- •1. Медицинская микробиология. Предмет изучения, цели и задачи
- •2. Санитарная микробиология. Предмет изучения, цели и задачи.
- •3. Клиническая микробиология: цели и задачи
- •4. Методы исследования в микробиологии. Их диагностическая значимость
- •5. Биотехнологии. Методы, цели и задачи
- •6. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Принципы классификации бактерий. Основные формы бактерий. Размеры
- •7. Световой микроскоп, микроскопия с иммерсией. Разрешающая способность. Применение. Принципы окраски по Граму. Этапы приготовления микропрепарата.
- •8. Характерные биологические свойства прокариотов и эукариотов. Структура бактериальной клетки. Обязательные структурные элементы бактериальной клетки, их роль.
- •9. Необязательные структурные элементы- включения, жгутики, капсула, пили, споры. Их функции. Примеры бактерий. Методы выявления.
- •11. Влияние физических факторов на микроорганизмы- ультразвук, температура, высушивание, лучистая энергия. Лиофильное высушивание.
- •13. Выделение чистой культуры аэробов. Биологических методов создания анаэробиоза.
- •14. Механизмы питания прокариотов. Типы питания бактерий. Классификация питательных сред. Примеры.
- •15. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Дифференциальные методы окраски, практическое применение. Примеры.
- •16. Рост, размножение, фазы развития микробной популяции. Культуральные свойства бактерий.
- •17. Пигменты (основные представители пигментообразующих бактерий) их функции. Примеры.
- •18. Основные принципы культивирования микробов. Методы изучения ферментов бактерий. Практическое использование
- •19. Понятие чистой культуры, штамме, биоваре, сероваре, фаговаре, клоне микробов
- •20. Антигены микроорганизмов: локализация, химическая природа.
- •21. Получение микробных антигенов, практическое применение.
- •22. Антитела: определение, физико-химические свойства антител. Аффинность, авидность антител.
- •23. Бактериофаги. Биологические свойства. Вирулентный бактериофаг. Практическое применение.
- •24. Бактериофаги. Биологические свойства. Умеренный бактериофаг. Лизогения. Конверсия фагом.
- •25. Виды лекарственной устойчивости: основные механизмы, пути распространения. Примеры.
- •26. Химиотерапевтические препараты: определение, основные химические группы, примеры препаратов из каждой группы.
- •27. Механизм действия антибиотиков, спектр, примеры.
- •28. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •30. Нормальная микрофлора тела человека: определение, формирование, значение. Синдром раздраженного кишечника: понятие, причина, принцип микробиологической диагностики.
- •31. Представители микробиоценозов основных биотопов: конъюнктива глаза, слизистая оболочка носа, носоглотка
- •32. Представители микробиоценозов основных биотопов: ротовая полость, пищевод, желудок, толстый кишечник, органы мочеполовой системы
- •33. Инфекция: понятие, условия возникновения, динамика развития, инфекция, исходы
- •34. Микробоносительство: определение, виды, примеры. Диагностика микробоносительства
- •35. Понятия: патогенность, вирулентность микроорганизмов. Классификация микроорганизмов по патогенности, примеры
- •36. Понятие патогенность, вирулентность микроорганизмов. Факторы, влияющие на вирулентность возбудителей. Факторы патогенности бактерий, повреждающие организм хозяина, примеры.
- •37. Аттенуированные штаммы: методы получения, использование
- •38. Факторы вирулентности. Микробные токсины и их свойства. Количественное определение вирулентности. Аттенуация
- •39. Токсинемия, примеры токсинемических инфекций. Принцип специфической терапии.
- •40.Понятие инфицирующая доза. Входные ворота инфекции, Примеры. Распространение возбудителей в организме. Динамика развития и периоды инфекционного процесса.
- •41. Манифестные и субклинические формы инфекции. Микробоносительство: определение, виды, примеры. Множественная инфекция
- •42. Принципы классификации вирусов.
- •43.Морфология и физиология вирусов, отличительные особенности. Структура вириона
- •44. Типы взаимодействия вируса с клеткой.
- •45. Методы культивирования вирусов, принципы их индикации и идентификации
- •46. Формы вирусной инфекции
- •47. Микробиологические методы исследования воздуха лпу
- •48. Микробиологические методы исследования почвы
- •49. Вода как фактор распространения возбудителей инфекций. Микробиологические критерии качества питьевой воды
- •50. Санитарно-микробиологическое исследование молока и молочных продуктов. Критерии микробиологической безопасности
- •51.Санитарно_микробиологическое исследование мяса и мясных продуктов. Критерии микробиологической безопасности
- •52.Санитарно-микробиологическое исследование рыбы. Критерии микробиологической безопасности. Контроль качества свежей, охлажденной, мороженой рыбы и морских беспозвоночных
- •53. Санитарно-показательные мо: понятие, виды, требования, предъявляемые к санитарно-показательным мо
- •55. Внутрибольничные инфекции. Роль макроорганизма и внешней среды в возникновении госпитальных штаммов и госпитальной инфекции. Меры профилактики.
- •56.Госпитальные штаммы: понятие, характерные признаки, условия формирования
- •57. Спектр возбудителей внутрибольничных инфекций.
- •58.Объекты санитарно-микробиологического исследования на стерильность. Методы отбора проб и их исследование. Интерпретация результатов санитарно-микробиологических исследований на стерильность
- •59.Стерилизация.Методы стерилизации — основные режимы, объекты стерилизации, методы контроля. Преимущества и недостатки
- •60. Дезинфекция. Химические группы дезинфицирующих веществ, механизм их действия на микроорганизмы.
45. Методы культивирования вирусов, принципы их индикации и идентификации
Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных средах.
Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые), полуперевиваемые и перевиваемые. Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной среде, обеспечивающей их рост, например, в среде 199 с добавлением телячьей сыворотки крови. Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям, обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на протяжении нескольких десятков пассажей. Перевиваемые однослойные культуры клеток приготовляют из злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки амниона человека, почек обезьяны и др. К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50 пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых. О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток. Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой принадлежности. Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты — реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.
Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона. Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают количеством цитопатических доз. Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц является метод бляшек.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям, которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с культурами клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью к различным воздействиям. Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ряда вирусов в диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках. О репродукции некоторых вирусов, например, гриппа, оспы, можно судить по реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами. К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а также наличие в нем большого количества белков и других соединений, затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении различных препаратов.
Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки). Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.
Цитопатическое действие вируса (ЦПД), имеет три основных типа:
- кругло- или мелкоклеточная дегенерация
-образование многоядерных гигантских клеток (симпластов);
- развитие очагов клеточной пролиферации, состоящих из нескольких слоев клеток;
Включения выявляются в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках из зараженных клеток. Они бывают эозинофильные и базофильные.
По локализации в клетке различают:
-цитоплазматические,
-ядерные,
-смешанные включения.
Характерные ядерные включения формируются в клетках, зараженных вирусами герпеса (тельца Каудри), цитомегалии и полиомы, аденовирусами, а цитоплазматические включения - вирусами оспы (тельца Гварниери и Пашена), бешенства (тельца Бабеша-Негри) и другие. По форме, размерам, структуре, отношению к красителям вирусные включения строго специфичны. Например, тельца Гуарниери имеют округлую, серповидную или амебоидную форму диаметром 1-10 мкм, тельца Бабеша-Негри -овальные или эллипсоидные, достигающие 20 мкм, включения реовирусов серповидные, наполовину охватывающие клеточное ядро, коревые включения - в виде почкующихся мелких дрожжей. Симпласты представлены гигантскими многоядерными клетками (например, клетки Цапка, выявляемые при герпетических поражениях), образующимися в результате модификации ЦПМ лизосомальными ферментами. Реже наблюдают образование синцитиев— больших конгломератов цитоплазмы, содержащих сотни и тысячи ядер, связанных между собой клеток. Образование синцитиев обусловлено модификацией ЦПМ поверхностными гликопротеинами и характерно для парамиксовирусов.