Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

МОЛБИОЛ 2014-лекции / ОГК / Л7-Транспорт белков-I

.pdf
Скачиваний:
134
Добавлен:
12.02.2015
Размер:
1.41 Mб
Скачать

Транспорт белков в клетке I

Лекция 7

2014 г.

Биогенез белков

Биогенез белков означает «рождение» белков

ипереход между ненативным и нативным состоянием белка

Биогенез белков включает в себя:

синтез полипептидной цепи;

химическую и структурную модификацию белков;

Пространственное сворачивание (фолдинг) белка

(folding);

сборку белковых комплексов (assembly);

транспорт белков к мембранам и транслокацию их через мембраны;

вторичный фолдинг или «пересворачивание» белков (рефолдинг).

Клетки прокариот и эукариот

Прокариотическая

Эукариотическая

клетка

клетка

 

Органеллы эукариотических клеток

Транспорт белков в различные компартменты эукариотической клетки

Клетка высших

эукариот содержит около 1010 различных белков;

Каждый компартмент

клетки содержит свой собственный набор белков;

Трансляция всех

кодируемых в ядре мРНК происходит на цитоплазматических рибосомах;

Существуют две

ветви транспорта белков в клетке;

Для большинства

этапов транспорта необходимы сигналы сортировки.

Как вновь синтезированные белки узнают, куда они должны идти - в ядро, в митохондрии, в секреторные гранулы?

И каким образом эти молекулы, нередко весьма немалого размера, пересекают липидную мембрану?

Сигнальная гипотеза транспорта белков в клетке (Гюнтер Блобель)

1971 год - первая версия «сигнальной теории» -

секретируемые клеткой белки содержат встроенный код, который направляет их к... и через мембраны.

1975 год - описаны различные стадии транспортировки белков. Код

состоит из пептида, то есть последовательности аминокислот в специфическом порядке, который является неотъемлемой частью белка. Белки, которые должны экспортироваться из клетки, синтезируются рибосомами, связанными с ЭР. Белок пересекает мембрану ЭР через канал.

Примерно к 1995 году доказано, что «гипотеза кода» была и

правильна, и универсальна, т.е. процессы, происходящие при транспортировке вновь синтезированных белков, одинаковы во всех клетках, и существуют общие принципы транспорта во все органеллы клетки.

В 1999 году Гюнтер Блобель (Günter Blobel) за открытие у

белков «внутренних сигналов, которые определяют их транспорт и локализацию в клетке» удостоился Нобелевской премии по физиологии и медицине

Методы изучения транспорта в ЭР

Схема выделения и очистки шероховатых и гладких микросом

Фотография

выделенных

микросом

Сигнальная гипотеза – основана на исследованиях транспорта в ЭР;

Выделение шероховатых и гладких микросом,

Исследования транспорта белков в бесклеточной системе (+/- микросомы);

Анализ протеолиза вновь синтезированных пептидов;

Изучение локализации белков с различными вариантами сигнальной последовательности (точечные мутации, химерные белки);

Электронная микроскопия меченых белков.

Методические подходы для изучения сигнальных последовательностей и транслокации белков через мембраны

Биохимические подходы изучения механизма транслокации белков через мембраны

Трансфекционные методы для определения структуры сигнальных последовательностей

Универсальность сигнальной гипотезы транспорта белков в клетке

Сигнальная гипотеза была проверена и в генетических, и в биохимических экспериментах. Доказана ее справедливость и для растительных, и для животных клеток. Эта гипотеза подтверждается и для случая переноса белков через плазматическую мембрану прокариот.