- •1.Биотехнология как межотраслевая область научно-технического прогресса и раздел практических знаний, этапы ее развития.
- •2. Основные факторы, обусловившие развитие современной биотехнологии.
- •3. Связи биотехнологии с биологическими, химическими, техническими и другими науками.
- •4. Области применения достижении биотехнологии.
- •5. Микроорганизмы (бактерии и высшие протисты) - основные объекты биотехнологии.
- •6. Преимущества микроорганизмов перед другими объектами в решении современных биотехнологических задач.
- •7. Принципы подбора биотехнологических объектов: модельные и базовые микроорганизмы, штаммы микроорганизмов, использующиеся в биотехнологии.
- •8. Выделение и селекция микроорганизмов, продуцентов биологически активных веществ.
- •9. Принципиальные подходы к улучшению штаммов промышленных микроорганизмов.
- •10.Промышленные энзимы, продуцируемые микроорганизмами.
- •11. Различия микроорганизмов по типу питания и отношению к кислороду.
- •12. Клетки животных и растений как объекты биотехнологии.
- •13. Использование клеточных культур в биотехнологических процессах.
- •14. Трансгенные животные и растения как новые объекты биотехнологии.
- •15. Требования, предъявляемые к питательным субстратам, использующимся в биотехнологических процессах.
- •16. Природные сырьевые материалы растительного происхождения.
- •17. Отходы различных производств, как сырье для биотехнологических процессов.
- •18. Химические и нефтехимические субстраты, применяемые в качестве сырья для биотехнологии.
- •19. Преимущества и недостатки биотехнологических производств по сравнению с химическими технологиями.
- •20. Принципиальные схемы биотехнологических процессов, определяющие конструкции биореакторов (ферментеров).
- •21. Основные требования, предъявляемые к системам, используемым для процессов ферментации.
- •22. Типы и режимы ферментации. Периодические процессы.
- •23. Типы и режимы ферментации. Непрерывные процессы.
- •24. Проблемы аэрирования, пеногашения, асептики и стерильности при различных ферментациях.
- •25. Открытые и замкнутые ферментационные системы.
- •27. Основные требования, предъявляемые к биореакторам
- •28. Системы перемешивания, применяемые в современных ферментерах.
- •Механическое перемешивание.
- •29. Принципы масштабирования технологических процессов: лабораторные, пилотные и промышленные ферментеры и решаемые с их использованием задачи.
- •30. Специализированные ферментационные технологии: анаэробные, твердофазные и газофазные процессы
- •31. Особенности культивирования клеток животных, виды культур.
- •32. Особенности культивирования клеток растений.
- •33. Конечные стадии получения продуктов биотехнологических процессов.
- •34. Отделение биомассы: флотация, фильтрование и центрифугирование.
- •35. Методы дезинтеграции клеток: физические, химические и энзиматические.
- •36. Выделение целевого продукта: осаждение, экстрагирование, адсорбция, электрохимические методы, ионообменная хроматография.
- •37. Концентрирование, обезвоживание, модификация и стабилизация целевых продуктов биотехнологических процессов.
- •38. Биотехнология производства «одноклеточного» белка.
- •39. Продуценты «одноклеточного» белка: дрожжи и бактерии.
- •40. Продуценты «одноклеточного» белка: водоросли и грибы.
- •41. Требования, предъявляемые к микробному белку и возможности его использования.
- •42. Сырьевая база производства белка одноклеточных организмов; высокоэнергетические субстраты, отходы сельского хозяйства и других производств.
- •43. Область применения энзимов в биотехнологических производствах.
- •44. Преимущества и недостатки энзимных технологий.
- •45. Технология производства энзимов для промышленных целей.
- •46. Требования, предъявляемые к продуцентам энзимов.
- •47. Иммобилизованные энзимы и преимущества их применения в биотехнологии.
- •48. Носители, используемые для иммобилизации энзимов: природные и синтетические органические носители.
- •49. Типы неорганических носителей.
- •50. Способы иммобилизации энзимов: адсорбция, включение в гели и полупроницаемые мембраны; химические методы иммобилизации ферментов.
- •51. Иммобилизованные клетки в биотехнологии
- •52. Получение рекомбинантных белков с помощью прокариотических систем.
- •53. Классификация питательных сред и требования к их составу.
- •54. Использование достижений биотехнологии в охране окружающей среды.
- •56. Получение и использование трансгенных растений для повышения продукции сельского хозяйства и качества продуктов питания.
- •57. Способы индентификации трансгенной днк.
- •58. Возможные риски использования генетически модифицированных организмов для здоровья человека и окружающей среды.
- •59. Достижения молекулярной биотехнологии в генотерапии.
- •60. Биотехнология очистки промышленных отходов.
- •61. Биотехнологические способы получения энергоносителей.
- •62. Исследования генома человека и его результаты.
- •63. Получение рекомбинантных белков с помощью эукариотических систем.
- •64. Основные принципы получения трансгенных организмов.
48. Носители, используемые для иммобилизации энзимов: природные и синтетические органические носители.
Органические полимерные носители
Используемые в настоящее время органические носители можно разделить на два класса: 1 – природные полимеры, 2 – синтетические полимерные носители. Первые, в свою очередь, подразделяются на группы в соответствии с их биохимической классификацией: полисахаридные, белковые и липидные носители. Синтетические полимеры также могут быть подразделены на несколько групп: полиметиленовые, полиамидные и полиэфирные носители. Помимо вышеупоминавшихся требований, к рассматриваемым носителям предъявляются дополнительные, обусловленные методом иммобилизации, свойствами иммобилизуемого фермента, а также способом дальнейшего использования получаемого препарата: • при ковалентной иммобилизации носитель должен связываться только с теми функциональными группами на молекуле фермента, которые не являются ответственными за катализ; • носители не должны оказывать ингибирующего действия на фермент. Применение природных полимеров в качестве носителей аргументируется их доступностью и наличием свободных функциональных групп, легко вступающих в разнообразные химические реакции, а также их высокой гидрофильностью. К недостаткам следует отнести неустойчивость к воздействию некоторых микроорганизмов и относительно высокую стоимость многих из них. Полисахариды Наиболее часто для иммобилизации ферментов используют целлюлозу, декстран, агарозу и их производные. Целлюлоза отличается высокой степенью гидрофильности и наличием большого числа гидроксильных групп, что обусловливает ее легкое модифицирование путем введения различных заместителей. Для увеличения механической прочности целлюлозу гранулируют, что делает ее относительно дешевым и удобным для иммобилизации различных ферментов носителем. Гранулированная целлюлоза легко превращается в различные ионообменные производные. Однако она неустойчива к действию сильных кислот, щелочей и некоторых окислителей, что ограничивает области ее применения. Хитин – природный аминополисахарид, напоминающий некоторым образом целлюлозу и является компонентом наружного скелета ракообразных, насекомых, а также входит в состав оболочек некоторых грибов. Являясь отходом промышленной переработки креветок и крабов, данное соединение имеется в достаточно больших количествах при относительно низкой стоимости. Хитин обладает пористой структурой, не растворяется в воде, разбавленных кислотах и щелочах, а также в органических растворителях. Путем обработки щелочами хитин превращается в хитозан, который в качестве носителя дает хорошие результаты, поскольку препараты иммобилизованных ферментов, приготовленные с помощью хитозана, обладают высокой каталитической активностью и устойчивы к микробному воздействию. Декстран – разветвленный полисахарид бактериального происхождения, содержащий остатки глюкозы. Приготовленные на его основе гели выпускаются различными зарубежными фирмами и широко используются в различного рода работах.
Гели, приготовленные на основе декстрана, отличаются высокой стойкостью по отношению к различным химическим веществам, что делает их весьма широко используемыми в различного рода исследованиях и на производстве. К группе декстранов может быть отнесен и крахмал, представляющий собой смесь полисахаридов, основным компонентом которой является амилоза и амилопектин. Посредством определенных химических обработок из крахмала получен новый носитель – губчатый крахмал, обладающий повышенной устойчивостью к ферментам, гидролизующим полисахариды.
Агароза – широко используется в качестве носителя для иммобилизации ферментов, однако стоимость ее довольно высока, что заставляет разрабатывать различные ее модификации с целью получения легко регенерируемых форм, которые в результате этого могли бы использоваться повторно.
Агар – природный полисахарид, выделяемый из клеточных стенок некоторых морских водорослей. Точный состав его не известен, но установлено, что он содержит, по крайней мере, два полисахарида: агарозу и агаропектин. Преимуществом агара является его низкая стоимость и нетоксичность. Некоторые производные агара отличаются высокой механической прочностью и устойчивостью в щелочной среде, что явилось основанием рассматривать данный носитель почти идеальным. Другими полисахаридами, получаемыми из морских водорослей, являются альгиновые кислоты и их соли, которые после некоторой модификации применяются для иммобилизации ферментов, клеток и клеточных органелл.
Гепарин – кислый полисахарид, успешно применяемый для получения водорастворимых препаратов иммобилизованных ферментов, используемых в медицине.
Синтетические полимерные носители
Огромное разнообразие синтетических полимеров обеспечивает их широкое использование в качестве носителей для иммобилизации ферментов. Синтетические полимеры используются для иммобилизации ферментов различными способами, а также для получения гелей и микрокапсул. Полимеры на основе стирола Полимеры этого типа являются основой для изготовления ионообменных материалов, а также для изготовления микропористых и макропористых материалов, используемых в сорбционной иммобилизации. Полимеры на основе производных акриловой кислоты Одним из производных акриловой кислоты, широко применяемым в качестве носителя, является акриламид. Весьма широко применяется метод иммобилизации ферментов и клеток путем включения их в полиакриламидный гель (ПААГ). Полиамидные носители Это группа различных полимеров с повторяющейся амидной группировкой. Главным достоинством носителей этого типа является то, что они могут быть созданы в различной физической форме: в виде гранул, порошков, волокон, мембран, трубок и т. п. Широкое применение таких носителей, особенно для медицинских целей, обусловлено и биологической инертностью, и стойкостью к воздействию биологических факторов.