- •1. Медицинская микробиология. Предмет изучения, цели и задачи
- •2. Санитарная микробиология. Предмет изучения, цели и задачи.
- •3. Клиническая микробиология: цели и задачи
- •4. Методы исследования в микробиологии. Их диагностическая значимость
- •5. Биотехнологии. Методы, цели и задачи
- •6. Систематика и номенклатура микроорганизмов. Принципы классификации бактерий. Основные формы бактерий. Размеры
- •7. Световой микроскоп, микроскопия с иммерсией. Разрешающая способность. Применение. Принципы окраски по Граму. Этапы приготовления микропрепарата.
- •8. Характерные биологические свойства прокариотов и эукариотов. Структура бактериальной клетки. Обязательные структурные элементы бактериальной клетки, их роль.
- •9. Необязательные структурные элементы- включения, жгутики, капсула, пили, споры. Их функции. Примеры бактерий. Методы выявления.
- •11. Влияние физических факторов на микроорганизмы- ультразвук, температура, высушивание, лучистая энергия. Лиофильное высушивание.
- •13. Выделение чистой культуры аэробов. Биологических методов создания анаэробиоза.
- •14. Механизмы питания прокариотов. Типы питания бактерий. Классификация питательных сред. Примеры.
- •15. Простые и сложные методы окраски микроорганизмов. Дифференциальные методы окраски, практическое применение. Примеры.
- •16. Рост, размножение, фазы развития микробной популяции. Культуральные свойства бактерий.
- •17. Пигменты (основные представители пигментообразующих бактерий) их функции. Примеры.
- •18. Основные принципы культивирования микробов. Методы изучения ферментов бактерий. Практическое использование
- •19. Понятие чистой культуры, штамме, биоваре, сероваре, фаговаре, клоне микробов
- •20. Антигены микроорганизмов: локализация, химическая природа.
- •21. Получение микробных антигенов, практическое применение.
- •22. Антитела: определение, физико-химические свойства антител. Аффинность, авидность антител.
- •23. Бактериофаги. Биологические свойства. Вирулентный бактериофаг. Практическое применение.
- •24. Бактериофаги. Биологические свойства. Умеренный бактериофаг. Лизогения. Конверсия фагом.
- •25. Виды лекарственной устойчивости: основные механизмы, пути распространения. Примеры.
- •26. Химиотерапевтические препараты: определение, основные химические группы, примеры препаратов из каждой группы.
- •27. Механизм действия антибиотиков, спектр, примеры.
- •28. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
- •30. Нормальная микрофлора тела человека: определение, формирование, значение. Синдром раздраженного кишечника: понятие, причина, принцип микробиологической диагностики.
- •31. Представители микробиоценозов основных биотопов: конъюнктива глаза, слизистая оболочка носа, носоглотка
- •32. Представители микробиоценозов основных биотопов: ротовая полость, пищевод, желудок, толстый кишечник, органы мочеполовой системы
- •33. Инфекция: понятие, условия возникновения, динамика развития, инфекция, исходы
- •34. Микробоносительство: определение, виды, примеры. Диагностика микробоносительства
- •35. Понятия: патогенность, вирулентность микроорганизмов. Классификация микроорганизмов по патогенности, примеры
- •36. Понятие патогенность, вирулентность микроорганизмов. Факторы, влияющие на вирулентность возбудителей. Факторы патогенности бактерий, повреждающие организм хозяина, примеры.
- •37. Аттенуированные штаммы: методы получения, использование
- •38. Факторы вирулентности. Микробные токсины и их свойства. Количественное определение вирулентности. Аттенуация
- •39. Токсинемия, примеры токсинемических инфекций. Принцип специфической терапии.
- •40.Понятие инфицирующая доза. Входные ворота инфекции, Примеры. Распространение возбудителей в организме. Динамика развития и периоды инфекционного процесса.
- •41. Манифестные и субклинические формы инфекции. Микробоносительство: определение, виды, примеры. Множественная инфекция
- •42. Принципы классификации вирусов.
- •43.Морфология и физиология вирусов, отличительные особенности. Структура вириона
- •44. Типы взаимодействия вируса с клеткой.
- •45. Методы культивирования вирусов, принципы их индикации и идентификации
- •46. Формы вирусной инфекции
- •47. Микробиологические методы исследования воздуха лпу
- •48. Микробиологические методы исследования почвы
- •49. Вода как фактор распространения возбудителей инфекций. Микробиологические критерии качества питьевой воды
- •50. Санитарно-микробиологическое исследование молока и молочных продуктов. Критерии микробиологической безопасности
- •51.Санитарно_микробиологическое исследование мяса и мясных продуктов. Критерии микробиологической безопасности
- •52.Санитарно-микробиологическое исследование рыбы. Критерии микробиологической безопасности. Контроль качества свежей, охлажденной, мороженой рыбы и морских беспозвоночных
- •53. Санитарно-показательные мо: понятие, виды, требования, предъявляемые к санитарно-показательным мо
- •55. Внутрибольничные инфекции. Роль макроорганизма и внешней среды в возникновении госпитальных штаммов и госпитальной инфекции. Меры профилактики.
- •56.Госпитальные штаммы: понятие, характерные признаки, условия формирования
- •57. Спектр возбудителей внутрибольничных инфекций.
- •58.Объекты санитарно-микробиологического исследования на стерильность. Методы отбора проб и их исследование. Интерпретация результатов санитарно-микробиологических исследований на стерильность
- •59.Стерилизация.Методы стерилизации — основные режимы, объекты стерилизации, методы контроля. Преимущества и недостатки
- •60. Дезинфекция. Химические группы дезинфицирующих веществ, механизм их действия на микроорганизмы.
17. Пигменты (основные представители пигментообразующих бактерий) их функции. Примеры.
Пигменты бактерий – это специфические фоторецепторные молекулы, вторичные метаболиты, образующиеся на свету и придающие бактериям окраску. (Наличие у бактерий пигментов обычно связано с их способностью существовать за счет энергии света. Некоторые микроорганизмы утратили способность к фотосинтезу, но сохранили пигменты. Способность образовывать пигменты детерминирована генетически и используется в качестве диагностического признака. Образование пигментов зависит от состава среды и условий культивирования. У многих микроорганизмов образование пигмента происходит только на свету. Пигменты различают по химическому составу и цвету.)
Классификация пигментов по химическому составу и цвету:
Химический состав |
Цвет |
Пигментообразующие микроорганизмы |
Хиноновые |
Желтый |
Микобактерии |
Азахиноновые (индигоидин) |
Синий |
Коринеактерии, псевдомоны, артробактерии |
Каротиноиды |
Красный, оранжевый, желтый, белый |
Сарцины, актиномицеты, стафилококки, микрококки, коринебактерии, дрожжи |
Меланиновые |
Черный, коричневый |
Бактероиды, порфиромоны |
Пирроловые (продигиозин) |
Ярко-красный |
Серрации |
Фенозиновые (пиоцианин) |
Сине-зеленый (щелочная среда) или красный (кислая среда) |
Синегнойная палочка |
Пиразиновые (пульхерримин) |
Темно-красный |
Кандида |
Классификация пигментов по растворимости:
Ø жирорастворимые (каротиноидные, хиноновые, азахиноновые);
Ø водорастворимые (фенозиновые, пиразиновые) – хромопарные (способны диффундировать в окружающую среду и окрашивать не только колонии, но и питательные среды);
Ø спирторастворимые (каротиноидные, пирроловые);
Ø нерастворимые ни в воде, ни в сильных кислотах (меланиновые).
Значение пигментов:
Ø защита от действия видимого света и УФ-лучей;
Ø ассимилируют углекислый газ;
Ø обезвреживают токсичные кислородные радикалы;
Ø участвуют в синтезе витаминов;
Ø обладают антибиотическим действием и свойствами биологически активных веществ;
Ø цвет пигмента используют в идентификации бактерий.
18. Основные принципы культивирования микробов. Методы изучения ферментов бактерий. Практическое использование
Основные методы создания анаэробных условий для культивирования микроорганизмов.
1.Физический- откачивание воздуха, введение специальной газовой безкислородной смеси (чаще- N2- 85%, CO2- 10%, H2- 5%).
2.Химический- применяют химические поглотители кислорода.
3.Биологический- совместное культивирование строгих аэробов и анаэробов (аэробы поглощают кислород и создают условия для размножения анаэробов).
4.Смешанный- используют несколько разных подходов.
Необходимо отметить, что создание оптимальных условий для строгих анаэробов- очень сложная задача. Очень непросто обеспечить постоянное поддержание безкислородных условий культивирования, необходимы специальные среды без содержания растворенного кислорода, поддержание необходимого окислительно- восстановительного потенциала питательных сред, взятие и доставка, посев материала в анаэробных условиях.
Существует ряд приемов, обеспечивающих более подходящие условия для анаэробов- предварительное кипячение питательных сред, посев в глубокий столбик агара, заливка сред вазелиновым маслом для сокращения доступа кислорода, использование герметически закрывающихся флаконов и пробирок, шприцев и лабораторной посуды с инертным газом, использование плотно закрывающихся эксикаторов с горящей свечой. Используются специальные приборы для создания анаэробных условий- анаэростаты. Однако в настоящее время наиболее простым и эффективным оборудованием для создания анаэробных и микроаэрофильных условий является система “Газпак” со специальными газорегенерирующими пакетами, действующими по принципу вытеснения атмосферного воздуха газовыми смесями в герметически закрытых емкостях.
Основные принципы культивирования микроорганизмов на питательных средах.
1.Использование всех необходимых для соответствующих микробов питательных компонентов.
2.Оптимальные температура, рН, rH2, концентрация ионов, степень насыщения кислородом, газовый состав и давление.
Микроорганизмы культивируют на питательных средах при оптимальной температуре в термостатах, обеспечивающих условия инкубации.
По температурному оптимуму роста выделяют три основные группы микроорганизмов.
1.Психрофилы- растут при температурах ниже +20 градусов Цельсия.
2.Мезофилы- растут в диапозоне температур от 20 до 45 градусов (часто оптимум- при 37 градусах С).
3.Термофилы- растут при температурах выше плюс 45 градусов.
Методы изучения ферментативной активности бактерий.
Состав ферментов бактерий определяется геномом и поэтому характерен для тех или иных видов, т.е. является видовым признаком. Поэтому изучение ферментативных или биохимических свойств очень важно для дифференциации (отличия) и идентификации (определения вида) бактерий. Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз.
Среди ферментов оксидоредуктаз для идентификации микроорганизмов используют такие ферменты, как каталаза и цитохромоксидаза (ЦО).
Каталаза – фермент, расщепляющий Н2О2 с образованием водорода и кислорода. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться после смешивания микробных клеток с 1 % р-ром Н2О2.
Цитохромоксидазу обнаруживают так: смачивают реактивом бумажку и наносят суточную культуру микроорганизмов. Получается синее окрашивание.
Среди ферментов гидролаз изучаются ферменты, расщепляющие углеводы (или сахара) и ферменты, расщепляющие белки (или протеины). Способность бактерий расщеплять углеводы называется сахаролитическими свойствами, а способность расщеплять белки - протеолитическими свойствами.
Эти свойства выявляются по конечным продуктам расщепления после посева на определенные среды. При распаде сахаров определяют образование кислот (молочной, уксусной, муравьиной) и газов (СО2 или Н2), а при распаде белков - образование щелочей, H2S, NH3.
Совокупность сахаролитических, протеолитических и других ферментативных свойств бактерий называется биохимическими свойствами бактерий.
Изучение сахаролитических свойств.
Для определения сахаролитических свойств используются среды: плотные среды Эндо, Левина и Плоскирева, а также жидкие и полужидкие среды Гисса.
Среды Эндо, Левина, Плоскирева содержат лактозу и определенный индикатор.
Эти среды позволяют отличить патогенные бактерии от кишечной палочки - E. coli. E. coli способна расщеплять лактозу, т.к. имеет фермент галактозидазу. При расщеплении лактозы образуются кислые продукты, которые изменяют цвет индикатора. Поэтому E. coliобразует на средах окрашенные колонии: на среде Эндо - красные колонии с металлическим блеском; на среде Левина – темно-синие колонии; на среде Плоскирева – красные колонии. Сальмонеллы и шигеллы не имеют фермента галактозидазу, они не расщепляют лактозу, и цвет среды не изменяется. Поэтому сальмонеллы и шигеллы образуют на средах Эндо, Левина и Плоскирева бесцветные колонии.
Таким образом, на одной и той же среде наблюдается различный характер роста разных видов бактерий, т.к. они имеют различные ферменты. Это позволяет отличить один вид от другого.
Среды Гисса содержат лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу и маннит и различные индикаторы. Если бактерии расщепляют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды, а если до кислоты и газа – наблюдают появление газообразных продуктов.
Жидкие среды Гисса состоят из пептонной воды, 1 % углевода и индикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. Исходный цвет среды – соломенно-желтый. При расщеплении углевода цвет среды становится ярко-розовым (красным). Если образуется газ, он накапливается в поплавке. Если углевод не расщепляется, цвет среды не изменяется.
Полужидкие среды Гисса состоят из 0,2-0,5 % мясопептонного агара (МПА), 1 % углевода и индикатора ВР (водно-голубая краска и розоловая кислота). Исходный цвет среды - розовато-серый. При расщеплении углевода цвет среды становится голубым, а если образуется газ, наблюдаются разрывы в среде.
Определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, поэтому в одних пробирках цвет изменяется, а в других – не изменяется, и получается "пестрый ряд". Каждый вид бактерий характеризуется своим "пестрым рядом".
Изучение протеолитических свойств.
Протеолитические свойства бактерий изучают:
а) по способности разжижать желатин: разные виды бактерий имеют разную форму разжижения желатина; S. aureus – в виде воронки; Bac. antracis – в виде опрокинутой елки; Vibrio cholerae – в виде гвоздя и т.д. Разжижают желатин бактерии, имеющие фермент - коллагеназа;
б) по конечным продуктам распада белков после посева на мясопептонный бульон (МПБ). Могут быть следующие конечные продукты: индол, Н2S, NH3.
Для обнаружения этих продуктов используют бумажки с индикаторами. Индикатор для индола - щавелевая кислота (бумажка окрашивается в розовый цвет). Для Н2S – ацетат свинца (черный цвет). Для NH3 – лакмусовая бумажка (синий цвет).
Дополнительно изучаются такие свойства, как восстановление нитратов в нитриты, бутандиоловое брожения на среде Кларка, расщепление крахмала и др.