Занятие 1. Принципы устройства иммерсионного, люминесцентного, электронного микроскопов. Типы микроскопических препаратов.

Тип микроскопии		Вид микроскопии		Используемый микроскоп		Эффект (принцип метода)		Применение в микробиологии
Электронная микроскопия				Электронный		Вместо светового пучка используется пучок электронов		Изучение вирусов Изучение ультраструктуры микробной клетки
Световая микроскопия	Обычная световая		Биологический микроскоп		См. курс физики		В микробиологии используется редко
	Иммерсион-ная		Биологический микроскоп + иммерсионный объектив		Иммерсионное масло, помещаемое между предметным стеклом и объективом, устраняет потери попадающих в объектив лучей света вследствие своего одинакового со стеклом коэффициента преломления		Наиболее часто используется в бактериологии для микроскопического метода исследования
	Темно-польная		Биологический микроскоп + темнопольный конденсор		В объектив попадают лишь преломленные на объекте лучи (светлый объект на темном фоне)		Используется для микроскопии очень тонких объектов – например, спирохет
	Фазово-контрастная		Биологический микроскоп + фазово-контрастная приставка		Превращает изменение фазы световой волны, которая меняется при прохождении прозрачных объектов, в воспринимаемое глазом изменение ее амплитуды		Используется для изучения прозрачных, неокрашенных, объектов – например, микоплазм
	Люмине-сцентная (флюоре-сцентная)		Люминесцентный (флюоресцентный)микроскоп		Регистрирует фотолюминесценцию объекта (свечение под действием ультрафиолета)		Микроскопия мазков, окрашенных флюоресцирующими красками (аурамин, родамин, корефосфин и др.) Оценка реакции иммунофлюоресценции (РИФ)

В лабораторной практике используют следующие типы микроскопических препаратов:

1. Бактериологический мазок (фиксированный мазок). Готовят из патологического материала (гноя, мокроты, фекалий), а также из колоний и чистых культур микроорганизмов.

2. «Висячая» и «Раздавленная» капля. Используют для изучения подвижности микроорганизмов при участии темно-польной микроскопии.

3. Тонкий мазок крови.

4. «Толстая» капля крови.

5. Препарат-отпечаток. Готовят из внутренних органов, мяса, колбасных изделий.

6. Тушевой препарат.

7. Мазки-близнецы (готовят из гноя и мокроты вязкой консистенции).

13. Основные формы микроорганизмов. Этапы приготовления микроскопических препаратов. Способы фиксации.

Различают следующие основные формы бактерий:

• шаровидные (сферические), или кокковидные (от греч. kokkos — зерно);

• палочковидные (цилиндрические);

• извитые (спиралевидные);

• нитевидные.

Кокковидные патогенные бактерии обычно имеют форму правильного шара; некоторые — бобовидную, ланцетовидную, эллипсоидную форму. По характеру взаиморасполо­жения образующихся после деления клеток кокки подразделяют на следующие группы:

1. Микрококки. Делятся в одной плоскости, располагаются одиночно и беспорядочно; сапрофиты; патогенных для человека нет.

2. Диплококки. Деление происходит в одной плоскости с образованием пар клеток, имеющих либо бобовидную, либо ланцетовидную форму.

3. Стрептококки. Деление клеток происходит в одной плоскости, но размножающиеся клетки сохраняют между собой связь и образуют различной длины цепочки, напоминающие нити бус.

4. Стафилококки. Деление происходит в нескольких плоскостях, а образующиеся клетки располагаются скоплениями, напоминающими гроздья винограда.

5. Тетракокки. Деление клеток происходит в двух взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием тетрад.

6. Сарцины. Деление клеток происходит в трех взаимно перпендикулярных плоскостях с образованием пакетов (тюков) из 8, 16, 32 и большего числа особей.

Палочковидные (цилиндрические) формы бактерий.

Палочки бывают

длинными — более 3 мкм

короткими — 1,5-3,0 мкм

очень короткими — менее 1,0 мкм — (коккобактерии)

По диаметру их делят на тонкие (Mycobacterium tuberculosis — возбудитель туберкулеза) и толстые (Clostridium perfringens — возбудитель газовой гангрены).

Концы палочек могут быть

• закругленными,

• заостренными,

• утолщенными,

• обрезанными;

• палочка может иметь овоидную (яйцевидную) форму (Yersinia pestis — возбудитель чумы).

По взаиморасположению палочковидные бактерии подразделяют на три группы

1) монобактерии — палочки располагаются одиночно и беспорядочно, сюда относится большинство палочковидных форм;

2) диплобактерии, располагающиеся попарно;

3) стрептобактерии - бактерии, располагающиеся цепочкой.

Извитые (спиралевидные) бактерии по количеству и характеру завитков, а также по диаметру клеток подразделяют на три группы:

1) вибрионы имеют один изгиб, не превышающий четверти оборота спирали

2) спириллы — клетки, имеющие большой диаметр и малое (2-3) число завитков;

3) спирохеты – имеют от 3 до 20-30 завитков

Нитевидные формы бактерий.

Различают два типа нитевидных бактерий:

1. образующие временные нити.

2. образующие постоянные нити

Временные нити образуют палочковидные бактерии при нарушении условий их роста или регуляции клеточного деления. При восстановлении механизма регуляции деления и нормальных условий роста эти бактерии восстанавли­вают обычные для них размеры.