Цитогенетический метод

Цитогенетический метод направлен на обнаружение генетических аномалий опухолевых клеток при гемобластозах. Наиболее широкое применение для молекулярной диагностики гемобластозов получили методы FISH (флуоресцентная in situ гибридизация) и ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Метод FISH основан на способности хромосомной ДНК-мишени связываться с отрезками ДНК-зонда, содержащими комплементарные ДНК-мишени последовательности. ДНК-мишенью при FISH является ядерная ДНК интерфазных клеток или ДНК метафазных хромосом, нанесенных на стекло.

ПЦР- метод амплификации (многократного копирования) специфических последовательностей ДНК с помощью специфического фермента – термостабильной ДНК-полимеразы (Tag-noлимераза). ПЦР представляет собой циклический процесс, включающий фазы денатурации ДНК, отжига (присоединение праймеров) и синтеза заданных участков ДНК. Чувствительность ПЦР-метода высока, возможно выявление одной опухолевой клетки с аномальной ДНК- или РНК среди 10¹¹ нормальных клеток. В настоящее время доказано, что появление гемобластоза сопровождается генетическими изменениями кариотипа. Цитогенетические исследования повышают количество надежных прогностических факторов, способствующих подбору и оценке адекватности терапии этим пациентам. При остром лимфобластном лейкозе наиболее часто встречаются первичные хромосомные аберрации (Абдулкадыров К. М. и др., 2004), представленные в таблице 2.

При остром нелимфобластном лейкозе в зависимости от варианта выделяют следующие изменения кариотипа (Абдулкадыров К. М. и др., 2004) (табл. 3).

Таблица 2

Первичные хромосомные аберрации при олл

Нарушение	Вовлекаемые гены	Типичный иммунофенотип
t(l;ll)(p32;q23)	AF1P;MLL	Mixed lineage
t(l;19)(q23;pl3)	РВХ!;Е2А	Mixed lineage
Dup(l)(ql2-21q31-32)	Не определены	Prc-B, B-cell
t(2;8)(pl2;q24)	IGK;MYC	B-cell
t(4;ll)(q21;q23)	AF4:MLL .	Early B-precursor,
del(6q)	MYB	Biphenotypic
+8	Не определены	B- or T-lineage
t(8;14)(q24;qll)	MYCTCRA/	B- or T-lineage
t(8;14)(q24;q32)	TCRD	T-lineage
t(8;22)(q24;qll)	MYC;IGH	B-cell
del(9p)	MYCIGL	B-cell
T/dic(9;12)(pll-13)	Не определены	B- or T-lineage
i(9q)	Не определены	Pre-B
t(9;22)(q34;qll)	Не определены	Pre-B
t(10;14)(q24;qll)	ABL;BCR	B-lineage.
t(ll;14)(pl5;qll)	HOXlhTCRD	T-lineage
t(ll;14)(pl3;qll)	RBTN1:TCRD	T-lineage
T/dcl(12p)	RBTN2;TCRD	T-lineage
t(14;18)(q32;q21)	He определены	B- or T-lineage
i(17q)	TGH;BCL2	B-lineage
-20	He определены	Mixed lineage
+21	He определены	B-lineage

Приблизительно у 95 % больных с клинико-морфологическими признаками хронического миелолейкоза выявляется специфический маркер – филадельфийская (Ph') хромосома, образующаяся в результате реципрокной транслокации t(9;22)(q34;ql 1). Примерно в 5 % случаев Ph'-хромосома является результатом сложных или простых вариантных (атипичных) транслокаций t(9;22). При сложных транслокациях в перестройках участвуют три и более хромосом, причем две из них – 9-я и 22-я – постоянно.

Таблица 3