25)Использование культур клеток и тканей в вирусологии. Питательные среды, солевые растворы и другие компоненты.

Культивирование вирусов в культурах ткани и клеток в вирусологии применяют в следующих целях:

1)для замены лабораторных и домашних животных при выделении и индикации вирусов;

2)для получения большого количества вируса, необходимого для производства биологических препаратов - вакцин и диагностикумов;

3)для изучения развития вируса в заряженных клетках.

Различают два типа культур: культуры растущих тканей и культуры переживающих тканей.

Наиболее распространенные способы выращивания культур клеток: первичные культуры клеток, культуры перевиваемых клеток и культуры диплоидных клеток. Первичные культуры клеток получают путем посева клеточной взвеси, приготовленной в результате ферментативного расщепления тканей.

Перевиваемые клетки - это культура клеток, способная к размножению вне организма неопределенно длительное время. Наиболее часто применяют культуры клеток, выделяемые из нормальных и раковых тканей человека.

Метод культивирования переживающих эксплантатов является одним из наиболее простых; его используют для выращивания вирусов. В отличие от культуры растущих тканей, где происходит рост клеток, тканевые эксплантаты способны лишь переживать, сохраняя присущую им жизнеспособность.

Культуры растущих (фиксированных) эксплантатов тканей - культивирование кусочков ткани, фиксированных в сгустке плазмы. В настоящее время в основном используют однослойные культуры клеток, растущие на стенке флаконов, пробирок, чашек Петри

По характеру входящих компонентов питательные среды подразделяют на две группы: 1) натуральные среды, содержащие естественные компоненты; 2) синтетические и полусинтетические среды.

Натуральные среды состоят из смеси соответствующих солевых растворов, сыворотки (животных и человека), тканевого экстракта (эмбрионов кур, коров, человека), гидролизата лактальбумина. Количество каждого ингредиента в различных прописях сред значительно варьирует.

Синтетические питательные среды можно подразделить на две основные группы: обеспечивающие рост и размножение клеток (ростовые), поддерживающие клетки в жизнеспособном состоянии в течение короткого срока (поддерживающие).

Поддерживающие синтетические и полусинтетические среды готовят, используя изотонические растворы с добавлением аминокислот, витаминов, коэнзимов и нуклеотидов. В таких средах клетки могут существовать непродолжительное время (2-7 сут.). Для более длительного поддержания некоторых видов клеток в жизнеспособном состоянии и обеспечения условий для их роста и размножения к синтетическим средам следует добавлять сыворотку животных (коров, телят и др.)

Основу питательных сред для выращивания культур клеток составляют солевые изотонические растворы. Все растворы готовят из химически чистых солей на деминерализованной или свежеприготовленной бидистиллированной воде (раствор версена, фенопрот, раствор нейтрального красного, кристалл виолета). Наиболее часто употребляют растворы Хенкса и Эрла: одно из преимуществ раствора Хенкса - большая стабильность. Растворы стерилизуют фильтрацией через пластины СФ или ЕК-2, а также автоклавированием при 70 кПа в течение 30 мин.

Для выращивания культур клеток используют сосуды различной формы и размера: бутыли, колбы, пипетки, резиновые трубки и пробирки. Посуда для этих целей должна быть из нейтрального стекла, пробки - из очищенной резины. В качестве моющих средств применяют гексаметафосфин, тринатрий фосфат, двууглекислую соду, соляную и серную кислоту, раствор двухромовокислого калия в серной кислоте (хромпик)