5. Холера. Этиология, принципы лабораторной диагностики, профилактика.

Холера – заболевание, которое характеризуется острым тяжелым обезвоживающим поносом с испражнениями в виде «рисового отвара», являющегося следствием заражения V. сholerae.

Родина холеры – дельта рек Ганг и Брахмапутра. Заболевание отмечается в 500 г до н.э.

7 пандемий, IV периода.

С 1817- 1925 гг. было 6 пандемий холеры.

С 1960 по настоящее время идет 7 пандемия холеры.

I период – до 1817 г. – только в Юго-Восточной Азии, Индия;

II период – с 1817 до 1926гг. – Западная Европа, Америка, Азия, Россия; В России с 1823 по 1923гг переболело 5,6 млн. человек, умерло от неё более 2 млн.

III период – 1926 -1961- период относительного спокойствия, 6 пандемия.

IV период – с 1961 по настоящее время, 7-я пандемия:

- началась в Индонезии;

- вызвана не классическим вариантом, а Эль-Тор. Выделена у человека, умершего от дизентерии;

- по продолжительности превзошла все остальные; 69

- имеет 2-х волновой характер: 1-ая продолжалась до 1990г – серовар О1;

2-ая- с 1991г.- серовар О-139.

- переболело свыше 3 млн. человек.

В 1854 г холерный вибрион выделен поталогоанатомом Почини от трупа умершего.

В 1883г Р.Кох выделил возбудитель и охарактеризовал его.

В1906г супруги Готшлих выделили гемолитические вибрионы из трупов мусульман- паломников на карантинной станции Эль-Тор в Египте. Вызывает диарееподобное заболевание. Культура по б/х и культуральным свойствам напоминает V. сholerae, но вызывает лизис эритроцитов барана, резистентна к полимиксину и фагу IV.

Таксономия.

Сем. Vibrionaceae.

Род Vibrio

Plesiomonas

Aeromonas

Photobacterium

Род Vibrio насчитывает 25 видов, 8 имеют значение для человека.

1933г. Прибра´м (таксономист) охарактеризовал 2 биовара:

V. сholerae asiaticae (классический)

V. сholerae eltor

и 3 серовара V. сholerae О1 – Инаба

Огава

Гикошима.

V.сholerae asiatica и V. cholerae eltor объеденены в О1- Аг.

Морфология.

Короткие изогнутые или прямые палочки. Степень изогнутости 90°С- четверть окружности;

- Гр(-);

- спор, капсул не образуют;

- подвижность + (монотрих);

- размеры 3×0,5 мкм.;

- факультативные анаэробы со свойствами аэрофильности. Скапливаются в местах богатых О2, т.е. на поверхности воды.

Культуральные свойства.

На плотных средах – S-форма: гладкие, плоские колонии, d -2мм. Рост через 18 часов. Цикл деления клетки 15 мин. (короткий);

- на ЩА, рН 8,5 – колонии гладкие, стекловидно-прозрачные, вязкой консистенции. В проходящем свете – серовато-голубоватый оттенок;

- на TCBS (тиосульфат- цитрат- бромтимоловый - сахарозный агар + соли желчных кислот).

V. сholerae ферментируют сахарозу - рост желтых колоний на голубой среде;

- лактозо-сахарозная среда: лактоза (-), сахароза (К);

- столбик желатина разжижает через 2 сут при 22-23°С.

На жидких средах. 70

- на 1% п.в. (рН 8,6-9,0 + 0,5-1% NaCl) через 6 ч -пленка голубовато-сероватого цвета, спаянная с краями пробирки, бульон прозрачный. При встряхивании пленка разрывается и оседает на дно пробирки;

- в молоке – через 24-48 ч свертывание, затем пептонизация, а через 3-4 дня погибают из-за сдвига рН в кислую сторону.

Температурный оптимум 37°С, Т диапазон 10-40°С;

рН 8,6-9,0, могут размножаться от 6 до 9,6; оптимум 7,6-7,7 (у энтеробактерий – 7,0-7,2).

Некоторые виды не растут в отсутствии NaCl (галофильные вибрионы).

По способности ферментировать 3 углевода разбиты на 8 хемогрупп (триада Хейберга): - манноза

- арабиноза

- сахароза.

V. сholerae О1 относится к 1 группе: манноза (+), сахароза (+), арабиноза (-).

Антигенное строение.

- Н-Аг – термолабильный, белковый, жгутиковый, общий для рода Vibrio (холерные вибрионы и вибриозы).

- О-Аг –термостабильный, по О-Аг выделяют 139 серогрупп: О1-О139.

V.сholerae asiatica и V. cholerae eltor объеденены в О1.

О1 Аг состоит из 13 фракций, Vibrio сholerae состоит из 5 – А, В,С,Д,Е :

- А – видоспецифическая, присутствует у всех 3 сероваров;

- В и С –типоспецифические.

Выделяют 3 серовара: АВ – Огава;

АС - Инаба;

АВС - Гикошима.

Сероваротипирование используется для эпидемиологического маркирования – для дифференциации очагов по возбудителям, иногда от одного больного можно выделить бактерии разных сероваров. Холерный вибрион в стадии диссоциации имеет ОR- и R- Аг, поэтому для идентификации V.сholerae используют диагностические сыворотки О1, ОR и типоспецифические Инаба и Огава.

В 1992-93гг в Индии, Китае, Малазии появился новый серовар О-139, он гомологичен О1, отличается только по Аг структуре – результат мутации.

НАГ – вибрионы (неагглютинирующиеся), холероподобные вибрионы не агглютинируются антисыворотками О1 и О139 (не О1, не О139).

Факторы патогенности.

1. подвижность, Mot (-) – вирулентность исчезает или снижается в 100-1000 раз;

2. хемотаксис – преодоление слизистого слоя и взаимодействие с эпителиальными клетками. Мутанты по Che (-) имеют сниженную вирулентность;

3. пенетрация слизи – способствует приближению к энтероциту.

Выделяют ферменты: муциназа

протеаза

нейроминидаза (готовит рецепторы для Vibrio) 71

лецитиназа;

4. адгезины – белки наружной мембраны, ЛПС;

5. возбудитель атакует эпителий, но сам внутрь энтероцита не попадает, синтезирует экзотоксин (холероген). Это термостабильный белок, разрушается фенолом и формалином, устойчив к действию протеолитических ферментов. Молекула токсина состоит из 2 компонентов: 2S A и 5S B.

Токсин А делится на: А1 – собственно токсин

А2 – связующая роль, формула токсина - А1А2В5.

Токсин В:

- распознает рецептор (моносиалоганглиозид) энтероцита и связывается с ним (gm1);

- формирует гидрофобный канал для прохождения А.

Внутрь энтероцита проникает А1, вызывает гидролиз НАД и отщепление АДФ-рибозы, которая связывается с регуляторной единицей аденилатциклазы. Комплекс ГТФ и аденилатциклаза вызывает гидролиз АТФ с образованием большого количества цАМФ. Токсин подавляет действие ферментов, которые в норме переводят цАМФ в АМФ. Через мембрану энтероцитов в кишечник уходят ионы К, Na, Cl и большое количество воды. Развивается диарея с нарушением ВЭБ;