3.Специфичность ферментов

Принцип работы: каждый фермент может катализировать только одну реакцию, действуя на одно вещество или ряд близко родственных веществ. Высокая специфичность - одно из наиболее характерных свойств ферментов. Амилаза слюны ускоряет гидролиз только полисахаридов и не оказывает никакого действия на дисахариды. В случае расщепления сахарозы на глюкозу и фруктозу реакция Троммера должна быть положительной. При расщеплении крахмала до глюкозы эта проба также положительна.

1. Работа проводится с 2 пробирками по следующей схеме:

Реактивы	№ пробирки		Результаты опытов по реакции (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
	1	2	с раствором Люголя	с раствором Троммера
Крахмал	2 мл	-
Сахароза (1% раствор)	-	2 мл
Амилаза	0,5 мл	0,5 мл

2. Далее пробирки ставят на 10 минут в термостат при температуре 38^оС.

3. После термостатирования с содержимым пробирок проделывают реакции с йодом на присутствие крахмала и пробу Троммера на присутствие глюкозы:

1 мл исследуемого раствора + 0,5 мл 10% раствора гидроксида натрия + 5 капель 1% раствора сульфата меди.

Пробирку нагревают в кипящей водяной бане. При наличии глюкозы появляется желтое окрашивание, переходящее в красное. 

4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов

В данной работе исследуется влияние на каталитическую активность амилазы слюны хлорида натрия и сульфата меди.

Нумеруются три пробирки. В пробирку №1 наливают 1 мл воды; в пробирку № 2 - 0,8 мл воды и 0,2 мл. 1% раствора хлорида натрия, в пробирку № 3 - 0,8 мл воды и 0,2 мл 1% раствора сульфата меди.

Во все пробирки добавляют по 1 мл разведенной слюны и по 1 мл 0,5% крахмала и оставляют на 3 мин. при комнатной температуре. Затем проверяют действие ферментов в пробирке №2, где предполагается наибольшая активность амилазы. Для этого из пробирки №2 отбирают несколько капель и проделывают пробную реакцию с йодом; эту реакцию повторяют каждые 20—30 секунд, пока не получат оранжевое или желтое окрашивание. Затем добавляют йод в пробирки № 1, 2, 3. Отмечают окрашивание и записывают результаты в виде таблицы.

Схема записи протокола опыта

№ пробирки	Объем воды, мл	Модулятор	Фермент амилаза, мл	Субстрат (крахмал 0,5%), мл	Результат опыта по реакции с йодом (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
1	1	-	1	1
2	0,8	0,2 мл хлорида натрия	1	1
3	0,8	0,2 мл сульфата меди	1	1

Часть 2. Исследование химического состава слюны