- •Микробиологическая диагностика дифтерии
- •I. Микроскопический метод
- •II. Бактериологический метод
- •Определение протеолитических свойств
- •Ускоренные методы диагностики
- •Определение токсигенности дифтерийных бактерии
- •Дифференциация различных видов бордетелл
- •Микробиологическая диагностика коклюша
- •I. Микроскопический метод
- •II. Бактериологический метод
- •Основные различия между коклюшными палочками и бактериями септического бронхита.
- •Серологический метод диагностики коклюша
Определение протеолитических свойств
ПРОБА ПИЗУ - ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТА ЦИСТИНАЗЫ
К 90 мл расплавленного 2% МПА с pH -7,6 добавляют 2 мл раствора цистина (1% раствор цистина в 0,1N растворе NaOH). Среду стерилизуют при +112 °C 30 минут. K расплавленной и охлажденной до +50 °C среде добавляют 1 мл 10% уксуснокислого свинца (простерилизованного дважды текучим паром) перемешивают и добавляют 9 мл нормальной лошадиной сыворотки. Среду стерильно разливают в маленькие пробирки по 2 мл. Посев производится уколом.
Вместо МПА с цистином можно использовать 2% МПА, приготовленный на переваре Хоттингера, с содержанием аминного азота в 250 мг%.
Дифтерийные бактерии активно перерабатывают белки и цистин с высвобождением сероводорода, который, соединяясь с уксусным свинцом, переходит в сернистый свинец коричнево-черного цвета.
Дифтероиды подобных изменений не дают.
ПРОБА ЗАКСА - ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТА УРЕAЗЫ
Проба Закса служит для отличия дифтериеподобных бактерий, обладающих уреазной активностью, от истинных дифтерийных палочек, не имеющих этого фермента.
1. ВАРИАНТ СРЕДЫ: к 100 мл МПБ или Хоттингеровского бульона добавляют 1 г мочевины и 0,2 мл 1,6% спиртового раствора крезолрот, разливают по 2-3 млв пробирки и стерилизуют текучим паром 10 минут. Результаты учитывают через 20-24 часа после посева. Покраснение среды свидетельствует о наличии уреазы.
2. ВАРИАНТ СРЕДЫ: готовят два реактива: А и В.
Реактив А: мочевина - 1 г, спирт 96°- 2 мл, дистиллированная вода - 4 мл.
Реактив В: 0,2% раствор фенолрота-1 мл, однозамещенный фосфат калия (КН2Р04)-0,1 г, двузамещенный фосфат калия (К2НРО4)-0,1 г, хлористый натрий - 0,5 г, дистиллированная вода - 100 мл.
Реактив А стерилизуют фильтрованием и хранят при + 4 °C, реактив В - в автоклаве текучим паром.
Перед работой оба реактива смешивают extempore из расчета 1 часть раствора А и 19 частей раствора В, смесь разливают по 0,1 мл в узкие пробирки. Испытуемые культуры вносят в количестве 2-6 капель, помещают в термостат на 30 минут. При положительной реакции смесь краснеет.
Дифференциация дифтерийных бактерий и дифтероидов по биохимическим признакам приведена ниже.
В отдельных случаях после определения биохимических свойств дифтерийных бактерий выясняется серотип штамма. Для этой цели используется ориентировочная агглютинация.
Последнюю проводят на стекле с чистыми культурами, которые смывают со среды 1 мл солевого раствора и осторожно набирают стерильной пастеровской пипеткой. Агглютинирующие монотииовые сыворотки (I, II, III, IV, VI серотипы) разводят 1:25 солевым раствором с pH-7,6 (к 100 мл дистиллированной воды прибавляют 3,0 NaOH и устанавливают pH-7,6, доливая 5% раствор Na2HPO4). Для контроля испытуемой культуры ставят реакцию с выше указанным солевым раствором без сыворотки.
Положительная реакция характеризуется быстрым появлением хлопьев агглютината (2-3 минуты), особенно заметных при учете реакции над вогнутым зеркалом.
Неиспользованную сыворотку запаивают в ампулу или переливают в стерильную пробирку.
Агглютинирующие сыворотки хранятся в сухом месте при температуре от +4° до +10 °C.
При использовании высушенных сывороток последние перед употреблением растворяют в стерильной дистиллированной воде (1 мл на ампулу). Срок годности сухой сыворотки не ограничен.