Материалы для ГПХ
имеют разный диапазон фракционирования
ределение молекулярной массы методом Г
Гуанидин
Гель-хроматография может быть использована для обессоливания растворов ВМС и замены буфера
ффинная (биоспецифическая) хроматограф
Матрица используется для присоединения лиганда. Матрица должна быть физически и химически инертной.
Спейсер используется для улучшения связывания между лигандом и целевой молекулой
путем устранения стерических
Лиганд – молекула которая обратимо связывается со специфической целевой молекулой
или группой целевых молекул
еры взаимодействий в аффинной хроматогр
Антитело – антиген (белок, вирус, клетка) Фермент – субстрат, кофактор, ингибитор Нуклеиновая кислота (НК) – комплементарная НК Белок (рецептор, связывающий белок) – лиганд Металл – хелаторная группа в белке
Лиганды для аффинной хроматографии
бывают с индивидуальной и групповой
специфичностью.
Лиганды с индивидуальной специфичностью
Глутатион – глутатион-S-трансфераза
IgG
Лиганды с групповой специфичностью
1. Лектины
Лектинами называют белки или гликопротеиды растительного или животного происхождения, проявляющие более или менее избирательное сродство к Разнообразие остатков сахаров остаткам индивидуальных сахаров или групп сходных в реч ющихся природе не сахаров.
велико, но они в различных комбинациях входят в состав различных биологически активных веществ: полисахаридов, гликопротеидов, гликолипидов и др.
В аффинной хроматографии чаще других используется конканавалин А (Con A), который связывает молекулы содержащие альфа-D- маннопиранозил, альфа-D- глюкопиранозил и стерически сходные с ними остатки. Используют, например, для очистки иммуноглобулинов
богатых сахарами (IgM).
2.
Кофермент
А
Кофермент А участвует во множестве ферментативных реакций и имеет широкое применение в качестве лиганда с групповой специфичностью. Его закрепляют на матрице через аминогруппу остатка аденина, оставляя свободным концевой тиоловый радикал.
3. Нуклеозид
фосфаты
В качестве аффинных лигандов с групповой специфичностью часто используют нуклеозидфосфаты: моно-, ди-, трифосфаты аденозина, гуанозина и уридина, а также
аденозин-3',5'-циклофосфат. Выпускают также сорбенты с самими
НАД и НАДФ в качестве лигандов. (Закрепление на матрице через
аминогруппу остатков аденина.)
Такой набор лигандов определяется тем, что соответствующие сорбенты обладают групповой специфичностью ко многим ферментам, использующим в
качестве коферментов НАД
+
4. Триазиновые красители
Red Sepharose
Procion Red HE-3B
Blue Sepharose
Cibacron Blue F3G-A
Эти красители образуют группу лигандов используемых для очистки различных белков. Торговое название ‒ проционовые красители. Наибольшее
распространение
. Лиганды для протеаз
протеаз могут служить главным образом аналоги субстратов и ингибиторы. Коммерчески доступны сорбенты для протеаз несущие в качестве лигандов
аминокислоты и пептиды (аргинин, триптофан, Аla-Ala-Ala), аналоги субстратов (Gly-Tyr-азобензилянтарная кислота), синтетические и природные ингибиторы трипсина (п-аминобензамидин) и химотрипсина, ингибитор кислых протеиназ пепстатин, природные антибиотики