5.3 Посев на плотную питательную среду в чашки Петри
После того как среда застынет, посев делать из пробирки с последним разведением. Стерильной пипеткой нанести каплю соответствующего разведения, предварительно тщательно перемешать содержимое пробирки, на поверхность агаровой пластинки в каждую чашку Петри. Этот объем распределить по поверхности агара стерильным шпателем.
На чашках Петри со стороны дна подписать название засеянного материала, дату посева и свои инициалы.
5.4 Визуальная оценка выросших колоний
После посева чашки Петри поместить в термостат крышками вниз, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке чашки при застывании агара, не помешала получить изолированные колонии. Чашки выдержать в термостате в течение 1 —7 суток в зависимости от скорости роста микроорганизмов. Посевы ежедневно проверять.
Бактерии штамма Cupriavidus eutrophus B10646 выглядят как изолированные морфологически однородные округлые колонии светло-кремовые, непрозрачные со слегка волнистым краем диаметром 2-4 мм (рис.5).
Рисунок 5 – Колония бактерий штамма Cupriavidus eutrophus B10646 в чашке Петри
При наличии роста посторонних микробов хотя бы в одной чашке, проводить дополнительное повторное исследование. В случае повторного прорастания в средах тех же микробов, что и в первый раз, посевной считается нестерильным.
Стерильными считать пробы посевного материала, в посевах которых отсутствуют посевы посторонних микроорганизмам ни на одной чашке Петри через восемь суток с начала посева или через 5 суток с момента пересева.
6 Восполнение музейной культуры
Работа проводится в асептических условиях в ламинарном шкафу.
Для восполнения музея для начала необходимо 3 стерильные большие пробирки наполнить заранее расплавленным теплым агаром на 1/3 часть, положить под углом на стеклянную трубочку до застывания (рис.6).
Рисунок 6 – Пробирки с агаром
По истечении времени застывания сделать отсев на поверхность скошенной плотной среды. Профламбированной микробиологической петлей отобрать одну изолированную колонию, находящуюся на чашке Петри в термостате, далее штриховыми движениями распределить микроорганизмы в пробирке по всей поверхности скошенного агара. Маркированные косяки поместить в термостат, после прорастания, убрать в холодильник. Таким образом, производится пересев музейной культуры.
Для проверки музейной культуры на чистоту, необходимо визуально осмотреть выросшие микроорганизмы, колонии должны быть однородные светло-кремового цвета. Или же небольшое количество микроорганизмов поддеть микробиологической петлей и растворить в пробирке с 2-3 мл стерильной водопроводной воды. Произвести истощающий посев на 5 чашек Петри. Бактериальную петлю окунуть в пробирку с разведением, положить плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхности. Шпателем провести штрихи по всей среде. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые шпателем, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность получить изолированные колонии микроорганизмов.