3. Приготовление мазков и подсчет лейкоцитарной формулы в периферической крови человека.

Все лейкоциты делятся на две группы: гранулоциты и агранулоциты. К гранулоцитам относятся: базофилы, эозинофилы, нейтрофилы. Агранулоциты: лимфоциты и моноциты.

ГРАНУЛОЦИТЫ					АГРАНУЛОЦИТЫ
базофилы	эозинофилы	нейтрофилы			лимфоциты	моноциты
		юные	п/я	с/я
до 1%	1-5%	0-1%	2-5%	45-70%	20-40%	2-10%

Абсолютное (количественное) содержание лейкоцитов называется лейкоцитарный профиль. Процентное соотношение разных форм лейкоцитов называется лейкоцитарной формулой (лейкограммой). Изменение её свидетельствуют о заболевании. Большое значение для диагностики имеет индекс регенерации (сдвига): И_р = (ю+п/я) ∕ с/я = 0,05-0,1. При увеличении молодых форм (И_с>0,1) говорят о сдвиге влево, при уменьшении И_с<0,05 – о сдвиге вправо.

Оснащение: смесь Никифорова, предметное и покровное стекла, марлевые салфетки, донорская кровь, краска Романовского-Гимза, микроскоп, иммерсионное масло, счетчик 11-клавишный.

Ход работы: Мазок готовится на обезжиренном стекле с помощью покровного или предметного стекла. Чистые стекла хранятся до употребления в смеси Никифорова (эфир со спиртом в отношении 1:1) в банке с притертой пробкой. Стекла вынимают пинцетом и тщательно протирают салфеткой. Кровь берут с помощью скарификатором. Большим и средним пальцами левой руки берут предметное стекло за ребро и наносят каплю крови на край стекла. Правой рукой берут покровное стекло, ставят его узким краем рядом с каплей крови так, чтобы она растеклась в углу, образованном двумя стеклами. Покровным стеклом под углом 45° проводят по предметному стеклу, растягивая каплю тонким слоем (не толкать ее вперед, иначе кровь не ляжет ровным слоем). Хорошо сделанный мазок должен быть достаточно тонким, немного уже и короче предметного стекла, иметь желтоватый цвет и просвечивать. Высушивают мазок на воздухе, не подогревая. По середине высушенного мазка надписывают имя (фамилию) исследуемого. Мазок фиксируют в смеси Никифорова 10 минут, затем вынимают и сушат в вертикальном положении.

Высушенный мазок окрашивают краской Романовского из расчета 3 капли краски на 1 мл дистиллированной воды. Мазок покрывают тонким слоем краски и оставляют на 30 минут. Затем мазок промывают под проточной водой и сушат.

Смотрят под микроскопом при увеличении 90 с иммерсионным маслом.

Подсчитывают 100 форменных элементов белой крови и результат заносят в таблицу.

Движение мазка

Результаты работы:

базофилы	эозинофилы	нейтрофилы			лимфоциты	моноциты
		юные	п/я	с/я

Вывод:

4. ПРИГОТОВЛЕНИЕ МАЗКОВ И ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА ТРОМБОЦИТОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА.

Тромбоциты – красные кровяные пластинки (бляшки Бицецеро); полиморфные бесцветные клетки, образующиеся из мегакариоцитов, диаметром 2-5 к, живут 8-11 дней. В норме 200-400•10⁹/л. У новорожденных концентрация тромбоцитов такая же, как у взрослых; к 7-9 дню снижается до 164-178•10⁹/л; к концу второй недели – как у взрослых. Увеличение количества – тромбоцитоз, уменьшение количества – тромбоцитопения.

Оснащение: смесь Никифорова, предметное и покровное стекла, марлевые салфетки, донорская кровь, капилляр, краска Романовского-Гимза, микроскоп, иммерсионное масло, счетчик 11-клавишный.

Ход работы: Мазок готовится на обезжиренном стекле с помощью покровного или предметного стекла. Чистые стекла хранятся до употребления в смеси Никифорова (эфир со спиртом в отношении 1:1) в банке с притертой пробкой. Перед взятием крови стекла вынимают пинцетом и тщательно протирают салфеткой. На палец, обработанный спиртом, наносится капля 14% р-ра МgSО₄, через которую делается прокол скарификатором. Большим и средним пальцами левой руки берут предметное стекло за ребро и наносят каплю крови на край стекла. Правой рукой берут покровное стекло, ставят его узким краем рядом с каплей крови так, чтобы она растеклась в углу, образованном двумя стеклами. Покровным стеклом под углом 45° проводят по предметному стеклу, растягивая каплю тонким слоем (не толкать ее вперед, иначе кровь не ляжет ровным слоем). Хорошо сделанный мазок должен быть достаточно тонким, немного уже и короче предметного стекла, иметь желтоватый цвет и просвечивать. Высушивают мазок на воздухе, не подогревая. По середине высушенного мазка надписывают имя (фамилию) исследуемого. Мазок фиксируют в смеси Никифорова 10 минут, затем вынимают и сушат в вертикальном положении.

Высушенный мазок окрашивают краской Романовского (для подсчета тромбоцитов концентрация краски вдвое больше, чем для окраски мазка для подсчета лейкоцитарной формулы). Мазок покрывают тонким слоем краски и оставляют на 45 минут. Затем мазок промывают под проточной водой и сушат.

Смотрят под микроскопом при увеличении 90 с иммерсионным маслом, используя окошечко по Fonio. Подсчет количества тромбоцитов производится на 1000 эритроцитов.

Например: эритроцитов – 30, тромбоцитов – 2 и т.д. Подсчитывают на 1000 эритроцитов количество тромбоцитов и рассчитывают по правилу пропорции:

1000 эритроцитов – А тромбоцитов

5•10¹² эритроцитов – Х,

где А – найденное количество тромбоцитов

Х = 5•10¹²•А/1000