- •ХРОМАТОГРАФИЯ
- •Осы и пчелы
- •йшая система для колоночной жидкостной хроматог
- •Обращенно-фазовая хроматография
- •Гидрофобная хроматография
- •Ионообменная хроматография
- •Катионо- и анионообменники
- •АНИОНИТЫ КАТИОНИТЫ
- •ивые титрования катионо- и анионообменни
- •Гель-проникающая хроматография
- •Материалы для ГПХ
- •ределение молекулярной массы методом Г
- •ффинная (биоспецифическая) хроматограф
- •еры взаимодействий в аффинной хроматогр
- •Лиганды с индивидуальной специфичностью
- •Лиганды с групповой специфичностью
- •3. Нуклеозид
- •4. Триазиновые красители
- •. Лиганды для протеаз
- •6. Олиго(dT) и полиуридировая кислота
- •Металлохелат аффинная хроматография
- •Металлохелат аффинная хроматография
- •Методы элюции
- •ЕТОДЫ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКО
ХРОМАТОГРАФИЯ
Хроматография – физический метод разделения веществ, основанный на их неравномерном распределении между неподвижной (стационарной) и подвижной (мобильной) фазой.
Мобильная фаза
A A
B B
Стационарная фаза
Осы и пчелы
http://antoine.frostburg.edu/chem/senese/101/matter/chromatography.shtml
йшая система для колоночной жидкостной хроматог
а – адсорбент (сорбент, обменник, смола)
б – хроматографическая колонка в – элюат г – делительная воронка
(резервуар для растворителя) д – элюент е – хлопковая вата
(поддерживающий пористый материал)
Смесь веществ А, Б и В, предварительно адсорбированная в зоне Г, разделяется при элюировании растворителем Д (элюентом) на независимые зоны, движущиеся по направлению к выходу из колонки.
Обращенно-фазовая хроматография
Для разделения на обращен- ных фазах максимальное удерживание наблюдается при элюировании чистой водой. С целью уменьшения удержива- ния к воде добавляют смеши- вающиеся с ней органические растворители – метанол,
ацетонитрил, диоксан, тетрогидрофуран. Элюирующая способность в приведенном ряду возрастает и определяется удерживанием растворителя на обращенной
Разделение по гидрофобностифазе при элюции водой.
Гидрофобная хроматография
Гидрофобные лиганды |
Ряд Гофмейстера – |
|
влияние ионов на растворимость белков |
Ионообменная хроматография
А. Противоионы
связаны
с ионами матрицы.
Молекулы пробы заряженные
противоположно по
отношению к матрице замещают
противоионы, в то
время как
нейтральные молекулы и молекулы имеющие одноименный с
матрицей заряд не
взаимодействуют с обменником и
элюируются.
B. Молекулы пробы вытесняются ионами
элюирующего
буфера. Обменник регенерирован и готов к повторному
Катионо- и анионообменники
АНИОНИТЫ КАТИОНИТЫ
ивые титрования катионо- и анионообменни
сильные |
слабые |
Гель-проникающая хроматография
-хроматография, гель-фильтрация, эксклюзионная хроматог
Размер растворенных веществ определяет их способность проникать в поры