6. Обнаружение глюкозы в моче: проба Гайнеса-Акимова, тест полоской типа «глюкотест»

Унифицированный метод определения с помощью индикаторных полосок Метод основан на специфическом окислении глюкозы с помощью фермента глюкозооксидазы; образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается пероксидазой и окисляет краситель. Изменение окраски красителя при окислении свидетельствует о присутствии глюкозы в моче. Реактивная бумага “Глюкотест” представляет собой полоски бумаги 0,5 ґ 5 см, имеющие поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную раствором ферментов и красителя. С помощью бумаги “Глюкотест” можно обнаружить глюкозу в моче и ориентировочно определить ее концентрацию. Ход исследования Индикаторную бумагу погружают в исследуемую мочу так, чтобы желтая полоса с реактивами оказалась смоченной, после этого ее немедленно извлекают из мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой пластинке. По истечении 2 мин сразу же сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы на бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски. Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °С, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски. Исследуют свежесобранную мочу; при содержании в моче глюкозы более 20 г/л интенсивность окраски цветной полосы становится предельной (соответствует 2% по шкале) и далее не меняется. Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче. Проба Гайнеса Можно использовать готовый набор реактивов. Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета). Для того чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок окиси меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди. Необходимые реактивы 1. Реактив Гайнеса: 13,3 г кристаллического сульфата меди (СuSO4 ґ 5Н2О) растворяют в 400 мл дистиллированной воды. 2. 50 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды. 3. 15 г глицерина растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Далее первый и второй растворы смешивают и тотчас же приливают третий раствор. Реактив стоек. Ход исследования К 6—8 мл мочи прибавляют 20 капель реактива до появления голубоватой окраски, смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения. Нижняя часть пробирки — контроль. При наличии глюкозы в моче появляется желтая окраска в верхней части пробирки. При бактериурии глюкоза мочи быстро разлагается.

7.Определение концентрации глюкозы в моче ферментативным методом. Расчет результатов

Глюкозооксидазный метод: Принцип:Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода .Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, опред фотометрически.

Ход определения:мочу перед анализом разводят в соотношении 1:5 или 1:10 в зависимости от качественной реакции,результат умножают на коофициент разведения.Реакционную смесь перемешивают и инкубируют 15 мин при темп 37градусов на водяной бане или в термостате.Измеряют опт плотность опыт пробы и стандарта против холостой .Спр=Апр/Аст*Сст,гдеСст-конц одного из стандартов глюкозы.