6. Олиго(dT) и полиуридировая кислота
на своем 3'-конце более или менее протяженную полиадениновую последовательность (средняя длина – около 100 адениловых остатков). Это обстоятельство дало возможность создать аффинный сорбент с групповой специфичностью к любой молекуле мРНК, содержащей такую последовательность. На матрице закрепляют комплементарный гомополимер олиго(U) или олиго(dT) длиной около 100 остатков. Наиболее распространённый сегодня коммерческий сорбент Oligo(dT) Cellulose (GE Helthcare, NEB,
Металлохелат аффинная хроматография
Л Men+ |
Y + XБ |
Л Men+ |
XБ +Y |
– хелатообразующий стационарный лиганд еn+ – ион металла
–обмениваемый подвижный лиганд
Б– белок с электронодонорной координирующей группо
Металлохелат аффинная хроматография
Cтационарные
Нитрилотриуксусная кислота |
Иминодиуксусная кислота |
(НТК, NTA) |
(ИДК, IDA) |
Металлы: Cu2+, Ni2+, Fe3+, Co2+, Zn2+
Основной вклад в связывание белка вносят остатки
His.
Стандартным подходом является введение в
рекомбинантные белки гистидиновых (чаще всего His6) последовательностей (якорей, тагов) для
упрощения процедуры очистки
Вклад в связывание вносят также остатки Cys и
Методы элюции |
Method 1 |
|
The simplest case. A change of |
|
buffer composition elutes the |
|
bound substance without |
|
harming either it or the ligand. |
Method 2
Extremes of pH or high concentrations of chaotropic agents are required for elution, but these may cause permanent or temporary damage.
Methods 3 and 4
Specific elution by addition of a substance that competes for binding. These methods can enhance the specificity of media that use group-specific ligands.
ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
СВОЙСТВО
БЕЛКА
ЗАРЯД
ГИДРОФОБНО
СТЬ/ГИДРОФИ
ЛЬНОСТЬ
РАЗМЕР
МЕТОД РАЗДЕЛЕНИЯ
ХРОМАТОГРАФИ
Я
ИОНООБМЕННАЯ (ИОХ, IEX) [АФФИННАЯ (АХ, AC)]
ГИДРОФОБНАЯ (ГХ, HIC) ОБРАЩЕННО ФАЗОВАЯ (ОФХ, RPC) [АФФИННАЯ (АХ, AC)]
ГЕЛЬПРОНИКАЮЩ
АЯ
(ЭКСКЛЮЗИОННАЯ , ГПХ, SEC)