Рбтл – реакция бласттрансформации лейкоцитов.

РБТЛ используется для определения физиологической активности (пролиферативного потенциала) клеток на неспецифические активаторы (митогены) и специфические антигены. Принцип реакции - активация лимфоцитов под влиянием стимулов с последующей трансформацией их в бласты. В качестве активаторов чаще всего используют ФГА (фитогемагглютинин) и конканавалин А (Кон-А).

В пробирку с питательной средой №199 помещают исследуемые лимфоциты и добавляют ФГА. Инкубируют 72-96 часов при 37^оС. Пробирку без добавления ФГА используют как контроль. Пробирки центрифугируют. Из осадка готовят мазки, окрашивают по Романовскому- Гимзе.

Оценка результатов. В контрольной пробирке бластных клеток нет, а в опытной должно быть 60-80% бластных клеток. Сниженное количество бластов свидетельствует о снижении пролиферативной активности лимфоцитов.

Лимфоциты Трансформация в бласты

Ртмл - реакция торможения миграции лейкоцитов

Принцип метода.

РТМЛ является одним из методов оценки функционального состояния Т- системы иммунитета. В основе реакции лежит способность Т-лимфоцитов выделять биологически активные субстанции – лимфокины, в том числе и факторы, ингибирующие миграцию лейкоцитов. Так, в нормальных условиях лейкоциты, помещенные в питательную среду при 37^оС, способны мигрировать, образуя через 18-24 часа так называемую зону миграции. Если в среду для культивирования добавить митоген (например, ФГА) или антиген, к которому сенсибилизирован организм, то лимфоциты, содержащиеся в культуре, активируются и начинают продуцировать фактор торможения миграции. При этом величина зоны миграции резко уменьшается. По степени торможения миграции лейкоцитов можно судить о лимфокинпродуцирующей способности иммунокомпетентных клеток, а, следовательно, об их функциональной активности. Есть несколько вариантов проведения реакции, один из них – капиллярный, для которого используют пятиканальные капилляры Трошанова.

Сравнивая зону миграции без митогена (контроль) с таковой в присутствии митогена (опыт), определяют индекс миграции (ИМ).

эритроциты+ лейкоциты

гранулоциты

	……
	…..
	…..
	…..
	……

опыт (гепаринизированная кровь пациента +питательная среда+ ФГА/ Аг)

контроль (гепаринизированная кровь +питательная среда)

	……………………………
	……………………………
	………………………………
	……………………………
	………………………………

Оценка результатов:

ИМ- индекс миграции лейкоцитов

ИМ = S опыт/S контроль. Норма (с ФГА) - 0,2-0,8.

В норме происходит выработка фактора торможения миграции лейкоцитов. Этот процесс может быть нарушен при ИД состоянии тогда индекс приближается к 1.

При проведении РТМЛ с антигенами (лекарства, аллергены, вакцины и т.д.) ИМ равный или менее 0,7 учитывается как положительный результат, свидетельствующий о сенсибилизации организма к данному антигену. У здорового человека в этом случае ИМ =1 (±0,2).