно продолжительным процессом, продолжительность регистрации сигнала не должна быть меньше 1800 секунд (т.е. 30 минут). Введя нужный показатель, подтвердите его правильность кнопкой «Так».

7. Указать адрес файла, в котором требуется сохранять полученную информацию (кнопка «Файл данных»). Имейте в виду, что при регистрации каждой новой зависимости требуется создание нового файла (см. пункт 2) и указание его адреса в управляющей программе. В противном случае данные будут сохраняться в уже указанном файле, а ранее содержавшаяся в нем информация будет уничтожена.

8. Неизменяемые настройки:Фотоколориметр КФК подключен к 1-му каналу ЛА-70. В меню «Каналы» поэтому только этот канал должен быть отмечен «флажком». Не следует также менять электронные настройки платы (меню «Установки» в верхнем левом углу окна управляющей программы). Нельзя удалять «флажки» в меню «Вывод данных» - в противном случае данные регистрироваться и сохраняться не будут.

9. Включив КФК-2, откройте крышку кюветного отделения.

10. Запустите регистрацию сигнала, нажав кнопку «Старт» в окне управляющей программы. Регистрируйте сигнал не менее 1 минуты. В имеющейся системе координат должна появиться запись сигнала в режиме реального времени. Если запись не появляется, перезапустите управляющую программу и проверьте ее настройки (п.п. с 4-го по 8-й настоящего описания). Повторите запуск регистрации. Закройте крышку кюветного отделения КФК-2 и убедитесь, что регистрируется изменение сигнала. Если это наблюдается, остановите регистрацию (кнопка «Стоп»). ЛА-70 готов к работе. Имейте в виду, что по оси «Х» системы координат, в которой управляющая программа представляет данные в реальном времени, откладывается не время, а №№ регистрируемых точек. Масштаб осей можно задать в подменю «Диапазон изображения» управляющей программы (меню «Установки» в верхнем левом углу окна этой программы). Следует отметить, что изменение пределов на осях не меняет данных, сохраняемых в файле, и служит только для удобства наблюдения за ходом регистрации.

11. По окончании времени регистрации программа ее автоматически прекращает, а собранную информацию сохраняет в указанном файле. Сверните программу кнопкой «Свернуть окно» (значок «_» в верхнем правом углу окна). Проверьте сохраненные данные, открыв файл данных с помощью программы «MicrosoftExel».

12. Дальнейшая обработка данных проводится с помощью «MicrosoftExel».