Бешенст - РНК(окр.белN+M,L)тел.Бабеш./неустойч./лаб.жив (3ст)/ист-дикие жив./суб.ед.вак,пастер, вак. Дом. Жив. ВИЧ – Монтанье.Гало,2+РНК/слож/сфер.форм/3стр.гена gag/pol(61/51/15/32)/env(gp120-gp41)/7рег.генов tat net rev viv vpr vpu vpx/конус.сердцев. (p18-p24)/p17прслойка

Гриб- поверх-микр,трих,эпид/ Гриб-волос-Micr can,Trich/стопы-Epid  Гриб-сабур/проф-As,Dlf,Pen/глуб-Hist,Cry/ант-нист,лев,амф  Грип-Orth/influen/сфер форм/спир сим/минРНК/шип/обол.gp160=gp120(CD4)+gp41/пораж.

Гри-слож./спираль/NA/HA/белки-P1.2.3/неустойч.

2гри - мазок зад.ст.глот,носогл.смыв/р-цияГА

Геп.А/Picorn.Hepat./РНК+/фек.ор/водны,предм.-бытов/безж.форм./имунглоб.аттен./ИФА Геп.B/сфер.форм./слож/HB-АГ/сердц.HBc-HBe/Hepatnovi.Orthohep/ДНК/устойч/парент/ трасф.инфуз.травм.полов.вертик/HBs/ПЦР/сп.проф.Энджер./леч.А-интрфрн.дрож.вакцин Герпес – слож./ДНК/кубич./термолаб/ганг.тройн.N Клещ-Flavivirus/+РНК/4полипепт/куб.тип симм./слож./Зильберг, Павловск./зооноз/вирусе/молоко/лаб.-кровь,СМЖ+ИФА/лайм-борел????/спц.прф. IgM Корь –вирусемия/гумор.иммун/ослабл.вакц.(спц.прф)/возд-кап/Morbil Красн.+РНК/Tagovir.Rubi/неустойч/сферич/слож/Е1-бел/возд.кап,террат./спц.кр.моновак. Оспа – ДНК/мех.аэрог/вирусемия/нерв.гангл. Паротит – ParaPara/возд.кап,пред.быт,аэрог/ имунн.,имия/РНК/рцияГА/слюна,СМЖ

Полием – Лайндштейн./Picornovirid Enter/3type + RNK/ прост,мелк/VP1-VP4/икосаэдр=20гр./устойч./размн.в лимф.+иммунт.(инаппарт)/мал.бол./сероз.менинг/фек-орал/предм.быт,водн/мех.аэрог путь/возд.кап/проф.спц.жив.слаб.вакц.Себина/Чумак.Смор Т-Bлимф.+кл.моноц.ряда/культ.на моно.т-лимф

Вирус гепатита А: РНК+

ВИЧ специфически связывается с клеточным рецептором: CD4

Вспышки, связанные с передачей вируса водным путем, характерны для: гепатита А

Для вируса гриппа характерно: источник инфекции – больной человек, воздушно-капельный путь передачи

Для лечения клещевого энцефалита используют: иммуноглобулин

Живая аттенуированная вакцина применяется для профилактики: полиомиелита, кори

Источник инфекции при гепатите С: больной, вирусоноситель

К сезонным эпидемическим подъемам заболеваемости гриппом приводит: антигенный шифт

Коревая инфекция: оставляет прочный пожизненный иммунитет, источник инфекции – больной человек

Вирус гриппа

Семейство Orthomyxoviridae

Род Influenza A, B, C

геном: минус-РНК

сложный вирус

спиральный тип симметрии

источник: человек

путь: воздушно-капельный

вакцина: живая, убитая

Вирус клещевого энцефалита

Семейство Flaviviridae

Род Flavivirus

геном: плюс-РНК

сложный вирус

кубический тип симметрии

источник: иксодовые клещи

путь: трансмиссивный

вакцина: убитая, Ig

вирусемия

Вирус бешенства

Семейство Rhabdoviridae

Род Lyssavirus

геном: минус-РНК

сложный вирус

пулевидная форма

спиральный тип симметрии

источник: млекопитающие

путь: контактный

вакцина: ослабленная или убитая, Ig

Вирус гепатита А

Семейство Picornaviridae

Род Hepatovirus

геном: плюс-РНК

простой вирус

кубический тип симметрии

источник: человек

механизм: энтеральный (+Е)

путь: фекально-оральный

вакцина: инактив культ концентр,

рекомбинантная генно-инженер

Вирус гепатита В

Семейство Hepadnaviridae

Род Orthohepadnavirus

геном: ДНК

сложный вирус

кубический тип симметрии

источник: больной, носитель

механизм: парентеральный (+C,D)

путь: инъекционный, половой,

гематотрансфузионный

вакцина: с антигеном, рекомбинант

ВИЧ

Семейство Retroviridae

Род Lentivirus

геном: плюс-РНК

сложный вирус

кубический тип симметрии

источник: человек

путь: половой, шприцы

вакцина: нет

вирусемия

Вирус парагриппа

Семейство Paramyxoviridae

Род Ribulavirus

геном: минус-РНК

сложный вирус

спиральный тип симметрии

источник: человек

механизм: аэрогенный

путь: воздушно-капельный

вакцина: нет

Вирус кори

Семейство Paramyxoviridae

Род Morbillivirus

геном: минус-РНК

сложный вирус

спиральный тип симметрии

источник: человек

путь: воздушно-капельный

вакцина: живая ослабленная

Вирус паротита

Семейство Paramyxoviridae

Род Ribulavirus (Paramyxovirus)

геном: минус-РНК

сложный вирус

спиральный тип симметрии

источник: человек

путь: воздушно-капельный

вакцина: живая

Вирус краснухи

Семейство Togaviridae

Род Rubivirus

геном: плюс-РНК

спиральный тип симметрии

источник: человек, дети с врожд

путь: воздушно-капельный

вакцина: нет

1. Иммуноблотинг позволяет определить: 1

- поверхностные антигены

+ антитела к поверхностным и сердцевинным антигенам

- РНК вируса

- обратную транскриптазу

- наличие провируса

2. Вирус бешенства ( много)

+ содержит РНК

- содержит ДНК

+ имеет суперкаспид

- не имеет суперкапсида

- имеет сферическую форму

?3. Персистенция вируса характерна для: 1

- полиемиелита

+гепатита С

- кори

- гриппа

- клещевого энцефалита

4. ВИЧ относится к: 1

- флавивирусам

- ортомиксовирусам

- пикорнавирусам

- рабдовирусам

+ ретровирусам

5. In vitro ВИЧ культивируется: 1

- в куриных эмбрионах

- в организме белых мышей

- в клеточных культурах СД8+-клеток

+ в клеточных культурах СД4+-клеток

- на питательных средах

6. Клещевой энцефалит относится к инфекциям: много

- антропонозным

+ зоонозным

- сапронозным

+ природно очаговым

- внутрибольничным

7. Пути передачи ВИЧ-инфекции: много

+ половой

- воздушно-капельный

- воздушно-пылевой

+ при внутреннем введение наркотиков

- при использование общей посуды

8. Опоясывающий лишай вызывает: 1

+ вирус ветряной оспы

- гистоплазма

- грибы рода Candida

- вирус гриппа

- полновирус

9. Впервые вакцину для профилактика бешенства создал: 1

- Р.Кох

- В.Бабеш

- А.Неггри

+ Л.Пастер

- Й. Майстер

10. Вирус гриппа поражает: 1

- гепатоциты

+ эпителий верхних дыхательных путей

- эритроциты

- тромбоциты

- Т-лимфоциты

11. Пандемии способны вызывать вирусы: 1

+ гриппа А

- Гриппа А и В

- гриппа А и С

- гриппа В и С

- гриппа С

12. Источник инфекции при гепатите В: 1

- кровь

- сперма

- сыворотка крови

+ вирусоносители, больные

- слюна

13. Пятна Филатова-Коплика характерны для: 1

- герпеса

+ кори

- краснухи

- паротита

- гриппа

?14. Лабораторная диагностика гепатита А предусматривает: 1

- обнаружение HBc-антигена

- выделение вируса из ликвора

+ обнаружение анти-HAV-антител класса IgM

- обнаружение HBs-антигена

- обнаружение HBe-антигена

15. Вирус гепатита В: 1

- содержит РНК

- относится к семейству Picornaviridae

- размножается на питательных средах

- передается аэрогенно

+ имеет суперкапсид

16. ВИЧ: 1

- устойчив к дезинфикантам

-устойчив к высокой температуре

+ содержит обратную транскриптазу

- содержит гемагглютинин

- передается воздушно-капельным путём

17. Вирус гриппа: много

- простой

- ДНК-содержащий

+ РНК-содержащий

- содержит гиалуронидазу

+ сложый

18. К ДНК-содержащим вирусам относится: 1

- вирус гриппа А

+ вирус простого герпеса

- вирус паротита

- вирус Коксаки

- ротавирус

19. Инкубационный период при клещевом энцефалите составляет: 1

- 2-10 часов

- 1-2 дня

+ 1-3 недели

- 3-4 месяца

- 1 год и более

20. В состав вакцины против гепатита В входит: 1

+ HBs-антиген

- HBe-антиген

- HBc-атиген

- гемагглютинин

- нейраминидаза

21. Вирус гепатита А: 1

- передается при переливании крови

+ относится к пикорнавирусам

- выдерживает часовое кипячение

- передается половым путём

- устойчив к автоклавированию

22. Антигенный шифт вируса гриппа – это: 1

- компонент нуклеокапсида

- белок

+ вид изменчивости

- элемент суперкапсида

- антиген

23. Вирус рода Enterovirus: много

+ РНК-содержащие

+ мелкие

- имеют спиральный тип симметрии

- имеют суперкапсид

+ не имеют суперкапсида

?24. Ротавирус: много

- содержит ДНК

+ содержит фрагментированную двухцепочечную РНК

- имеет пулевидную форму

?- имеет суперкапсид

+ относится к реовирусам

25. Вирус гепатита А относится к: 1

- сем. Picornaviridae, род Hepatovirus

26. Бешенство: 1

- источником инфекции является человек

- развивается при попадание в рану зараженной слюны плотоядных

+ резервуаром инфекции являются клещи рода Ixodes

- перенесённое заболевание оставляет прочный иммунитет

- относится к сапронозам

27. Вирус бешенства: 1

+ имеет пулевидную форму

28. Сущность научного открытия Ивановского Д.И.: 1

- создание первого микроскопа

+ открытие вирусов

- открытие явления фагоцитоза

- получение антирабической вакцины

- открытие явления трансформации

29. Заболевание у человека и животных вызывают вирусы: 1

+ гриппа А

- гриппа В

- гриппа С

- гриппа В и С

- гриппа А и С

30. Опоясывающий лишай – это: много

- бактериальная инфекция

+ рецидив ветряной оспы

+ герпетические высыпания по ходу нервов на коже

- грибковое поражение кожи

- хламидийное заболевание

31. Источником инфекции при эндемическом паротите: 1

- предметы обихода

- медицинский инструментарий

- вирусоноситель

+ больной человек

- больное животное

32. Вирус бешенства содержит: 1

- ДНК с дефектом одной цепи

- плюс-РНК

+ минус-Рнк

- кольцевую ДНК

- фрагментированную РНК

33. В состав вириона вируса гриппа входят: много

- днк

+ рнк

+ суперкапсид

- обратная транскриптаза

- рибосома

34. Изменчивость антигенной структуры вируса гриппа А может происходить путем: много

- трансформации

- трансдукции

+ антигенного дрейфа

+ антигенного шифта

- конъюгации

35. ВИЧ специфически связывается с клеточным рецептором: 1

+ CD4

36. Инкубационный период при ВИЧ инфекции составляет:

+ 2-4 недели

37. Вирусные гепатиты с фекально-оральным механизмом передачи: много

- гепатит В

- гепатит С

- гепатит Д

+ Гепатит А

+ гепатит Е

38. Вирус полиемиелита: много

+ содержит однонитчатую плюс-РНК

- содержит ДНК

- содержит липиды

- относится к крупным вирусам

+ поражает мотонейроны передних рогов спинного мзга

39. к ДНК-содержащим вирусам относятся: много

- вирус гепатита А

+ цитомегаловирус

+ вирус гриппа В

- вирус Коксаки

- ротавирусы

40. Антигенный дрейф вируса – это:

+ вид изменчивости

41. Нейраминидаза вируса гриппа: 1

+ расщепляет нейраминовую кислоту

?42. Интерферон: 1

- относится к антибиотикам

- обладает широким спектром противовирусной активности

- препятствует проникновению вируса в клетку

- обладает широким спектром антибактериальной активности

- присоединяется к комплексу “антиген-антитело”

43. Вирус гепатит С передаётся:

+ инструментальным путём

44. Впервые вакцину для профилактики бешенства создал:

+ Л. Пастер

45. Живая аттенуированная вакцина применяется для профилактики: много

+ полиемиелита

+ кори

- гепатита В

- клещевого энцефалита

- ВИЧ- инфекции

46. Инкубационный период при бешенстве: много

+ зависит от локализации укуса

- не зависит от места локлизации укуса

+ короче при укусе головы, шеи

+ может быть до 12 месяцев

- 1-2 дня

47. Поражение волос вызывают: много

+ Trichophyton schoenleini

- Cryptococcus neoformans

+ Microsporum canis

- Histoplasma capsulatum

- Epidermophyton floccosum

48. Через молоко коз передается вирус: 1

- бешенства

+ клещевого энцефалита

- Полиемиелита

- гепатита А

- гепатита В

49. Основной путь передачи при эпидемическом паротите: 1

- воздушно-пылевой

+ воздушно-капельный

- контактный

- трансплацентарный

- алиментарный

50. Умеренная репродукция ВИЧ происходит в: много

- В-лимфоцитах

- Т8-лимфоцитах

- макрофагах

51. Репродукция вирусов может происходить: много

+ в клеточных культурах

- на мясо-пептонном бульоне

- на кровяном агаре

- в среде 199

+ в организме лабораторных животных

52. Вирусы культивируют: много

+ в куриных эмбрионах

- в жидкой питательной среде

- на плотной питательной среде

- в полужидкой питательной среде

+ в культурах клеток

53. Вирус краснухи относится к виду:

+ Rubivirus

?54. Вирус бешенства: 1

- относится к ДНК-содержащим вирусам

- передается через воду

- вызывает у человека смертельный энцефалит

- передается с помощью переносчика

- не имеет суперкапсида

55. Живая вакцина Сэбина применяется для профилактики: 1

- гепатита А

- скарлатины

+ полиомиелита

- герпеса

- гриппа

56. Высыпания на коже и слизистой характерно для: 1

- клещевого энцефалита

+ кори

- гриппа

- полиомиелита

- бешенства

57. При ВИЧ-инфекции на всех стадиях инфекционного процесса наблюдается: 1

- лихорадка

- кандидоз

- герпес

- лимфаденопатия

- Саркома Капоши

58. Тельца Бабеша-Негри: много

- обр-ся в эпителиальных клетках

- выявляются при натуральной оспе

+ образуются в нервных клетках

+ выявляются при бешенстве

- относстся к внутриядерным включениям

59. Переносчиками возбудителя клещевого энцефалита являются: 1

+ иксодовые клещи

60. Вируснейтрализующими свойствами при гриппе обладают: 1

- антитела к нуклеокапсиду

- атитела к РНК

- атитела в ДНК

+ антитела к гемагглютинину

- антитела к М-белку

61. Представители рода Candida относстся к грибам: 1

+ несовершенным

- совершенным низшим

- базидиальным

- плесневым

- дрожжеподобным

62. Механизм передачи вируса гепатита А: 1

- трансмиссивный

- парентеральный

- половой

- инъекционный

+ фекально-оральный

63. Фекально-оральный механизм передачи характерен для: 1

- вируса эпидемического паротита

- ВИЧ

+ вируса полиомиелита

- вируса бешенства

- Вируса краснухи

64. Пути передачи при врожденной краснухе: 1

- контактный

+ трансплацентарный

- воздушно-капельный

- воздушно-пылевой

- алиментарный

65. Вакцина против гепатита В представляет собой: 1

- живую культуральную вакцину

- инактивированную культуральную вакцину

- сплит-вакцину

- генно-инженерную дрожжевую вакцину

- субъединичную вакцину

66. Вирус краснухи: много

- вызывает лихорадочное заболевание с сыпью

- передаётся кровососущими членистоногими

+ вызывает врождённые пороки сердца

+ вызывает врождённую глухоту

- вызывает воспаление слюнных желёз

67. Глубокие микозы вызывают грибы: много

+ Cryptoccocus

+ Histoplasma

68. Обратная транскриптаза содержится в составе вириона: 1

+ ретровирусов

Сущность научного открытия Ивановского Д.И.: открытие вирусов

РНК содержащими вирусами являются: вирус гриппа, вирус иммунодефицита человека

К просто устроенным вирусам относятся: ротавирус, вирус гепатита А

Вирус гриппа: РНК содержащий, имеет суперкапсид

Антигены вируса гриппа: нейраминидаза, гемагглютинин

Виды антигенной изменчивости вируса гриппа типа: антигенный дрейф

Вирусологический метод диагностики гриппа включает:заражение куриных эмбрионов

Исследуемый материал при гриппе: носоглоточный смыв, сыворотка крови

Для специфической профилактики гриппа используют: субъединичные вакцины, сплит вакцины

Классификация вирусов гриппа: семейство Orthomyxoviridae, род Influenzavirus

Вирусоносительство характерно для:цитомегаловируса

Вирусоносительство характерно для:герпеса

Для вируса бешенства характерно: нейротропность, образование телец Бабеша Негри

Классификация вируса бешенства: семейство Rhabdoviridae, род Lyssavirus

Вирус бешенства: РНК содержащий,пулевидной формы

Вирус бешенства имеет: РНК «- » нить, суперкапсид

Лабораторная диагностика бешенства основана на: обнаружении телец Бабеша Негри

Тельца Бабеша Негри определяются в цитоплазме нейронов при:бешенстве

Продолжительность инкубационного периода при бешенстве: зависит от количества вируса, попавшего в

рану, зависит от локализации укуса, короче при укусе в область головы и шеи

Для специфической профилактики бешенства используют: лошадиный иммуноглобулин, вакцину

Вакцину для профилактики бешенства разработал: Л. Пастер

Классификация вируса клещевого энцефалита:семейство Flaviviridae, род Flavivirus

Лабораторная диагностика клещевого энцефалита включает: определение антител класса IgM,

определение нарастания титра антител

Отечественные ученые, внесшие вклад в изучение клещевого энцефалита: Л.А. ЗильберМ.П. Чумаков

Переносчиками возбудителей болезни Лайма и клещевого энцефалита являются: таёжный клещ,

иксодовые клещи

Основной путь передачи возбудителя клещевого энцефалита: при укусе клеща

Активная специфическая профилактика клещевого энцефалита проводится с помощью:

инактивированных культуральных вакцин

Для вируса кори верно:геном представлен РНК

Коревая инфекция:оставляет прочный пожизненный иммунитет

Классификация вируса кори:семейство Paramyxoviridae, род Morbillivirus

Источник инфекции при кори:больной человек

Путь передачи при кори:воздушно капельный

Для специфической профилактики кори используют:живую вакцину

Вирус эпидемического паротита:РНК содержащий,имеет спиральный тип симметрии капсида,сложный

Источник инфекции при эпидемическом паротите:больной человек

Основной путь передачи при эпидемическом паротите:воздушно капельный

Для активной профилактики эпидемического паротита применяют:живую вакцину

Вирус краснухи:РНК содержащий

Источники инфекции при краснухе:больные люди, больные с бессимптомной формой инфекции,

дети с синдромом врожденной краснухи 1 2 го года жизни

Путь передачи вируса краснухи:воздушно капельный

Путь передачи вируса при врожденной краснухе: трансплацентарный

Вирус эпидемического паротита:обладает тропизмом к тканям слюнных желез

Характерная сыпь на коже и слизистых появляется при заболевании:корью

Что из перечисленного верно для ветряной оспы:механизм передачи аэрогенный,источник

инфекции – больной человек

Что из перечисленного верно для ветряной оспы:вирус персистирует в нервных ганглиях,

развивается вирусемия

Ротавирус:геном представлен фрагментированной двухцепочечной РНК,относится к реовирусам

Что из перечисленного относится к вирусу краснухи:вызывает лихорадочное заболевание с

сыпью, вызывает врожденные пороки сердца, вызывает врожденную глухоту

Живые вакцины применяются:для иммунизации против полиомиелита, против кори

Вирусы рода Enterovirus:РНК содержащие,имеют кубический тип симметрии,

Исследуемый материал для лабораторной диагностики полиомиелита: фекалии, ликвор Исследуемый материал для лабораторной диагностики полиомиелита:отделяемое носоглотки,

сыворотка крови

Источники инфекции при полиомиелите: больные, вирусоносители

Пути передачи инфекции при полиомиелите:алиментарный,контактный

Впервые массовое производство живой полиомиелитной вакцины на основе штаммов А.

Сэйбина осуществлено в:СССР А.А. Смородинцевым, М.П. Чумаковым (1959)

Вирус гепатита: РНК содержащий

Для гепатита А характерно: фекально оральный механизм заражения,антропонозная инфекция

Источник инфекции при гепатите: больной человек

Больной гепатитом А наиболее опасен для окружающих:в конце инкубационного периода, в

преджелтушный период

К вирусным гепатитам с парентеральным механизмом передачи относятся:гепатит Д,В,С

Вирусные гепатиты с энтеральным механизмом передачи:гепатит А, Е

Классификация вируса гепатита В:сем. Hepadnaviridae, род Orthohepadnavirus

Вирусоносительство характерно для:гепатита В

Источники инфекции при гепатите В:вирусоносители, больные

Пути передачи при гепатите В:инъекционный, половой

Для профилактики гепатита В применяют:генно инженерную дрожжевую вакцину

Источники инфекции при гепатите С:вирусоносители,больные

Профилактика гепатита С включает: качественную стерилизацию медицинских инструментов,

проверку донорской крови,миспользование одноразовых шприцев

Для ВИЧ характерно:наличие обратной транскриптазы,конусообразная сердцевина,наличие

суперкапсида

Рецептор ВИЧ, обеспечивающий взаимодействие с клетками мишенями:gp120

Источники ВИЧ инфекции:больные, вирусоносители

Пути передачи при ВИЧ инфекции: трансплацентарный, половой

Пути передачи при ВИЧ инфекции: транфузионный, инъекционный

От инфицированной матери к ребенку ВИЧ передается:в период внутриутробного развития,во время родов, при кормлении грудью.

Основной мишенью ВИЧ являются;Т хелперы

Рецептор клеток мишеней для ВИЧ:CD 4

Метод иммуноблоттинга предусматривает определение:антител к поверхностным и

сердцевинным антигенам

Грибы являются:гетеротрофами,эукариотами

Для выделения грибов используют среду:Сабуро

Основным методом лабораторной диагностики микозов является:микроскопический

Заболевания профессионального характера вызывают плесневые грибы рода:Penicillium

Aspergillus,Mucor

Этиологическими агентами глубоких микозов являются:Histoplasma capsulatum,Cryptococcus

Neoformans

Этиологическими агентами поверхностных микозов являются: Epidermophyton floccosum,

Trichophyton schoenleini, Microsporum canis

К противогрибковым антибиотикам относятся: нистатин, леворин

Поражение волос вызывают:Microsporum canis,Trichophyton schoenleini

Поражение кожи кистей и стоп, а также ногтей вызывает: Epidermophyton floccosum

Практическое занятие 29

Тема: Принципы и методы лабораторной диагностики вирусных инфекций. Ортомиксовирусы. Вирус гриппа. Биологические свойства. Патогенез и клиника гриппа. Лабораторная диагностика. Специфическая профилактика гриппа.

1. Принципы лабораторной диагностики вирусных инфекций

Разделы диагностики вирусных инфекций.

Диагностика вирусных инфекций включает в себя следующие разделы:

1. Клинико-эпидемиологический диагноз:

- анализ эпидемической обстановки;

- клинические проявления заболевания.

2. Лабораторные методы диагностики.

К данным эпидемической обстановки относятся сведения о скорости распространения болезни, об охвате инфекцией населения, о случаях смерти, сезонности, наличии переносчиков инфекции, вакцинации людей против данной инфекции и др.

Клиническ ие признаки болезни включают данные о температуре, пульсе, дыхании, состоянии кожных покровов и другие симптомы.

Тщательный анализ всех названных сведений позволяет поставить клинико-эпидемический диагноз, который носит только предварительный характер. Для того чтобы поставить окончательный диагноз на вирусное заболевание, необходимо провести лабораторные исследования материала, взятого от больных.

Лабораторные методы диагностики вирусных инфекций включают следующие процедуры:

- вирусоскопическое исследование препаратов;

- выделение и идентификация возбудителя;

- обнаружение антигенов вирусов в образцах исследуемого материала;

- обнаружение и определение титров противовирусных антител.

Вирусоскопическое исследование препаратов при диагностике вирусных заболеваний проводится с помощью экспресс-методов, позволяющих обнаружить в патологическом материале вирусные антигены, тельца-включения и элементарные тельца.

Для обнаружения вирусных антигенов в патологическом материале используют наиболее чувствительные методы, так как концентрация антигенов в нем обычно бывает низкой. Наиболее широко используют РИФ (реакция иммунофлуоресценции). Для этого из патологического материала готовят мазки-отпечатки или срезы, которые обрабатывают гипериммунными сыворотками, предварительно мечеными флуорохромами. Препараты просматривают с помощью люминесцентного микроскопа. У гемагглютинирующих вирусов вирусные гемагглютинины в материале обнаруживаются с помощью реакции гемагглютинации. Явление гемагглютинации - склеивание эритроцитов крови в присутствии вируса.

Тельца-включения - это внутриклеточные включения, образующиеся в клетках как результат репродукции в них некоторых вирусов. Как правило, РНК-вирусы образуют цитоплазматические включения, ДНК-вирусы - внутриядерные. Наиболее известны и имеют практическое значение тельца Бабеша-Негри, образуемые вирусом бешенства в цитоплазме нервных клеток. Обнаружение телец-включений при вирусных болезнях имеет лишь вспомогательное диагностическое значение. Крупные вирусы (элементарные тельца) в исследуемом материале обнаруживают под обычным световым микроскопом после их обработки солями тяжелых металлов (например, элементарные тельца при оспе).

Выделение и идентификация возбудителя - главное в диагностике вирусных инфекций. Для выделения вирусов используют следующие биологические системы:

- культуры клеток;

- куриные эмбрионы;

- лабораторных животных.

Культуры клеток. Для заражения культуры клеток во флаконы с монослоем вносят небольшое количество вируссодержащей суспензии. После небольшого контакта добавляют поддерживающую питательную среду и помещаются в термостат. В лабораториях используют следующие виды клеточных культур:

а) Первично-трипсинизированные культуры.

б) Полуперевиваемые линии клеток.

в) Перевиваемые линии клеток.

Признаками размножения вируса в культуре клеток является изменение морфологии клеток, их округление, гибель, фрагментация и другие изменения.

Куриные эмбрионы. Заражение куриных эмбрионов проводят следующими способами:

- на хорион-аллантоисную мембрану;

- в амниотическую полость;

- в аллантоисную полость;

- в желточный мешок.

Признаками размножения вируса в куриных эмбрионах являются их гибель и патологоанатомические изменения на оболочках и структурах эмбриона.

Лабораторные животные. Наиболее часто используют белых мышей, белых крыс, хомячков, морских свинок, кроликов, птиц и обезьян. Существует большое количество методов введения инфекционного материала лабораторным животным. Выбор метода заражения зависит от тропизма вирусов и чувствительности животного. За зараженными животными устанавливают контроль, отмечая изменение в их поведении, появление специфических признаков болезни. Признаками репродукции вирусов в организме животных являются их гибель, клинические признаки болезни и патологоанатомические изменения в тканях.

Идентификация вирусов. После выделения вируса необходимо провести идентификацию, то есть определить вид выделенного вируса. Идентификацию вирусов осуществляют по эффектам, наблюдаемым на животных моделях (повышение температуры тела, появление характерных клинических признаков, гибель и т. д.), куриных эмбрионах и культурах клеток. Под воздействием конкретных вирусов возможно изменение морфологии, роста, репродукции клеток, либо их разрушение. Факт размножения вирусов в чувствительных клетках in vitro определяют по следующим критериям:

- цитопатические эффекты;

- бляшкообразование;

- тельца включений;

- феномен гемадсорбции;

- “цветная реакция”.

Цитопатические эффекты (ЦПД - цитопатическое действие, ЦПЭ -цитопатический эффект) оценивают при микроскопии клеточных культур. ЦПД - это любые изменения клеток под влиянием размножающегося в ней вируса. Оно устанавливается под малым увеличением светового микроскопа. Формы ЦПД разнообразны - от едва заметных изменений в цитоплазме до полного распада клеток на фрагменты. Некоторые вирусы вызывают характерные цитопатические изменения, что позволяет быстро поставить предварительный диагноз. Например, размножение парамиксовирусов (вирусы кори, паротита) сопровождается появлением характерных гигантских многоядерных клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений больших круглых клеток, а при репродукции герпесвирусов клетки округлой формы диффузно располагаются по всему монослою.

Бляшкообразование. Бляшками называют негативные колонии - участки разрушенных клеток (зоны просветления) на монослое клеток, покрытом слоем агара. В некоторых случаях дозу и цитопатогенность вируса выражают в бляшкообразующих единицах (БОЕ).

Тельца включений. Многие вирусы вызывают появление в заражённых клетках характерных образований - скоплений вирусных белков или частиц, видимых в световой микроскоп. Тельца включений могут располагаться как в цитоплазме (тельца Гварнери при оспе), так и в ядрах клеток (аденовирусы).

Феномен гемадсорбции. Методом гемадсорбции обнаруживают вирусы, обладающие гемагглютинирующими свойствами. Гемадсорбция - это прилипание эритроцитов к поверхности клеток, зараженных гемагглютинирующим вирусом. Для наблюдения гемадсорбции необходимо из флакона с зараженной вирусом культурой клеток удалить культуральную жидкость и добавить 2-3 капли 2,5%-ной суспензии эритроцитов. Флаконы оставляют в горизонтальном положении в течение 10 минут, затем слой клеток споласкивают физраствором, чтобы смыть эритроциты. Если в зараженной культуре клеток происходит репродукция вируса, на таких клетках под микроскопом можно видеть адсорбированные эритроциты.

“Цветная реакция”. В культуральную среду, используемую для поддержания клеток, вносят индикатор. Рост клеток сопровождается накоплением метаболитов, сдвигом рН среды и изменением окраски индикатора. Заражение культур вирусом резко ингибирует клеточный метаболизм, и среда сохраняет первоначальный (красно-оранжевый) цвет. Если клетки остаются жизнеспособными, питательная среда желтеет.

Определение инфекционности вирусов. Наиболее доступная форма количественного определения - подсчет числа вирусных бляшек. Прямые тесты на инфекционность применяют для установления инфекционной дозы (ИД) или летальной дозы (ЛД) изучаемого вируса (обычно выражают в lg). ИД₅₀ - разведение, инфицирующее 50% клеток; ЛД₅₀ - разведение, убивающее 50% пораженных клеток или животных.

Количественную электронную микроскопию применяют для подсчета общего числа вирусных (но не инфекционных) частиц в исследуемом объекте (например, культуральной жидкости). Однако чаще всего этот метод недоступен из-за отсутствия столь дорогого и сложного прибора.

Для выявления вирусных антигенов наиболее распространенным методом является реакция гемагглютинации. Метод основан на способности вирусов сорбироваться на поверхности эритроцитов животных и человека.

Если вирус выделен на культуре клеток, и он дает гемадсорбцию, то используют реакцию торможения гемадсорбции - РТГАд.

Если вирус обладает гемагглютинирующей активностью, наиболее целесообразно для идентификации использовать реакцию торможения гемагглютинации - РТГА.

Если выделенный вирус указанными свойствами не обладает, то его идентификацию проводят с помощью реакции диффузной преципитации в агаровом геле - РДП. Но для постановки этой реакции вирусный антиген и гипериммунная сыворотка должны быть в высоких титрах, так как РДП обладает сравнительно низкой чувствительностью.

Если РТГАд, РТГА и РДП воспользоваться не представляется возможным, то для идентификации выделенного вируса используют реакцию связывания комплемента (РСК) с разными разведениями известных сывороток и несколькими дозами комплемента. Предпочтительнее ставить эту реакцию длительно на холоде (18-20 часов при +2…-4°С).

Наиболее универсальной и дающей более достоверные результаты при идентификации выделенных вирусов является реакция нейтрализации - РН. Вместе с тем постановка РН требует длительной работы и вложения большого труда.

ИФА. В настоящее время уже появились коммерческие наборы для выявления антигенов некоторых возбудителей, позволяющие их идентифицировать в течение 5-10 минут. Для выявления антигенов на твердой фазе сорбируют известные антитела и добавляют исследуемую сыворотку, содержащую антиген. После инкубирования несвязанный антиген декантируют, систему промывают и вносят меченые антитела, специфичные к сорбированным антителам. Повторяют процедуру инкубирования и отмывания, вносят хромогенный субстрат, положительный результат фиксируют при изменении окраски системы.

Гибридизация ДНК - высокоспецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его гибридизации комплементарными молекулами ДНК. В качестве маркёра применяют ферменты и изотопы. Метод определяет способность вирусной ДНК гибридизироваться с меченой комплементарной ДНК; специфичность метода прямо пропорциональна длине комплементарной цепочки. Перспективен метод гибридизации нуклеиновых кислот in situ. Для постановки реакции меченую ДНК наносят на биоптаты тканей (в том числе на фиксированные формалином или заключенные в парафиновые блоки) и регистрируют взаимодействие с комплементарной ДНК. Метод используют для выявления вирусов простого герпеса, папилломы человека, Эпстайна-Барр и др.

ПЦР. Метод значительно увеличивает чувствительность метода гибридизации, повышая содержание вирусной ДНК в материале, полученном от больного, а также ускоряет время получения результата.

Выявление противовирусных антител в сыворотке крови. Более простой и доступный подход - выявление противовирусных антител в сыворотке. Образцы крови необходимо отбирать дважды: немедленно после появления клинических признаков и через 2-3 недели. Чрезвычайно важно исследовать именно два образца сыворотки. На наличие заболевания в период отбора первой пробы указывает не менее чем четырехкратное увеличение титра антител, выявленное при исследовании второй пробы.

РТГА выявляет антитела, синтезируемые против гемагглютининов вирусов (например, вируса гриппа). Метод позволяет легко выявлять подобные антитела в сыворотке больного.

РСК - основной метод серодиагностики вирусных инфекций. Реакция выявляет комплементсвязывающие IgM и IgG, но не дифференцирует их.

РИФ. При возможности получить биоптат инфицированной ткани и доступности коммерческих наборов антител, меченных флюоресцеином, диагноз может подтвердить реакция прямой иммунофлюоресценции. Постановка реакции включает инкубацию исследуемой ткани с антителами, их последующее удаление и люминесцентную микроскопию образца.

Иммуносорбционные методы (например, ИФА и РИА) более информативны, поскольку выявляют IgM и IgG по отдельности, что позволяет делать определенные выводы о динамике инфекционного процесса или состоянии реконвалесценции. Для выявления антител известный антиген сорбируют на твердом субстрате (например, на стенках пробирок, пластиковых микропланшетах, чашках Петри) и вносят различные разведения сыворотки пациента. После соответствующей инкубации несвязавшиеся антитела удаляют, вносят антисыворотку к Ig человека, меченную ферментом, повторяют процедуру инкубирования и отмывания несвязанных антител и вносят какой-либо хромогенный субстрат (чувствительный к действию фермента). Поскольку изменение окраски пропорционально содержанию специфических антител, то вполне возможно определение их титра спектрофотометрическим способом.

Серологические методы диагностики вирусных болезней. В вирусологии широко используют следующие серологические реакции:

- нейтрализации – РН;

- торможения гемагглютинации – РТГА;

- непрямой гемагглютинации – РНГА;

- связывания комплемента – РСК;

- диффузной преципитации – РДП;

- торможения гемадсорбции – РТГАд;

- иммунофлуоресценции - РИФ.

1. Реакция нейтрализации (РН) основана на подавлении цитопатогенного эффекта после смешивания вируса со специфичными антителами. Неизвестный вирус смешивают с известными коммерческими антисыворотками и после соответствующей инкубации вносят в монослой клеток. Отсутствие гибели клеток указывает на несоответствие инфекционного агента и известных антител. Реакция нейтрализации ставится в двух модификациях: а) с разными разведениями исследуемой сыворотки и постоянной дозой известного вируса для обнаружения и титрования неизвестных противовирусных антител; б) с постоянным разведением известной гипериммунной сыворотки и разными дозами вируса для идентификации неизвестного выделенного вируса по индексу нейтрализации.

2. Реакция торможения гемагглютинации - РТГА. Ее принцип состоит в том, что при контакте вируса с гомологичными антителами происходит связывание антител с гемагглютининами вируса, в результате чего вирус теряет свойство агглютинировать (склеивать) эритроциты. Для этого исследуемую сыворотку в разных разведениях смешивают с одинаковыми дозами известного вируса и после контакта ко всем смесям добавляют суспензию эритроцитов, которые служат индикатором вирусных гемагглютининов. При высшем разведении исследуемой сыворотки, когда еще подавляется гемагглютинация, и определится титр антител в этой сыворотке.

3. Реакция непрямой гемагглютинации - РНГА. Ее принцип состоит в том, что эритроциты, на которых предварительно адсорбированы вирусы, приобретают способность агглютинироваться в присутствии гомологичных антител, содержащихся в исследуемой сыворотке крови. РНГА позволяет обнаруживать и титровать антитела. За титр антител в сыворотке крови принимают наибольшее ее разведение, которое вызывает агглютинацию сенсибилизированных вирусом эритроцитов. РНГА можно поставить макро- и микрометодами.

4. Реакция связывания комплемента (РСК). На первом этапе в реакции участвуют антиген и антитело, а также определенное количество предварительно оттитрованного комплемента. При соответствии вирусного антигена и специфического к нему антитела образуется комплекс, и он связывает комплемент, что выявляют на втором этапе с помощью индикаторной системы, состоящей из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки кролика. Если комплемент связался при взаимодействии вирусного антигена и специфических к нему антител, то лизис (растворение) бараньих эритроцитов не происходит, что свидетельствует о положительной РСК. При отрицательной РСК несвязанный комплемент способствует гемолизу эритроцитов, по которому судят о результатах реакций.

5. Реакция диффузной преципитации (РДП) основана на способности специфических антител сыворотки крови и специфических растворимых вирусных антигенов диффундировать в толще агарового геля навстречу друг другу, в результате чего образуется комплекс “антиген+антитело”. Этот комплекс не обладает способностью диффундировать в агар и выпадает в осадок на месте образования в виде полосы преципитации, видимой невооруженным глазом. Если же антитела и антиген не соответствуют (негомологичны) друг другу, то полосы преципитации не образуются, что свидетельствует об отрицательной РДП.

6. Реакция торможения гемадсорбции (РТГАд) основана на торможении гемадсорбции, если зараженную вирусом культуру клеток предварительно обработать специфической сывороткой, содержащей антитела к этому вирусу. Она позволяет идентифицировать гемагглютинирующий вирус в культуре клеток намного раньше появления отчетливых цитопатических изменений в пораженных вирусом клетках.

7. Реакция иммунофлуоресценции (РИФ). Ее сущность состоит в обработке препаратов-отпечатков из патологического материала сывороткой крови, содержащей специфические антитела к определенному вирусу и обработанной флуорохромом (веществом, способным светиться при облучении светом). Если вирусный антиген и меченая сыворотка, содержащая специфические к данному вирусу антитела, соответствуют друг другу, то происходит образование комплекса "антиген+антитело", и он обнаруживается с помощью люминесцентного микроскопа по специфическому свечению. Наибольшее распространение получила реакция прямой иммунофлюоресценции.

8. Иммуноэлектронная микроскопия (аналог предыдущего метода) позволяет идентифицировать различные виды вирусов, выявленные электронной микроскопией (например, различные виды герпесвирусов), что невозможно сделать, основываясь на морфологических особенностях. Вместо антисывороток для идентификации используют помеченные разными способами антитела, но сложность и дороговизна метода ограничивает его применение.

9. К методам, основанным на принципе использования меченых антител, относится иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA). Принцип метода состоит в обнаружении антигена, фиксированного на носителе, специфическими глобулинами, мечеными ферментами (пероксидаза хрена, кислая или щелочная фосфатаза). Фермент проявляют различными субстратами, дающими с ним характерное окрашивание, которое определяют фотометрическим методом.

10. Радиоиммунный метод основан на использовании меченого радиоактивным йодом антигена. Антиген, соединяясь с антителом, образует меченый иммунный комплекс антиген-антитело. Результат определяют на счетчике.

11. Метод иммуноэлектрофореза основан на способности антигенов и антител диффундировать в геле под действием электрического поля.

12. Торможение цитопатического эффекта интерференцией вирусов. Реакцию торможения цитопатического эффекта за счет интерференции вирусов применяют для идентификации возбудителя, интерферирующего с известным цитопатогенным вирусом в культуре чувствительных клеток. Для этого в культуральную среду, содержащую изучаемый вирус, вносят коммерческую сыворотку (например, к вирусу краснухи при подозрении на нее), инкубируют и заражают вторую культуру; через 1-2 дня в нее вносят известный цитопатогенный вирус (например, любой ЕСНО-вирус). При наличии цитопатогенного эффекта делают вывод о том, что первая культура была заражена вирусом, соответствовавшим применённым антителам.