20. Микороскопические методы обнаружения элементарных телец и вирусных телец-включений.

Световой микроскоп при вирусологических исследованиях используют в следующих целях: для обнаружения в исследуемом материале крупных вирионов (элементарных телец) после предварительной обработки специальными методами; для обнаружения в культурах клеток разрушительных процессов, происходящих под влиянием вирусов.

Только крупные вирусы (оспа, эктима) могут быть обнаружены при соответствующих методах окраски в обычном световом микроскопе (вирусоскопия) при увеличении в 1350 раз (об. 90, ок. 15).

Мазки или отпечатки готовят из срезов свежего патматериала (везикулы, пустулы, мозг и др.); участок срезают лезвием безопасной бритвы и внутренней поверхностью среза однократно проводят (прикасаются) к предметному стеклу. Мазок высушивают на воздухе и на 3 мин. помещают в дистиллированную воду.

Для обнаружения крупных вирионов (элементарных телец) препарат обрабатывают специальными методами «сверхокраски», которые направлены на искусственное увеличение размеров вирионов до разрешающей способности светового микроскопа за счет адсорбции металла на поверхности вирусных частиц.

Метод окрашивания по Морозову. Мазок покрывают на 1...2 мин. жидкостью Руге, промывают дистиллированной водой и протравливают 1...2 мин. смесью танина и карболовой кислоты при подогревании до появления паров. Тщательно промывают дистиллированной водой и покрывают раствором аммиачного серебра на 1...2 мин. при легком подогревании, пока препарат не приобретет темно-коричневую окраску. Вновь промывают и сушат фильтровальной бумагой.

При недостаточной промывке мазка после танина раствор серебра может пожелтеть (дать осадок), тогда препарат следует вновь промыть и посеребрить. Под микроскопом на препарате элементарные тельца видны как мелкие округлые образования темно-коричневого цвета, расположенные поодиночке, парами, короткими цепочками и в виде скоплений.

Микроскопия вирусных телец-включений. Тельца-включения встречаются при многих вирусных инфекциях. Они представляют собой скопления вирусных частиц или клеточного материала, изменившегося при репродукции вирионов. Для постановки диагноза принимают во внимание локализацию телец-включений (внутриядерные или цитоплазматические), вид нуклеиновой кислоты (ДНК-, РНК-содержащие), тинкториальные свойства, гомогенность (аморфные, зернистые).

При некоторых инфекциях обнаружение телец-включений является одним из основных экспресс-методов диагностики (бешенство, оспа, ринопневмония лошадей и др.). При других инфекциях - это лишь вспомогательный метод (грипп, болезнь Ауески, ларинготрахеит птиц и др.).

Тельца Бабеша-Негри при бешенстве — это скопление в цитоплазме вирусных частиц в сочетании с продуктами клеточной реакции (в клетках центральной и периферической нервной системы, чаще в клетках аммоновых рогов).

Для их выявления препарат окрашивают по одному из методов (по Муромцеву, Манну, Туркевичу и др.) кислыми красками (эозином) в красный цвет; по периферии расположена светлая зона - мантия