НОВГОРОДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМЕНИ ЯРОСЛАВА МУДРОГО

АРХИПОВ Г.С., СТЕПАНОВА Э.А.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

ВЕЛИКИЙ НОВГОРОД

2008

ББК 52.64я73 С79

Печатается по решению РИС НовГУ

Рецензент

Доктор медицинских наук

Профессор В.Р.Вебер

Степанова Э.А., Архипов Г.С.

С79 Общая микробиология: Учебное пособие для практических занятий/НовГУ им.Ярослава Мудрого. – Великий Новгород, 2001. – 51 с.

Излагаются современные данные лабораторных исследований по морфологии, физиологии и санитарной микробиологии. Приведены микробиологические методы контроля лекарственных препаратов и микробиология одонтогенных заболеваний.

Даны рекомендации по совершенствованию самостоятельной работы студентов.

Для студентов медицинских институтов лечебного, стоматологического и фармацевтического факультетов.

ББК 52.64я73

© Новгородский государственный

Университет, 2001

© Э.А. Степанов, Г.С.Архипов, 2001

Предисловие.

Учебное пособие к практическим занятиям по общей микробиологии составлено в соответствии с типовой программой по микробиологии с вирусологией и иммунологией для медицинских институтов с учетом специфики организации учебного процесса на кафедрах ИМО НовГУ.

Пособие разработано на основе многолетнего опыта преподавания микробиологии, включает многие дополнительные вопросы по стоматологии и фармации, не освещенные в других учебных руководствах. В общей микробиологии отражены особенности морфологии, таксономической систематики, закономерности физиологии, учтены новые данные, полученные за последние годы.

Готовится вторая часть методического пособия, где дана характеристика морфофизиологических свойств возбудителей инфекционных болезней, современные данные по эпидемиологии, изложены клинико-патогенетические особенности течения инфекционных заболеваний и их лечения.

Основное назначение пособия – помочь студентам более углубленно и рационально готовиться к практическим занятиям и успешно выполнять практические задания.

МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ МИКРОСКОПИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ. ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ. ПРОСТАЯ ОКРАСКА.

Цель занятия: усвоить основные правила работы в микробиологической лаборатории; изучить морфологию бактерий и современные методы микроскопического исследования. Освоить методику приготовления препаратов и простые методы окраски.

Основные вопросы темы

1. Правила работы в микробиологической лаборатории. Инструктаж по технике безопасности.

2. Открытие микроорганизмов, значение работ Левенгука.

3. Морфология бактерий.

4. Современные методы микроскопического исследования: световой биологический микроскоп, темнопольный, фазовоконтрастный, электронный и др. Особенности работы с иммерсионным объективом.

5. Правила приготовления препаратов из культур бактерий.

6. Простые методы окраски препаратов.

Основные правила работы СТУДЕНТОВ в микробиологической лаборатории:

Работа в микробиологической лаборатории проводится с использованием культур патогенных микроорганизмов и материала от инфекционных больных, поэтому для обеспечения личной безопасности и безопасности окружающих людей необходимо строгое соблюдение правил:

1. Входить в учебную лабораторию только в медицинском халате, застегнутом на все пуговицы, в колпаке и сменной обуви.

2. Не класть на стол сумки и свои вещи.

3. Студенты имеют постоянное рабочее место за лабораторным столом

4. Во время работы содержать рабочее место в полном порядке, бережно обращаться с микроскопом, посудой, инструментами, выливать воду после окрашивания, протирать микроскопы, после работы привести в порядок стол.

5. Во время посевов не разговаривать и не ходить по лаборатории.

6. Проявлять максимальное внимание ко всем этапам работы с культурами микробов. На всех пробирках и чашках с посевами написать номер группы, свои инициалы.

7. В случае аварии (разбилась пробирка, чашка и др.) необходимо немедленно сообщить преподавателю и лаборанту, провести дезинфекцию рабочего места и обязательно обработать руки.

8. После окончания работы обязательно мыть руки с мылом и обрабатывать их дезинфицирующим раствором.

9. Категорически запрещается в лабораториях принимать пищу, пить, курить, пользоваться косметикой.

10. Дежурные студенты, собирают все посевы, подписывают их, ставят в термостат. Считают количество микроскопов, бактериологических петель и пинцетов до и после занятия. После окончания работы проводят обработку всех столов дезинфицирующим раствором под контролем лаборанта.

Блок дополнительной информации.

Открытие микроорганизмов связано с именем Антония ван Левенгука (1632-1723), который с помощью хорошо отшлифованного стекла увеличивающего в 300 раз увидел в капле воды, взятой из лужи, мельчайшие двигающиеся организмы, которые он назвал зверюшками. В 1695 г. был издан его труд “Тайны природы, открытые Антонием Левенгуком при помощи микроскопа”, в котором он дал описание почти всех основных форм бактерий. В даль­нейшем развитии микробиологии большая роль принадлежит Луи Пастеру (1822-1895), Роберту Коху (1843-1910) и другим ученым, открывшим патогенные микробы, возбудители инфекционных заболеваний.

По морфо-физиологическим свойствам среди микроорганизмов выделяют ряд групп: бактерии, микоплазмы, хламидии, риккетсии, спирохеты, грибы, вирусы, простейшие.

По морфологии характерны основные формы: шаровидная, палочковидная, извитая и нитевидная. Бактерии шаровидной формы в зависимости от плос­кости и направления деления, подразделяются на микрококки (кокки лежа­щие отдельно), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (скопление кокков), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8 кокков). Расположение по два бобовидных кокка характерно для гонококков.

Палочки разнообразны по форме и величине. Так кишечные палочки в мазках располагаются беспорядочно, концы палочек имеют закругленную форму. Возбудитель сибирской язвы представляет более крупные палочки с обруб­ленными концами, располагаются цепочкой - стрептобациллы. Извитые формы - у вибрионов и спирилл.

Для изучения морфологии бактерий необ­ходимо приготовление препаратов-мазков и их окрашивание. Для изучения тинкториальных свойств и морфологии бактерий применяют анилиновые кра­сители (основные, кислые и нейтральные). Чаще используют основные кра­сители - фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет, везувин, нейтральный красный и кислую краску – эозин. Из красителей готовят спиртовые и водные растворы, иногда добавляют карболовую кислоту. Основные красители соединяются со струк­турами бактерий, обладающими кислотными свойствами, в результате чего образуются соли и сложные соединения. Кислые красители соединяются с веществами, имеющими свойства оснований. Если используется один краситель, он позволяет в основном определить морфологию бактерий и размеры. Для выявления структурных элементов и физико-химических особенностей бактерий используют сложные методы окраски: Грама, Циля-Нильсена и др.

Вопросы контроля исходного уровня

1. Типы современных микроскопов.

2. Основные оптические системы биологического микроскопа.

3. Определение увеличивающей способности микроскопа.

4. Основные группы микроорганизмов.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ работа студентов

1. Приготовление мазка из культуры стафилококка со скошенного агара и окраска водным фуксином или генцианвиолетом в течение 2 - 3 минут. Микроскопия с иммерсионным объективом. Обратить внимание на характерное расположение кокков, зарисовать.

2. Приготовление мазка из бульонной культуры кишечной палочки, окраска простым методом. Для приготовления препарата-мазка из жидкой культуры бактерий наносить на стекло физиологический раствор не нужно. При микроскопии обратить внимание на беспорядочное расположение мелких палочек с закругленными концами.

3. Просмотреть демонстрационные препараты, представляющие различные морфологические формы бактерий:

- Стрептококки.

- Сарцины.

- Стрептобациллы.

Все препараты зарисовать цветным карандашом.

4. Оформить протокол выполненной работы схеме:

1. Тема занятия, цель выполняемой работы.

2. Описание хода работы.

3. Зарисовки всех просмотренных препаратов с указанием их названий.

4. Заключение по проведенному исследованию.

5. Перечисление навыков, полученных на занятии.

6. Подпись преподавателя под протоколом.

5. Уборка рабочего места: иммерсионный объектив микроскопа протирается, микроскоп переводится на малое увеличение, тубус опускается. Микроскоп закрывается. Стол протирается дезинфицирующим раствором. Вода после окраски препаратов выливается в ведро.

Тема 2 Структура бактериальной клетки. Сложные методы окраски бактерий ( Грама, Циля-Нильсена, Бурри-Гинса).

Цель занятия: изучение структуры бактериальной клетки с применением сложных методов окраски; освоение окраски бактериальных препаратов методом Грамма; выявление капсул методом Бурри-Гинса и спорообразования по Цилю-Нильсену.

Основные вопросы темы

1. Основные признаки, характеризующие прокариотические и эукариотические клетки, их различия.

2. Структура бактериальной клетки: нуклеоид, плазмиды, цитоплазма, включения.

3. Структура цитоплазматической мембраны, клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий, капсулы. Методы выявления капсулы.

4. Спорообразование у бактерий, способы окраски спор.

5. Подвижность бактерий. Структура жгутиков, определение подвижности бактерий, методы выявления жгутиков.

6. Сложные методы окраски бактериальных препаратов. Метод Грама: этапы окраски, механизм окраски. Окраска по Цилю-Нильсену, механизм. Выявление капсул по методу Бурри-Гинса.

Вопросы контроля исходного уровня

1. Этапы приготовления бактериальных препаратов.

2. Принципы окрашивания бактериальных препаратов простыми методами с применением анилиновых красителей.

3. Правила работы с иммерсионным биологическим микроскопом.

Блок дополнительной информации.

Структурные и функциональные особенности клеток позволяют выделить более сложно организованные и дифференцированные эукариотические клетки животных, растений, водорослей и простейших и более просто организованные прокариотические клетки многих микроорганизмов: бактерий, актиномицет, риккетсий, микоплазм, спирохет. Прокариотические клетки легко адаптируются к условиям окружающей среды, биохимически активны, многие паразитируют в организме человека и животных, что приводит к их широкому распространению. Основные характерные структурные различия прокариотических и эукариотических клеток представлены в таблице № 1.

Таблица

1. Основные признаки, характеризующие прокариотические и эукариотические клетки.

Признак	Прокариоты	Эукариоты
Сложность клеточной организации	Одноклеточная организация	В основном многоклеточная организация
Размеры клеток	1-10 мкм	10-100 мкм
Ядерная оболочка	Отсутствует	Имеется
Ядрышко	Отсутствует	Имеется
Хромосомы	Одиночные из кольцевой ДНК	Структуры, состоящие из ДНК и белка
Митохондрии	Имеются	Отсутствуют
Цитоплазматическая сеть	Отсутствует	Имеется
Аппарат Гольджи	Отсутствует	Имеется
Рибосомы	Имеются 70 S	Имеются 80 S в цитоплазме, в органеллах 70S
Клеточная стенка	Имеется	У животных клеток отсутствует
Лизосомы	Отсутствуют	Имеются
Цитоскелет	Отсутствует	Имеется, особенно у растений
Амебоидное движение	Отсутствует	Имеется
Деление клеток	Бинарное	Митоз