Часть 1. Изучение физико-химических свойств ферментов на примере амилазы слюны

Будучи по своей химической природе белками, ферменты обладают всеми свойствами белков: термолабильностью, амфотерностью, способностью образовывать коллоидные растворы и т. д. Кроме того, им присущи характерные только для них свойства: высокая специфичность, действие при определенном значении рН среды и др.

1.Влияние температуры на активность ферментов

1. В 4 пробирки отмерить по 2 мл крахмала. Пробирки поместить в разные температурные условия:

а)   в кипящую водяную баню 100^оС

б)  в термостат на 40 ^оС

в)  оставить в штативе (комнатная температура)

г)   поставить в снег.

3. Через 10 мин, когда содержимое пробирок примет заданную температуру, во все пробирки добавляют по 0,5мл разбавленной слюны, перемешивают с помощью стеклянной палочки и оставляют в тех же условиях.

4. Тотчас же начинают делать капельные пробы на стекле. Две капли содержимого второй пробирки капают на стекло, к ним добавляют 1 каплю раствора Люголя. Вначале получается синее окрашивание, через 1-2 мин. пробу повторяют до появления красно-бурой окраски.

4.Как только окраска содержимого второй пробирки окажется красно-бурой, прибавляют во все пробирки 1-2 капли раствора Люголя и отмечают время окончания ферментативной реакции.

5. После проведения опыта все пробирки переносятся в штатив и записывают результаты опыта.

Схема записи протокола опыта

№ пробирки	Фермент амилаза, мл	Объем 0,5% крахмала, мл	Температура, оС	Результат опыта с раствором Люголя (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
1	1	2	100
2	1	2	40
3	1	2	20
4	1	2	0

2. Влияние рН среды на активность амилазы слюны

Содержимое каждой пробирки после прибавления слюны тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре (20^оС) на 15—20 мин. Через 10 мин. берут пробы из третьей пробирки, переносят на стеклышко и проделывают реакцию с каплями раствора Люголя. Вначале обычно получается синее окрашивание, затем фиолетовое, фиолетово-красное, красно-бурое, желтое. Как только содержимое третьей пробирки будет давать желтое окрашивание, через 1—2 минуты приливают во все пробирки по 1 капле раствора Люголя.

На основании полученной окраски судят о степени расщепления крахмала в зависимости от рН среды.

Схема записи протокола опыта

№ пробирки	рН буферного раствора	Объем растворов для получения буферного раствора с заданным рН		Субстрат (крахмал) 0,5%	Фермент амилаза	Результат опыта с раствором Люголя (рисунок пробирки с полученным цветом раствора)
		1/15М дигидрофосфата калия	1/15М гидрофосфата натрия
1	5,6	0,25	4,75	1	1
2	6,2	1	4	1	1
3	7	3	2	1	1
4	7,4	4	1	1	1
5	8	4,75	0,25	1	1