Люминисцентная бактериоскопия (LED-микроскопия)
Молекулярно-генетические методы диагностики туберкулеза
Цели:
детекция и видовая идентификация: обнаружение в диагностическом материале ДНК МБТ и НТМБ
определение лекарственной чувствительности МБТ
анализ генома микобактерий (определенных локусов) для определения генотипа как метод молекулярной эпидемиологии
Особенности
выявление ДНК МБ может проводится в нативном материале и культурах возбудителя
выявление и определение лекарственной чувствительности в течение нескольких часов - 1-5 дней
ПЦР-диагностика
ПЦР- Real Teim
Молекулярно-диагностический тест GeneXpert
В течение нескольких часов проводится
Обнаружение МБТ
Определение ТЛЧ к рифампицину (основному препарату) в течение 2 часов
Видовая идентификация микобактерий
M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M M N |
|||||||||||||||||||||||
. . . . . . . . . . . |
. . |
. |
. |
. . |
A . . . . . |
. . |
o |
||||||||||||||||
T |
K |
K |
K |
X |
G G S |
U M C |
A |
I |
I |
S |
M H C c |
A |
c |
F |
p |
s |
s |
m |
|||||
B |
a |
a |
a |
e |
o |
e i |
l |
a |
e |
v |
n |
n |
c |
a |
a |
h |
b |
h |
o |
e |
m p |
||
c |
n |
n |
n |
n |
r |
n m c |
r |
l |
i |
t |
t |
r |
l |
e |
e |
s |
e |
r |
r |
e |
e |
y |
|
s |
s |
s |
o |
d |
a i |
e |
i |
a |
u |
r |
r |
o |
m m |
l |
c |
l |
t |
i |
g c |
c |
|||
o |
a |
a |
a |
p |
o |
v a |
r |
n |
t |
m a |
a |
f |
o |
o |
. |
e |
. |
u |
g |
m i |
o |
||
m s |
s |
s |
i |
n |
e e |
a |
u |
u |
|
c |
c |
u |
e |
p |
c |
s |
c |
i |
r |
a |
e |
b |
|
p |
i |
i |
i |
|
a |
n |
n |
m m |
|
e |
e |
l |
n |
h |
o |
s |
o |
t |
i |
t |
s |
a |
|
l |
i |
i |
i |
|
e |
s |
s |
|
|
|
l |
l |
a |
s |
i |
m u |
m u |
n |
i |
|
c |
||
Идентификация комплекса микобактерий туберкулеза –
только у МБТ выявляется вставочная последовательность ДНК IS6110
1.M. tuberculosis
2.M. africanum 3 M. bovis
4.M. bovis caprae
5.M. bovis BCG
6.M. microti
7.M. canetti
НТМБ: возбудители микобактериозов
Маркеры лекарственной устойчивости МБТ
Препараты |
Ген |
Продукт |
|
|
|
Рифампицин |
rpoB |
бета-субъединица РНК-полимеразы |
|
|
|
Изониазид |
katG |
каталаза-пероксидаза |
|
inhA |
участие в элонгации жирных кислот |
|
ahpC |
алкил-гидропероксид редуктаза |
|
oxyR |
регуляция оксидативного стресса |
|
|
|
Этамбутол |
embCAB |
арабинозилтрансферазы |
|
|
|
Стрептомицин, |
|
|
канамицин, |
|
|
капреомицин |
rrs |
16SRNA |
|
rpsL |
рибосомальный протеин 12S |
|
|
|
Пиразинамид |
pncA |
пиразинамидаза |
|
|
|
Фторхинолоны |
gyrA |
А-субъединица ДНК-гиразы |
|
|
|
За каждым случаем возникновения лекарственной устойчивости у МБТ стоит какая-либо мутация в геноме микобактерий
(мутация =>дефект протеина=>изменение метаболизма)
Определение лекарственной чувствительности МБТ
•Молекулярный скрининг с линейной пробой – технология ДНК-стрипов
•Набор GenoType® MTBDRplus
•рифампицин -rpoB
•изониазид - katG, inhA