Барам_Курс лекций ВЭЖХ для ВСЕХ [2007]
.pdf
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
ДЕГАЗИРОВАНИЕЭЛЮЕНТОВ |
||
Гелиевый дегазатор |
Вакуумный дегазатор |
|
Гелий из баллона |
К насосу |
К насосу |
Предохранительный |
|
|
клапан (0.5-1 атм) |
|
Капилляр с |
|
|
|
|
|
газопроницаемыми |
|
|
стенками |
Распылитель |
Фильтр |
Вакуум |
|
|
|
ДРУГИЕ СПОСОБЫ ДЕГАЗИРОВАНИЯ: |
||
|
- кипячение |
|
|
- вакуумирование |
|
|
- обработка ультразвуком |
|
|
- разовая продувка гелием |
|
|
- содержание в теплой бане |
|
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
ДЕГАЗИРОВАНИЕЭЛЮЕНТОВ |
||
Детектирование при повышенном давлении |
||
Ячейка детектора Запорный
клапан
Мембрана
Р≈1÷2 атм 
Р=0 атм
60
ВЭЖХ - 2006
ИНЖЕКТИРОВАНИЕОБРАЗЦА
ВКОЛОНКУ
Инжектирование без остановки потока
Дозирование раствора |
Инжектирование раствора |
Дозирование раствора |
|||||||||||||||
образца в петлю |
образца в колонку |
нового образца |
|||||||||||||||
|
|
|
Петля |
Промывка крана |
|
|
|
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Раствор
образца
КРАН
В колонку |
Из насоса |
В колонку |
Из насоса |
В колонку |
Из насоса |
ВЭЖХ - 2006
ИНЖЕКТИРОВАНИЕОБРАЗЦА
ВКОЛОНКУ
Инжектирование с остановкой потока
Дозирование раствора |
Инжектирование раствора |
||||||||
образца в инжекционную иглу |
образца в колонку и |
||||||||
|
|
Элюент |
начало элюирования |
||||||
|
|
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Раствор
образца
НАСОС-ШПРИЦ КОЛОНКА
61
ВЭЖХ - 2006
НАСОСЫДЛЯВЭЖХ
Плунжерный насос
|
|
|
НАБОР В КАМЕРУ |
ВЫДАВЛИВАНИЕ ИЗ КАМЕРЫ |
|||||
|
|
|
|
|
Элюент |
||||
|
|
|
Уплотнение |
|
|
Выходной |
|||
|
|
|
|
|
|
|
клапан |
||
|
|
|
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кулачок- |
Плунжер |
эксцентрик |
Входной |
|
|
клапан |
Элюент
ВЭЖХ - 2006
НАСОСЫДЛЯВЭЖХ
Циклограмма плунжерного насоса
ОТНОСИТЕЛЬНАЯ СКОРОСТЬ
ПЕРЕМЕЩЕНИЯ ПЛУНЖЕРА
Насос с одним плунжером
1.0
0.8
0.6
0.4 |
|
|
|
Fсред |
0.2 |
|
|
|
|
0.0 |
|
|
|
|
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
ЧИСЛО ОБОРОТОВ ЭКСЦЕНТРИКА
|
Насос с двумя |
|
||
|
плунжерами |
|
||
|
|
|
|
Fсред |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
62
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
|
|
|
ГРАДИЕНТНОЕЭЛЮИРОВАНИЕ |
|||
|
|
|
|
[B] |
|
|
Объем (Время) |
||
|
IV |
|
|
Градиенты концентрации "сильного" |
|
|
|
компонента "В" в двухкомпонентной |
|
|
|
|
|
|
|
III |
V |
|
подвижной фазе ("А" + "В") |
|
|
[B] |
I - выпуклый градиент |
|
|
|
|
||
I |
|
|
II - вогнутый градиент |
|
II |
|
|
||
|
|
|
III - линейный градиент сB=a + bV |
|
|
|
|
|
IV - ступенчатый градиент |
|
Объем (Время) |
|
|
V - кусочно-линейный градиент |
|
|
|
|
|
ВЭЖХ - 2006 |
ГРАДИЕНТНОЕЭЛЮИРОВАНИЕ |
|||
|
||||
|
Адсорбционная хроматография |
|||
Для изократического элюирования k ' = k0' c−n где n и k0' − константы
|
|
|
1 |
2 |
|
1 |
2 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
[c] k' |
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
0 |
|
0 |
VR1 VR2 |
V |
|
|
|
2 |
log k' |
1 |
[c] |
log [c] |
Для линейного градиента с=a+bV
|
|
|
|
1 |
|
|
||
VR ≈ |
1 |
[(n +1) b k0' |
V0 |
+an+1 ] |
|
− |
a |
|
n+1 |
||||||||
b |
b |
|||||||
|
|
|
|
|
|
|||
63
ВЭЖХ - 2006
ГРАДИЕНТНОЕЭЛЮИРОВАНИЕ
Распределительная хроматография
Для изократического элюирования k'= k0' 10−n c где n и k0' − константы
1 |
2 |
1 |
|
2 |
|
2 |
|
|
|
|
logk' |
|
|
|
|
c[] |
k' |
|
1 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
|
|
|
|
0 |
|
|
|
|
0 |
VR1 VR2 |
V |
|
[c] |
|
[c] |
Для линейного градиента с=a+bV
VR ≈ n1b log(2.3 n b V0 k0' +e2.3 n a )− ab
ВЭЖХ - 2006 |
|
|
ГРАДИЕНТНОЕЭЛЮИРОВАНИЕ |
||
Способы формирования градиента |
|
|
A |
Смешивание при |
|
высоком давлении |
|
|
Насос А |
Смеситель |
|
|
В колонку |
|
B |
В колонку |
|
Насос В |
A |
|
|
|
|
|
Клапан |
|
|
Смеситель |
Насос |
|
B Смешивание при |
|
|
низком давлении |
|
|
64 |
|
ВЭЖХ - 2006
ХРОМАТОГРАФЫ "МИЛИХРОМ"
Градиентное элюирование "Милихром А-02"
|
|
|
|
|
|
Раствор Б: |
Раствор А: |
|
|
|
|
|
|
Вода |
|
|
|
|
|
Метанол+Уридин |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
А260
I
0 800 1600 2400
|
|
|
Метанол+Уридин |
100%Б |
|
|
|
|
|
400 |
|
|
II |
|
III |
мкл |
|
|
|
|
|
Вода |
0%Б |
|
|
|
|
|
|
0 |
400 |
800 |
1200 мкл |
|
|
ВЭЖХ - 2006
ХРОМАТОГРАФ "МИЛИХРОМА-02"
Внеколоночное уширение пиков
N=5.54(VR/w)2, т.т.
Колонка: 2х75 мм, Nucleosil 100-5 C18, 150 мкл/мин |
|
|
|
|||||||
|
|
|
|
|
|
Метил- |
Алкилбензоаты |
|||
5000 |
|
|
5 |
a |
|
Этил- |
|
|
|
|
3 |
4 |
|
1 |
|
|
|
||||
|
|
b |
|
Пропил- |
|
|
||||
|
|
|
|
|
|
|||||
4000 |
2 |
|
|
|
|
|
2 |
|
|
|
1 |
|
|
|
|
|
Бутил- |
|
|||
|
Выходной |
|
|
|
3 |
|
Пентил- |
|
||
|
|
|
|
|
|
|
||||
3000 |
|
капилляр: |
|
|
|
|
4 |
5 |
|
|
|
a- 0.15х50 мм |
|
|
|
|
|||||
|
|
|
|
|
|
|
||||
2000 |
|
b- 0.30х50 мм |
|
|
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
2 |
4 |
6 |
8 |
0 |
2 |
4 |
|
6 |
8 |
|
|
|
k' |
|
|
Время, мин |
|
|
||
65
ВЭЖХ - 2006
РАЗМЫВАНИЕ
КОНЦЕНТРАЦИОННЫХЗОН
Соединение капилляров
неправильное
A |
B |
правильное
C |
D |
ВЭЖХ - 2006
ТЕРМОСТАТИРОВАНИЕКОЛОНКИ |
|||||||||
|
|
|
|
|
T=35OC |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
T=36OC |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
58 мкл |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
0.39 мин |
|
|
|
A250 |
|
|
|
|
|
|
|
|
0 |
300 |
600 |
900 |
1200 |
1500 |
1800 |
2100 |
2400 |
мкл |
Хроматограф: "Милихром А-02"
Колонка: 2х75 мм, Nucleosil 100-5 C18
Элюент: Вода:Метанол (25:75)
Скорость потока: 150 мкл/мин
Образец: 5 мкл раствора изопропилбензола, нафталина,
бифенила, антрацена, пирена и хризена в метаноле
66
ВЭЖХ - 2006
ДЕТЕКТОРЫВВЭЖХ
|
|
Фотометр |
A |
Элюат |
B |
|
|
|
|
Ячейка |
|
Лампа |
|
Фотоприемник |
|
Элюат |
|
ВЭЖХ - 2006
МНОГОВОЛНОВАЯДЕТЕКЦИЯ
Двухлучевой спектрофотометрический детектор
1 |
2a |
3 |
2b |
|
|
|
4 |
5 |
|
6 |
|
7a |
7b |
1- лампа
2- зеркала
3- поворачивающаяся дифракционная решетка
4- полупрозрачное; плоское зеркало
5- плоское зеркало
6- проточная измерительная ячейка
7- фотоприемники
67
ВЭЖХ - 2006
МНОГОВОЛНОВАЯДЕТЕКЦИЯ
Спектрофотометр с диодной линейкой (матрицей)
2
3 |
4 |
5 |
1
1- лампа
2- линза
3- заслонка, перекрывающая световой поток для измерения темнового тока 4- проточная измерительная ячейка
5- дифракционная решетка
6- линейка (матрица) фотодиодов
ВЭЖХ - 2006
МНОГОВОЛНОВАЯДЕТЕКЦИЯ
Спектрофотометрический УФ-детектор хроматографа "Милихром А-02"
D2-лампа
Дифракционная решетка с механизмом поворота
Зеркало модулятора
Фотодиод
Измерительная
ячейка
68
ВЭЖХ - 2006
ДЕТЕКТОРЫВВЭЖХ
Флуориметр
A B
Элюат
Ячейка
Лампа
Фотоприемник
ВЭЖХ - 2006
ДЕТЕКТОРЫВВЭЖХ
Рефрактометр
Поляриметр
Радиометр
Кондуктометр рН-метр Полярограф Диэлкометр ИК-спектрометр ЯМР-спектрометр и др.
69