Реакция преципитации (рп)

Реакцией преципитации называется осаждение из раствора АГ

(преципитиногена) при воздействии на него иммунной сыворотки (преципитина) в

растворе электролита. Осадок представляет собой макромолекулярный иммунный

комплекс (преципитат). Выпадение нерастворимого комплекса антиген-антитело в

виде осадка наблюдается лишь при эквивалентных соотношениях ингредиентов – в

зоне эквивалентности. Зоной эквивалентности называется область, в которой все

антитела количественно связаны с антигеном. В реакции преципитации принимаютучастие только растворимые антигены (экстракты из микроорганизмов, органов и тканей, продукты распада клеток микроорганизмов).Преципитирующие сыворотки изготавливают путем гипериммунизации животных (кроликов).

Реакция кольцепреципитации. В пробирку наливают 1,0 мл неразведенной

преципитирующей сыворотки. Пипеткой медленно наслаивают по стенке пробирки

(пробирку держат в наклонном положении) антиген в таком же объеме. Затем

пробирку осторожно, чтобы не смешать жидкости, ставят вертикально. При

правильном наслоении антигена на сыворотку четко видна граница между двумя

слоями жидкости. Результаты реакции учитывают через 1-2 минуты.

В случае положительной реакции в опытной пробирке на границе между сывороткой и

исследуемым экстрактом появляется преципитат в виде белого кольца.

С помощью РП можно выявить не только видовую, но и групповую

специфичность белка.В судебной медицине РП используется для определения

видовой принадлежности белка (сыворотки крови). Применение РП для санитарно-

гигиенического контроля пищевых продуктов позволяет выявить фальсификацию

мясных, рыбных, мучных изделий, примеси в молоке и т.д.

Реакция встречной иммунодиффузии по Оухтерлони.

Метод иммунодиффузии основан на встречной диффузии антигена и антител в агаровом

геле. Для постановки реакции расплавленный агаровый гель тонким слоем

выливают на стеклянную пластинку, после затвердевания в нем вырезают лунки

диаметром 2-3 мм, которые заполняют антигеном или сывороткой. Антиген и

антитела диффундируют навстречу друг другу и в месте контакта в эквивалентных

соотношениях образуют линии преципитации в виде белой полосы.

Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини. При постановке

реакции радиальной иммунодиффузии по Манчини в расплавленный агар вносят

иммунную сыворотку. После застывания геля в нем делают лунки, в которые

помещают антиген. Антиген, диффундируя в гель, взаимодействует с антителами,

присутствующими в агаре. В результате образуется радиальная зона преципитации,

диаметр которой пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для

количественного определения содержания в крови иммуноглобулинов различных

классов.

Реакция флоккуляции

Реакцией флоккуляции называется появление опалесценции или

хлопьевидной массы при добавлении в пробирку с токсином (анатоксином)

антитоксической сыворотки. Ее применяют для определения активности

антитоксической сыворотки или анатоксина.

23. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Серологические реакции. Реакция непрямой гемагглютинации.

Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный

механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования

иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции

антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для

количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом

материале.

При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:

наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к

нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).

Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:

- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);

при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые

получают путем многократной иммунизации лабораторных животных

соответствующими антигенами;

- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;

обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).

Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных

компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.

В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с

антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств

раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым

серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и

флоккуляции.

В непрямых серологических реакциях для визуализации результата

взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы

(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим

реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой

гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и

др.