Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение

высшего образования

«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Институт фундаментальной биологии и биотехнологий

Кафедра биотехнологии

Методическое пособие по получению чистого посевного материала

бактериями Cupriavidus Eutrophus для культивирования в ферментере.

Красноярск 2016

Введение

Культивирование (ферментация) - это процесс, во время которого микроорганизмы растут (увеличивают свою численность) и превращают компоненты питательной среды в целевой продукт.

Основой любого биотехнологического производства является штамм-продуцент целевого продукта. Очень важно сохранить на протя­жении длительного времени полезные свойства используемого штамма, который в дальнейшем используется для получения посевного материала, необходимого для процесса ферментации.

Организация мероприятий по сохранности музейной культуры и выращиванию чистого посевного материала является важнейшей задачей каждого биотехнологического предприятия.

Целью методических указаний является формирование у студентов практических и теоретических навыков культивирования бактерий в лабораторном ферментере. В качестве биологического агента используется штамм бактерий Cupriavidus eutrophus B10646. В учебное пособие включены все этапы приготовления посевного материала в микробиологической лаборатории и мероприятия по обеспечению сохранности музея и чистоты посева:

• подготовка стерильной лабораторной посуды;

• создание асептических условий;

• подготовка питательных сред;

• работа с музейной культурой, восполнение музея;

• микробиологический контроль;

• контроль роста и питания бактерий.

1 Подготовка стерильной лабораторной посуды

Для подготовки чистого посевного материала и музея культуры бактерий Cupriavidus eutrophus B10646 необходимо использовать следующую посуду и материалы (таблица 1).

Таблица 1 – Посуда и материалы

Наименование предмета	Количество, шт
Колба, 2 л	8
Колба, 1 л	2
Колба, 0,5 л	3
Пробирки	100
Пипетки, 1 мл	30
Пипетки, 10 мл	15
Чашки Петри	8
Шпатель стеклянный	2
Цилиндр, 500 мл	1
Микробиологическая петля	1
Груша резиновая	1

Перед стерилизацией лабораторную посуду помыть и высушить. Пробирки и колбы закрыть ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надеть бумажные колпачки и перевязать веревочкой.

Пробирки пробками вниз, чашки Петри, шпатели уложить в мешки для стерилизации.

В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. Пипетки сложить в железные цилиндры (рис.1), закрыть их так, чтобы отверстия на крышке и цилиндре совпали. При упаковывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать носики. Цилиндры поместить в мешки для стерилизации.

Рисунок 1 - Железные цилиндры для хранения пипеток

Лабораторную посуду стерилизуют в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.