
МОЛБИОЛ 2014-лекции / ОГК / Л7-Транспорт белков-I
.pdfТранспорт белков в клетке I
Лекция 7
2014 г.

Биогенез белков
•Биогенез белков означает «рождение» белков
ипереход между ненативным и нативным состоянием белка
•Биогенез белков включает в себя:
–синтез полипептидной цепи;
–химическую и структурную модификацию белков;
–Пространственное сворачивание (фолдинг) белка
(folding);
–сборку белковых комплексов (assembly);
–транспорт белков к мембранам и транслокацию их через мембраны;
–вторичный фолдинг или «пересворачивание» белков (рефолдинг).

Клетки прокариот и эукариот
Прокариотическая |
Эукариотическая |
|
клетка |
||
клетка |
||
|

Органеллы эукариотических клеток

Транспорт белков в различные компартменты эукариотической клетки
• Клетка высших
эукариот содержит около 1010 различных белков;
• Каждый компартмент
клетки содержит свой собственный набор белков;
• Трансляция всех
кодируемых в ядре мРНК происходит на цитоплазматических рибосомах;
• Существуют две
ветви транспорта белков в клетке;
• Для большинства
этапов транспорта необходимы сигналы сортировки.
•Как вновь синтезированные белки узнают, куда они должны идти - в ядро, в митохондрии, в секреторные гранулы?
•И каким образом эти молекулы, нередко весьма немалого размера, пересекают липидную мембрану?

Сигнальная гипотеза транспорта белков в клетке (Гюнтер Блобель)
• 1971 год - первая версия «сигнальной теории» -
секретируемые клеткой белки содержат встроенный код, который направляет их к... и через мембраны.
• 1975 год - описаны различные стадии транспортировки белков. Код
состоит из пептида, то есть последовательности аминокислот в специфическом порядке, который является неотъемлемой частью белка. Белки, которые должны экспортироваться из клетки, синтезируются рибосомами, связанными с ЭР. Белок пересекает мембрану ЭР через канал.
• Примерно к 1995 году доказано, что «гипотеза кода» была и
правильна, и универсальна, т.е. процессы, происходящие при транспортировке вновь синтезированных белков, одинаковы во всех клетках, и существуют общие принципы транспорта во все органеллы клетки.
• В 1999 году Гюнтер Блобель (Günter Blobel) за открытие у
белков «внутренних сигналов, которые определяют их транспорт и локализацию в клетке» удостоился Нобелевской премии по физиологии и медицине

Методы изучения транспорта в ЭР
Схема выделения и очистки шероховатых и гладких микросом
Фотография
выделенных
микросом
Сигнальная гипотеза – основана на исследованиях транспорта в ЭР;
•Выделение шероховатых и гладких микросом,
•Исследования транспорта белков в бесклеточной системе (+/- микросомы);
•Анализ протеолиза вновь синтезированных пептидов;
•Изучение локализации белков с различными вариантами сигнальной последовательности (точечные мутации, химерные белки);
•Электронная микроскопия меченых белков.

Методические подходы для изучения сигнальных последовательностей и транслокации белков через мембраны
Биохимические подходы изучения механизма транслокации белков через мембраны
Трансфекционные методы для определения структуры сигнальных последовательностей

Универсальность сигнальной гипотезы транспорта белков в клетке
•Сигнальная гипотеза была проверена и в генетических, и в биохимических экспериментах. Доказана ее справедливость и для растительных, и для животных клеток. Эта гипотеза подтверждается и для случая переноса белков через плазматическую мембрану прокариот.