Основные различия между коклюшными палочками и бактериями септического бронхита.

Микробы	Признаки
	Рост на МПА	Наличие уреазы
Коклюшные бактерии	не растут	-
Бактерии септического бронхита	растут без изменения цвета среды	+

Серологический метод диагностики коклюша

Начиная с 3-4 недели заболевания в крови больных начинают появляться антитела, которые можно обнаружить серологическим методом c помощью реакции агглютинации и реакции связывания комплемента по Борде-Жангу.

РЕАКЦИЯ АГГЛЮТИНАЦИИ. Для выполнения реакции берут кровь больного в количестве 0,8-1 мл (из пальца или пятки ребенка), помещают на 10-15 минут в термостат, а после этого - в холодильник для уплотнения и отделения сгустка. Затем проводят центрифугирование, сыворотку отсасывают и разводят физиологическим раствором от 1:5 до 1:2500. В качестве антигена используется изготовленный производственным способом диагностикум.

Схема постановки реакции следующая.

нгредиенты	Пробирки
	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
									контроль антигена	контроль сыворотки
Физ. раствор	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25
Сыворотка больного в разведении 1:5	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	-	0,25
Разведение	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	1:1280		1:5
Диагностикум в каплях	2	2	2	2	2	2	2	2	2	-

Пробирки с разведенной сывороткой и добавленным в них диагностикумом помещают на 2 часа в термостат при 37 °C, а затем на сутки оставляют при комнатной температуре.

Агглютинация носит мелкозернистый характер. Поэтому учет ее производят с помощью агглютиноскопа.

Реакция считается положительной при четкой агглютинации с интенсивностью на ++ + + и + + +. Диагностическим является титр 1:40. Результаты серологических реакций имеют диагностическое значение только при изучении их в динамике, в связи с чем они повторяются не менее двух раз в течение болезни с интервалами 5-7 дней.

РСК ПО БОРДЕ-ЖАНГУ. Реакцию ставят по общепринятой методике. Особенностью ее является: длительное связывание (18-24 часа на холоду при +4 °C); в качестве диагностикума берется свежеприготовленная 1 млрд. взвесь 2-дневной культуры палочек коклюша, выращенных на 20% картофельно-глицериновом агаре и смытых физиологическим раствором. Омыв бактерий центрифугируют до полного просветления, осадок эмульгируют в дистиллированной воде для растворения случайно смытых со среды эритроцитов. После повторного центрифугирования готовят 1 млрд. суспензию культуры, инактивируют при +56 °C 1 час и подвергают титрованию.

Антиген титруют в присутствии комплемента.

Схема титрования антигена коклюшных бактерий
Ингредиенты в мл	Номера пробирок и их содержимое в мл							Контроль
	1	2	3	4	5	6	антигенная гемотоксичность		комплемента
Антиген	0,05	0,1	0,12	0,15	0,2	0,25	0,25		-
Комплемент в рабочей дозе	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	0,25	-		0,25
Физиологический раствор	0,45	0,40	0,38	0,35	0,30	0,25	0,50		0,50
Встряхнуть, в термостат на 35-40 минут при +37 °C. Затем добавить гемолитическую систему.
Гемолитическая система	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5		0,5
Учет результатов	гемолиз	гемолиз	гемолиз	гемолиз	-	-	-		гемолиз

Титром антигена считают то его максимальное количество, при котором еще возможен гемолиз (в данном примере - 0,15 мл). Рабочая доза должна быть на 20% ниже (0,12 мл).

После этого антиген используют для постановки РСК.