Реакция агглютинации (ра)

Агглютинацией называется склеивание бактерий в результате взаимодействия

с ними специфических антител. Для проведения РА необходимы три компонента:

1) Антиген (агглютиноген);

2) Антитело (агглютинин);

3) Раствор электролита (изотонический раствор хлорида натрия).

В реакции агглютинации принимают участие только корпускулярные

антигены (бактерии, эритроциты, нагруженные антигеном частицы латекса).

Реакция агглютинации на стекле. На обезжиренное предметное стекло

пипеткой наносят каплю диагностической сыворотки (разведение сыворотки 1:10 -

1:20). Бактериологической петлей берут чистую культуру исследуемого

микроорганизма с поверхности скошенного агара, переносят в каплю сыворотки и

перемешивают. Результат реакции учитывают невооруженным глазом через 3-5

минут.

При положительной реакции в капле сыворотки отмечают появление

хлопьев (крупных или мелких), хорошо видимых на темном фоне при покачивании

предметного стекла.

В случае отрицательной реакции жидкость остается

равномерно мутной.

Реакция агглютинации в пробирках.

В ряд пробирок вносят по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку прибавляют равный объем исследуемой сыворотки крови. Готовят последовательные двукратные разведения

сыворотки (титрование сыворотки), после чего в каждую пробирку вносят по 2

капли взвеси инактивированных бактерий (диагностикум). Пробирки помещают на

2 часа в термостат при 37°С. Реакция протекает с образованием мелких хлопьев,

невидимых невооруженным глазом, поэтому учет результатов проводят под

небольшим увеличением в специальном приборе – агглютиноскопе.

Интенсивность агглютинации учитывают по системе “четыре плюса”: полная агглютинация - 4+,

частичная агглютинация - 3+ или 2+, сомнительный результат - +. За титр антител в

исследуемой сыворотке принимают последнее разведение, в котором наблюдается

агглютинация на 2+.

Реакцию агглютинации в пробирках (развернутая реакция агглютинации)

проводят для определения титра антител к возбудителям брюшного тифа и

паратифов (реакция Видаля), бруцеллеза (реакции Райта), сыпного тифа

(реакция Вейгля).

22. Взаимодействие антигена с антителом in vitro. Серологические реакции. Реакция преципитации.

Реакции антиген-антитело, происходящие in vivo – это важнейший защитный

механизм устранения чужеродных антигенов из организма путем образования

иммунных комплексов. Серологическими реакциями называются реакции

антиген-антитело, происходящие in vitro (в пробирке). Они используются для

количественного и качественного определения антигенов и антител в исследуемом

материале.

При постановке серологических реакций учитывают следующие условия:

наличие изотонического раствора (электролита), реакция рН (близкая к

нейтральной) и температура среды (от 20 до 37°С).

Серологические реакции применяются с целью решения следующих задач:

- для выявления неизвестного антигена (микроорганизма, белка и т.д.);

при этом используют диагностические иммунные антисыворотки, которые

получают путем многократной иммунизации лабораторных животных

соответствующими антигенами;

- для определения наличия и титра антител в сыворотке крови;

обнаружение антител проводят с использованием специальных антигенных диагностикумов (взвеси эталонных инактивированных микроорганизмов).

Таким образом, в серологических реакциях один из двух основных

компонентов (антигены или антитела) всегда должен быть известным.

В прямых серологических реакциях результат взаимодействия антигенов с

антителами наблюдается непосредственно по изменению оптических свойств

раствора (образование хлопьев, помутнение, опалесценция). К прямым

серологическим реакциям относятся реакции агглютинации, преципитации и

флоккуляции.

В непрямых серологических реакциях для визуализации результата

взаимодействия антигенов и антител используются индикаторные системы

(эритроциты, комплемент, лабораторные животные). К непрямым серологическим

реакциям относятся реакция связывания комплемента, реакция непрямой

гемагглютинации, реакция нейтрализации токсина антитоксической сывороткой, и

др.