5. Вопросы для подготовки к занятию, основные термины и определения

Изучаемые вопросы:

7. Определение понятий иммунный статус и иммунограмма.

8. Лейкоциты крови, виды лейкоцитов, их морфология и основные функции.

9. Определение понятий лейкоцитоз, лейкопения, лейкоцитарная формула, относительные и абсолютные показатели лейкоцитарной формулы, основные причины сдвигов в лейкоцитарной формуле/

10. Схема лабораторной оценки иммунного статуса.

11. Методы оценки различных звеньев иммунной системы (клеточного, гуморального, фагоцитарного, системы комплемента и цитокинов).

12. Правила оценки результатов иммунограммы.

Практическая работа:

5. Изучить демонстрационные препараты, зарисовать:

мазкок крови, окраска по Романовскому –Гимза, , зарисовать виды лейкоцитов

определение субпопуляций лимфоцитов (иммунохимический метод)

реакция бласттрансформации

определение фагоцитарной активности (фагоцитоз с латексом)

НСТ- тест

6. Изучить результат реакции торможения миграции лимфоцитов в капиллярах, зарисовать.

7. Изучить результат определения уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови по Манчини, зарисовать.

8. Проанализировать результаты иммунограммы

Введение.

Исследованиями последних лет показано, что гнойно-септические, аутоиммунные, аллергические, онкологические заболевания, острые и хронические инфекции у детей и взрослых могут сопровождаться серьезными нарушениями в системе иммунитета.

Главными задачами клинической иммунологии являются иммунодиагностика нарушений иммунной системы, их лечение и профилактика. Несколько упрощая ситуацию, можно выделить три основных группы нарушений иммунной системы:

• количественная или функциональная недостаточность того или иного звена иммунитета, что ведет к развитию иммунодефицитного состояния,

• нарушения в распознавании антигена иммунной системой, что ведет к развитию аутоиммунных процессов,

• гиперреактивный или извращенный иммунный ответ, проявляющийся в развитии аллергических заболеваний.

На основании клинической картины врач иммунолог может и должен поставить предварительный диагноз и предположить характер повреждения иммунной системы. Так, например, частые бактериальные инфекции, такие как пневмония и отиты, чаще являются результатом дефекта в гуморальном звене иммунитета, тогда как вирусные и грибковые инфекции говорят о нарушениях в клеточном звене иммунитета. Задачей иммунодиагностики является определение нарушенного звена иммунной системы, что дает возможность уточнить клинический диагноз.

Задачами иммунологического исследования являются:

-иммунодиагностика,

-прогнозирование течения заболевания,

-контроль качества лечения,

-назначение иммунокоррегирующей терапии.

Иммунограмма – это набор иммунологических тестов, позволяющий оценить состояние иммунной системы. При оценке иммунного статуса должны соблюдаться основные правила:

-главным критерием является клиническая картина,

-исследования должны быть комплексными,

-наиболее показательными являются исследования в динамике

Первым этапом в оценке иммунного статуса являются гематологические показатели: СОЭ, количество лейкоцитов в 1л крови и лейкоцитарная формула, а также количество эритроцитов, содержание гемоглобина, цветовой показатель.

Увеличение количества лейкоцитов в периферической крови выше 10,0×10⁹г/л называется лейкоцитозом, уменьшение - ниже 4,0 ×10⁹г/л называется лейкопенией. Лейкоцитарная формула – процентное соотношение разных видов лейкоцитов в мазке крови. Норма: нейтрофилы палочкоядерные – 1-5%, нейтрофилы сегментоядерные – 40-70%, лимфоциты – 20-45%, моноциты – 3-8%, эозинофилы – 1-5%, базофилы – 0-1%. Более важным показателем чем процент клеток, является абсолютное содержание, т.е. количество того или иного вида клеток в 1л крови. Для лейкоцитоза (лейкопении) нехарактерно пропорциональное увеличение (уменьшение) числа лейкоцитов всех видов, в большинстве случаев изменяется содержание какого- либо одного типа клеток, что обозначают терминами нейтрофилёз, нейтропения, лимфоцитоз, лимфопения, эозинофилия, эозинопения, моноцитоз, монопения.

Нейтрофилёз сопровождает острые бактериальные инфекции, воспаление или некроз тканей, интоксикации и др. Нейтропения развивается при вирусных инфекциях, под влиянием ионизирующей радиации, при воздействии некоторых лекарственных веществ, авитаминозе, при аутоиммунных заболеваниях и др.

Эозинофилия наблюдается при аллергических заболеваниях, глистных инвазиях, при аутоиммунных заболеваниях.

Эозинопения характерна для начала инфекционно- токсического процесса. Уменьшение эозинофилов в послеоперационном периоде свидетельствует о тяжёлом состоянии больного.

Моноцитоз сопровождает целый ряд заболеваний – туберкулёз, бруцеллёз, сифилис, септический эндокардит, аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, ревматоидный артрит и др.), лейкозы

Для оценки иммунного статуса особое значение имеет абсолютный показатель лимфоцитов.

Абсолютный лимфоцитоз – для взрослых – более 4,0 ×10⁹г/л,

для детей - более 8,0 ×10⁹г/л.

Он встречается при вирусных инфекциях, коклюше, инфекционном мононуклеозе, остром вирусном гепатите, цитомегаловирусной инфекции, при заболеваниях лимфатической системы (например, хроническом лимфолейкозе).

Абсолютная лимфопения - при содержании лимфоцитов менее 1,0×10⁹г/л. Наблюдается при иммунодефицитных состояниях, панцитопении, СПИДе, при приёме кортикостероидов, тяжёлых хронических вирусных инфекциях, злокачественных новообразованиях, при хронической почечной недостаточности и др.

Поскольку при большинстве патологических состояний одновременно страдает несколько звеньев иммунной системы, важно оценить соотношения различных популяций и субпопуляций лимфоидных клеток. В качестве интегрального показателя, отражающего состояние иммунной системы, используется сумма различных индексов.

• ЛИИ - Лейкоцитарный индекс интоксикации, предложенный Кальф-Калифом (1941), определяется по формуле

ЛИИ = (4Ми+3Ю+2П+С) х (Пл+1)/ (Мо+Л) х (Э+1)

где Ми - миелоциты, Ю - юные, П – палочкоядерные, С - сегментоядерные, Пл - плазматические клетки, Мо - моноциты, Л - лимфоциты, Э - эозинофилы.

• ИРИ - иммунорегуляторный индекс - это соотношение CD4/CD8

• ЛТИ - Лейко-Т-клеточный индекс - это отношение количества лейкоцитов к числу Т-лимфоцитов в 1 мкл крови.

Исследование иммунного статуса включает в себя:

• оценку клеточного звена иммунитета

• оценку гуморального звена

• оценка фагоцитарного звена

• определение уровня общего комплемента и компонентов комплемента

• оценка интерлейкинового и интерферонового статуса

1. Оценка клеточного звена иммунитета

1. Количественные методы

• тесты розеткообразования

• определение субпопуляций лимфоцитов с помощью моноклональных антител -МКАТ с использованием флюоресцентной или ферментной метки

• проточная цитометрия

2. Оценка функциональной активности клеток иммунной системы

• РБТЛ-реакция бластной трансформации лейкоцитов

• РТМЛ- реакция торможения миграции лимфоцитов

2. Оценка гуморального звена иммунитета

• определение уровня иммуноглобулинов классов A,M, G в сыворотке крови и секретах

• определение циркулирующих иммунных комплексов ЦИК)

3. Оценка фагоцитарного звена

• определение поглотительной способности нейтрофилов

• определение переваривающей способности нейтрофилов

4. Оценка системы комплемента

определение уровня комплемента в сыворотке крови

определение компонентов комплемента (С1, С3, С5 и др.)

Выделение мононуклеаров крови для тестов розеткообразования и МКАТ

Наслаивание центрифугирование

Венозная кровь градиент

+гепарин плотности

+среда199 (верографин+фиколл)

плазма

кольцо агранулоцитов отбор агранулоцитов

градиент

эритроциты+гранулоциты

о тмывание клеток подсчет в камере Горяева разведение.