- •Демидюк
- •ПРИНЦИПЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
- •ХНОЛОГИЯ БЕЛКОВЫХ ПРЕПАРАТ
- •ЛИТЕРАТУРА
- •БЕЛКИ СОСТОЯТ ИЗ АМИНОКИСЛОТ
- •ЙСТВА АМИНОКИСЛОТ ОЧЕНЬ РАЗНООБРАЗ
- •ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛКОВ
- •ОВЫЕ МОЛЕКУЛЫ АМФИФИЛЬНЫ И АМФОТ
- •ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ ТОЧКА БЕЛКОВ
- •И СИЛЬНО РАЗЛИЧАЮТСЯ ПО РАЗМЕРУ И Ф
- •ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
- •ХРОМАТОГРАФИЯ
- •Осы и пчелы
- •йшая система для колоночной жидкостной хроматог
- •Обращенно-фазовая хроматография
- •Гидрофобная хроматография
- •Ионообменная хроматография
- •Катионо- и анионообменники
- •АНИОНИТЫ КАТИОНИТЫ
- •ивые титрования катионо- и анионообменни
- •Гель-проникающая хроматография
- •Материалы для ГПХ
- •ределение молекулярной массы методом Г
- •ффинная (биоспецифическая) хроматограф
- •еры взаимодействий в аффинной хроматогр
- •Лиганды с индивидуальной специфичностью
- •Лиганды с групповой специфичностью
- •3. Нуклеозид
- •4. Триазиновые красители
- •. Лиганды для протеаз
- •6. Олиго(dT) и полиуридировая кислота
- •Металлохелат аффинная хроматография
- •Металлохелат аффинная хроматография
- •Методы элюции
- •ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
- •ЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ РАЗДЕЛЕН
- •Скорость движения идеализированной
- •Гель-электрофорез
- •Полиакриламидный гель
- •Агарозный гель
- •Агарозный и полиакриламидный гели
- •Вертикальный и горизонтальный электрофорез
- •Вертикальный электрофорез
- •Изоэлектрическое фокусирование
- •еление белков по размера с использованием
- •Гель-электрофорез: как это выглядит
- •ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
- •Центрифугирование –
- •Разделение осаждением
- •Диализ и ультрафильтрация
- •ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
- •СТРАТЕГИЯ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
- •ОСОБЕННОСТИ МЕТОДОВ РОМАТОГРАФИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ СПОЛЬЗОВАНИИ ИХ ДЛЯ ОЧИСТКЕ БЕ
- •МЕЖДУ ЧЕТЫРЕХ ОГНЕЙ
- •ТКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ВАРИАНТОВ ГЛУТАМИЛЭНДОПЕПТИ
- •ТЕЛЬЦА ВКЛЮЧЕНИЯ
- •чистка металлопротеазы термоактиномицет
- •Вопросы для
Демидюк
Илья
Валерьевич
(499) 196-1853 duk@img.ras.ru
ПРИНЦИПЫ ОЧИСТКИ БЕЛКОВ
ХНОЛОГИЯ БЕЛКОВЫХ ПРЕПАРАТ
МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ
КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ ЦЕЛЕВОГО ГЕНА
РЕКОМБИНАНТН ЫЙ ПРОДУЦЕНТ
КУЛЬТИВИРОВАН ИЕ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ
МАТЕРИАЛ:
РАСТИТЕЛЬНАЯ, ЖИВОТНАЯ ТКАНЬ; КУЛЬТИВИРУЕМЫЕ КЛЕТКИ БАКТЕРИЙ, ГРИБОВ, РАСТЕНИЙ, ЖИВОТНЫХ
ПРИРОДНЫЙ
ПРОДУЦЕНТ
СИНТЕ
З
БЕЛО
К
БЕЛКОВЫЙ ПРЕПАРАТ МЕДИЦИНСКОГО
НАЗНАЧЕНИЯ
ОЧИСТ КА
ЛИТЕРАТУРА
•Скоупс Р. Методы очистки белков. // М.: Мир, 1985.
•Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. // М.: Наука, 1985.
•Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. // М.: МЦНМО, 2002
БЕЛКИ СОСТОЯТ ИЗ АМИНОКИСЛОТ
Неполярные, алифатические R
G A P V Отрицательно заряженные
Полярные незаряженные R
L I M D E
|
|
|
Положительно заряженные |
S |
T |
C |
Ароматические R |
|
N Q F Y W K R H
ЙСТВА АМИНОКИСЛОТ ОЧЕНЬ РАЗНООБРАЗ
ГИДРОФОБНЫЕ
ЛИФАТИЧЕСКИЕ
АРОМАТИЧЕСКИЕ
|
|
CSS |
P |
|
|
|
|
||
V |
G A |
|||
T CSH |
||||
I L |
|
|||
M |
F |
Y |
K |
|
|
W H |
R |
ОЧЕНЬ МАЛЕНЬКИ МАЛЕНЬКИЕ
S |
N |
ЬНО |
D |
Q |
|
|
|
ОТРИЦАТЕЛ |
E |
|
ЗАРЯЖЕНН |
|
ЗАРЯЖЕННЫЕ |
|
|
|
ЫЕ |
|
|
ПОЛОЖИТЕЛЬНО |
|
|
ЗАРЯЖЕННЫЕ |
|
|
ПОЛЯРНЫЕ |
Диаграмма Венна свойств аминокислот адаптирована из
W.R. Taylor, The Classification of Amino Acid Conservation, J. Theor. Biol.
119 (1986): 205-218.
ПРОСТРАНСТВЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛКОВ
Первичная структура – последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи.
Вторичная структура – пространственная форма локальных участков белка. Определяется паттерном водородных связей между амидными и карбонильными группами основной цепи. Основные регулярные элементы вторичной структуры α-спирали и β- складчатые листы. Не описывает
Третичнаясп ц фическогоструктураположения– расположениеатомов в в пространстве.всех атомов одной
полипептидной цепи (включая боковые радикалы).
Четвертичная структура – организация мультисубъединичных белковых комплексов.
ОВЫЕ МОЛЕКУЛЫ АМФИФИЛЬНЫ И АМФОТ
2vq x
Распределение зарядов и гидрофобных областей на поверхности молекулы типичного глобулярного белка
ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКАЯ ТОЧКА БЕЛКОВ
Суммарный заряд
Изоэлектрическая точка – значение рН, при котором суммарный заряд молекулы (частицы) полиэлектролита равен нулю и она не движется в электрическом поле.
Изоэлектрическая точк
И СИЛЬНО РАЗЛИЧАЮТСЯ ПО РАЗМЕРУ И Ф
Молекулярная масса большинства белков находится в пределах от 6
Титин камбаловидной000мышцыдо 1 000человека000 Да—. самый большой из известных одиночных полипептидов, состоит из 38138 а.о.