диссертации / 51

172

наибольшая степень продукции МИФ наблюдается у больных с нормоергическим вариантом заболевания.

Индекс клеточеой миграции %

Дети с нормоергическим патогенетическим варантом АД (n=30)

Дети с гиперергическим патогенетическим варантом АД (n=60)

Дети с различными патогенетическими варантами АД (n=90)

Рисунок 26. Среднее значение индекса клеточной миграции у детей с различными патогенетическими вариантами АД

Таким образом, отмеченные иммунные механизмы играют важную роль в формировании и развитии выделенных нами патогенетических вариантов и могут использоваться в качестве диагностических критериев нормоергического и гиперергического патогенетических вариантов тяжелых форм АД у детей.

173

ГЛАВА 5. ЗНАЧЕНИЕ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ МЕХАНИЗМОВ И ФАКТОРОВ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ В РАЗВИТИИ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА У ДЕТЕЙ 5.1. Состояние функционально-метаболической активности

нейтрофильных лейкоцитов при различных патогенетических вариантах тяжелых форм атопического дерматита у детей

Как уже было отмечено нами ранее, в развитии АД важную роль играет бактериальная инфекция. Конечным звеном антибактериальной защиты является фагоцитоз бактерий нейтрофильными лейкоцитами. Это довольно сложный процесс, в котором принимают участие хемотаксис, аттракция, поглощение и киллинг микроорганизмов. Эффективность фагоцитоза зависит от свойств объекта фагоцитоза, степени его опсонизации, соотношения микроб

– фагоцит и степени активации фагоцитоза. На начальных этапах этого взаимодействия роль антител (класса IgA, IgG, IgМ) и системы комплемента состоит в распознавании и опсонизации микроорганизмов и запуске хемотаксиса, а фагоцитов – в элиминации патогенов, процессинге антител макрофагами, его представлении и запуске иммунологических реакций. В связи со значительным обсеменением кожи больных золотистым стафилококком и другими микроорганизмами и возможностью их проникновения через поврежденный кожный барьер внутрь организма требуется активация защитных механизмов, включая и механизм фагоцитоза.

Основным и общим патогенетическим механизмом развития всех осложненных форм АД являются нарушения неспецифической резистентности, в частности нарушения фагоцитарной активности нейтрофилов. В связи с этим возникла необходимость оценки состояния функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов у детей с различными патогенетическими вариантами заболевания.

Функционально-метаболическая активность нейтрофилов определялась нами у 32 детей с нормоергическим, у 64 – с гиперергическим патогенетическими вариантами АД и у 30 детей контрольной группы.

174

Проведенные исследования позволили установить значительные нарушения в деятельности фагоцитарного звена иммунитета (табл. 16).

Таблица 16

Показатели биоцидности нейтрофилов

у детей с различными патогенетическими вариантами АД (М±m)

* р<0,05 – достоверно по отношению к детям контрольной группы.

Показатели спонтанного НСТ-теста у детей с нормоергическим патогенетическим вариантом АД колебались от 5,6±0,3% до 7,8±0,3% и были несколько снижены (6,7±0,3%), но достоверно не отличались от референтных значений (7,2±0,2). У пациентов с гиперергическим вариантом заболевания среднее значение спонтанного НСТ-теста было незначительно повышено и составило 7,5±0,2% (от 5,8±0,2% до 9,2±0,2%), что также не имело достоверных отличий от показателей контрольной группы (7,2±0,2%). Однако оценка функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов только с помощью спонтанного НСТ-тестирования не позволяла в полной мере охарактеризовать их резервные возможности.

Всвязи с этим нами была исследована способность нейтрофилов отвечать на стимулирующее воздействие, для чего у больных с различными патогенетическими вариантами АД применялся НСТ-тест, индуцированный зимозаном.

Врезультате проведенных исследований было обнаружено, что у детей с нормоергическим вариантом заболевания показатель зимозан-индуцированного НСТ-теста оказался достоверно меньше, чем у детей контрольной группы

175

(соответственно 28,6±0,09% и 43,1±2,2%; р<0,05). У этих же детей было отмечено достоверное понижение индекса стимуляции (3,8±0,01 при 6,4±0,01;

р<0,05).

У детей с гиперергическим патогенетическим вариантом АД, напротив, было обнаружено небольшое, но достоверное повышение среднего значения зимозан-индуцированного НСТ-теста и индекса стимуляции по сравнению с детьми группы контроля (48,4±1,2% и 7,1±0,01 соответственно при 43,1±2,2% и 6,4±0,01 в контрольной группе).

Таким образом, проведенные нами исследования установили значительное снижение функционально-метаболической активности нейтрофильных лейкоцитов у больных с нормоергическим патогенетическим вариантом АД при относительно небольшой степени их активации у пациентов с гиперергическим вариантом заболевания, что является одним из важных отражений роли неспецифических механизмов в формировании и развитии различных патогенетических вариантов тяжелых форм атопического дерматита у детей.

5.2.Состояние Toll-подобных рецепторов

Внастоящее время, согласно концепции паттернраспознающих рецепторов (ПРР), им придается большое значение в защите макроорганизма от микробной и вирусной инвазии. Многочисленные работы, посвященные этой проблеме, позволили более детально представить тонкие механизмы деятельности системы врожденного иммунитета, включая экспрессию ПРР и их взаимодействие со специфическими лигандами, АГ-специфическую активацию адаптивного иммунитета с последующей продукцией провоспалительных цитокинов. Наиболее изученными среди ПРР являются Toll-подобные рецепторы (TLR) и NOD-рецепторы, выполняющие защитные функции при бактериальных, грибковых и вирусных инфекциях. К настоящему времени из них наиболее изучены 10 видов TLR и 2 вида NOD-рецепторов. Взаимодействие TLR с их лигандами инициирует активацию сигнальных путей,

176

вследствие чего происходит экспрессия генов провоспалительных цитокинов,

таких как TNF-α, IL-1, IL-4, IL-5 и IL-12, интерферонов 1 типа, а также хемокинов, костимуляторных молекул. Продукты этих генов регулируют реакции врожденного иммунитета и направляют развитие адаптивного иммунного ответа. Широкий спектр лигандов TLR и наличие этих рецепторов на многих клетках способствует вовлечению TLR в патогенез многих заболеваний. Поскольку кожа является зоной первичного контакта иммунной системы с инфекционными агентами, изучение экспрессии Toll-подобных рецепторов у больных с различными патогенетическими вариантами АД представляется весьма актуальным.

Нами проведена оценка поверхностной экспрессии TLR-клетками врожденного иммунитета у больных с различными патогенетическими вариантами АД. Определение экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах, лимфоцитах и гранулоцитах периферической крови были проведены у 96 детей с различными патогенетическими вариантами заболевания и у 30 детей группы контроля.

Анализ результатов проведенных исследований (табл. 17) показал, что достоверное повышение интенсивности флюоресценции моноцитов, зарегистрированное для рецепторов TLR4 по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы, было характерно для детей с гиперергическим вариантом АД (54,7±7,2 УЕФ – у детей с гиперергическим вариантом АД и 42,9±3,2 УЕФ – у детей группы контроля). В то же время экспрессия рецептора TLR2 практически не отличалась от референтных значений (58,6±4,8 УЕФ – у детей с гиперергическим вариантом АД и 56,5±4,6 УЕФ – у детей контрольной группы).

У детей с нормоергическим патогенетическим вариантом заболевания была отмечена совсем иная тенденция. Так, интенсивность флюоресценции моноцитов для рецепторов TLR4 была достоверно снижена по сравнению с контрольной группой (28,1±7,1 УЕФ и 42,9±3,2 УЕФ соответственно) при

177

меньшем, но достоверном снижении уровня экспрессии рецепторов TLR2 – 44,2±4,8 УЕФ (56,5±4,6 УЕФ в группе контроля).

Таблица 17

Уровень экспрессии моноцитами TLR2 и TLR4

у детей с различными патогенетическими вариантами АД (М±m)

* р<0,05 – достоверно по отношению к детям контрольной группы.

Аналогичные закономерности прослеживались и при изучении уровня экспрессии TLR2 и TLR4 на лимфоцитах у детей с различными патогенетическими вариантами АД (табл. 18). Хотя следует отметить, что интенсивность экспрессии TLR4 на лимфоцитах в меньшей степени отличалась от референтных значений, чем на моноцитах и гранулоцитах периферической крови.

Таблица 18

Уровень экспрессии лимфоцитами TLR2 и TLR4

у детей с различными патогенетическими вариантами АД (М±m)

Так, у детей с нормоергическим вариантом АД интенсивность флюоресценции лимфоцитов для рецепторов TLR2 и TLR4 была незначительно, но достоверно снижена (7,1±2,1 УЕФ и 6,8±2,5 УЕФ) по

178

сравнению с показателями у детей группы контроля (11,6±2,2 УЕФ и 12,3±2,1 УЕФ соответтвенно).

У детей с гиперергическим патогенетическим вариантом заболевания средний уровень экспрессии лимфоцитов для рецепторов TLR2 не отличался от нормальных значений (11,5±2,3 УЕФ при 11,6±2,2 УЕФ в контрольной группе детей), при небольшом, но достоверном повышении интенсивности флюоресценции лимфоцитов для рецепторов TLR4 по сравнению с аналогичными показателями у детей контрольной группы (18,2±2,5 УЕФ и 12,3±2,1 УЕФ соответственно).

В таблице 19 представлены данные об интенсивности флюоресценции гранулоцитов у обследованных детей с различными патогенетическими вариантами АД, полученные при цитометрических замерах экспрессии рецепторов TLR2 и TLR4. Результаты проведенных исследований показали, что изменения экспрессии рецепторов TLR2 и TLR4 у детей с различными патогенетическими вариантами АД носят разнонаправленный характер.

Таблица 19 Уровень экспрессии нейтрофильными лейкоцитами TLR2 и TLR4

у детей с различными патогенетическими вариантами АД (М±m)

гиперергическим вариантами заболевания по сравнению с контрольными значениями носили недостоверный характер (49,1±2,8 УЕФ и 52,5±3,2 УЕФ соответственно при 50,2±3,1 УЕФ у детей группы контроля). Однако при регистрации TLR2 следует отметить намечающуюся тенденцию к снижению

179

интенсивности флюоресценции нейтрофильных гранулоцитов у детей с нормоергическим патогенетическим вариантом заболевания.

Вместе с тем проведенные исследования позволили установить как достоверное увеличение экспрессии TLR4 у детей с гиперергическим вариантом АД, так и достоверное снижение интенсивности флюоресценции гранулоцитов для рецепторов TLR4 у детей с нормоергическим вариантом заболевания по сравнению с контрольными значениями (68,1± 2,3 УЕФ и 49,1± 2,4 УЕФ соответственно при 59,2± 5,6 УЕФ в контрольной группе детей).

Такое разнонаправленное разделение степени экспрессии рецепторов TLR2 и TLR4 свидетельствовало об активном участии этих TLRs рецепторов в патогенезе различных патогенетических вариантов АД у детей с тяжелыми формами АД и в то же время о разных свойствах TLR2- и TLR4-рецепторов. Имеются серьезные основания считать, что активированные TLR4-позитивные нейтрофилы из кровотока попадают в очаги поражения при АД, ограничивая площадь поражения и элиминируя патогенные микроорганизмы.

Таким образом, можно прийти к заключению, что определение уровня экспрессии рецепторов TLR2 и TLR4 на моноцитах, лимфоцитах и гранулоцитах периферической крови имеет важное диагностическое значение в качестве одного из неспецифических механизмов развития и формирования различных патогенетических вариантов тяжелых форм атопического дерматита у детей.

5.3. Содержание эндогенного оксида азота в сыворотке крови

Как уже указывалось в обзоре литературы, нарушение продукции оксида азота рассматривается в качестве одного из важных неспецифических механизмов в патогенезе АД, а его оценка при различных патогенетических вариантах этого заболевания является перспективной и актуальной.

В связи с этим мы определяли содержание NO у 92 детей с различными патогенетическими вариантами АД и у 30 детей контрольной группы (табл. 20).

У 32 детей с нормоергическим и у 60 – с гиперергическим

180

патогенетическими вариантами АД были получены результаты, демонстрирующие значительное достоверное повышение содержания эндогенного оксида азота у всех детей, вне зависимости от патогенетических вариантов заболевания.

Таблица 20

Уровень NO

у детей с различными патогенетическимивариантами АД (М±m)

гиперергическим патогенетическим вариантом АД (66,2±2,6 мкмоль/л), что достоверно превышало аналогичные средние значения у детей контрольной группы (21,03±0,18 мкмоль/л).

У детей с нормоергическим вариантом заболевания также отмечалось достоверное повышение уровня эндогенного оксида азота по сравнению с детьми группы контроля (62,57±1,14 мкмоль/л при 21,03±0,18 мкмоль/л соответственно).

Однако достоверного различия между уровнем эндогенного оксида азота у детей с различными патогенетическими вариантами АД нами не зарегистрировано (66,2±2,6 мкмоль/л у детей с гиперергическим и 62,57±1,14 мкмоль/л у детей с нормоергическим вариантами заболевания; р>0,05).

Таким образом, полученные результаты объективно демонстрируют, что уровень эндогенного оксида азота является важным индикатором степени выраженности воспалительного процесса у пациентов с тяжелым течением АД независимо от патогенетических вариантов данного заболевания.