3. Післязабійна діагностика, санітарна оцінка продуктів харчування

Післязабійна діагностика ботулізму ускладнена, тому що патолого-анатомічні зміни не характерні. У кишечнику, особливо у тонкому відділі, спостерігають катаральні зміни, гіперемію та крововиливи на слизовій оболонці (додаток 3). Паренхіматозні органи нерідко повнокровні та розм'якшені. Судини серозних покривів ін'єковані. Легені набряклі, в ускладнених випадках виявляють ознаки пневмонії (додаток 4). Іноді під епікардом та ендокардом спостерігають крововиливи (додаток 5); у серцевій сумці — ексудат лимонно-жовтого кольору. Діагноз ставлять на основі клінічної картини та лабораторних досліджень.

М'ясо та м'ясопродукти від хворих ботулізмом тварин потрібно розглядати, як небезпечні для здоров'я людей. Згідно з "Правилами передзабійного ветеринарного огляду тварин і ветеринарно-санітарної експертизи м'яса та м'ясних продуктів" (2002), у разі встановлення ботулізму тушу з органами і шкурою знищують спалюванням. Усі знеособлені продукти (ноги, вим'я, вуха, кров та ін.), отримані від забою інших тварин, змішані з продуктами забою від хворих, або якщо вони перебували в контакті з ними, у тому числі туші, також спалюють.

Сировину (м'ясо, риба та ін.) та готові продукти (страви), в яких виявлено Cl. botulinum або токсин, знищують [ 19-22].

3. Лабораторна діагностика, методи виявлення Cl. Botulinum і його токсину

Проби, що надходять у лабораторію, досліджуються одночасно у двох напрямках — на наявність токсинів і мікроорганізмів. Одночасно ці ж проби повинні досліджуватись на наявність Cl. perferingens.

Виявлення мікроорганізмів полягає у визначенні їх морфології, здатності та характері росту на живильних середовищах в анаеробних умовах та встановленні токсигенності шляхом зараження лабораторних тварин.

Дослідження проводять згідно з загальноприйнятими у лабораторній

практиці методами виявлення анаеробів. Термін дослідження становить 14 діб. Лабораторному дослідженню при ботулізмі підлягають залишки харчових продуктів, матеріал, отриманий від хворого (кров, випорожнювання, сеча, промивні води шлунку, блювотні маси), і секційний матеріал. Кров беруть з вени пацієнта у кількості 5-10 мл; промивні води з шлунку забирають в об'ємі 50-100 мл, кал - 50-60 р.. На секції забирають шматочки печінки (50-60 г) відрізки кишковика і шлунку і їх вміст. До вступу в лабораторію зразки зберігають на холоді. Кров досліджують тільки на наявність токсину ботулізму (для чого проводять біологічну пробу); випорожнювання - тільки на наявність збудника (проводять посів на поживні середовища), увесь інший матеріал - на наявність збудника і його токсину. Банки з консервами при ботулізмі витримують в термостаті 10-12 сут, стерильно відбирають 50-100 г, розтирають і центрифугируют. У надосадочной рідині визначають наявність токсину [4-6].

3. Поживні середовища для культивування анаеробів

Поживні середовища для культивування анаеробів: цукровий агар стовпчиком, цукровий бульйон, молоко за Тукаєвим, середовище Кітта-Тароцці, середовище Вільсон-Блера, агар Цейсслера. Культивування анаеробів проводять в безкисневих умовах. Відношення до кисню можна визначити при посіві культури уколом в стовпчик агару. Аероби виростуть на поверхні стовпчика, ріст анаеробів відбувається в глибоких шарах поживного середовища. Мікроорганізми проміжної групи (факультативні анаероби) ростуть як на поверхні середовища, так і в глибині нього. Для редукції та адсорбції кисню до поживних середовищ перед їх стерилізацією додають шматочки печінки, селезінки, м'язової тканини, тканини мозку, яєчного білка і навіть комочки вати. В якості редукуючої субстанції до живильного середовища додають сульфат заліза, сульфат натрію, сульфат амонієвого заліза та ін. Анаеробні умови створюються на живильних середовищах також шляхом збагачення їх вуглеводними сполуками (молочний цукор, виноградний цукор та ін.). В процесі росту анаероби окислюють ці сполуки, концентрація вільного кисню знижується. Культивувати анаероби можна на цукровому агарі стовпчиком. Агар з глюкозою наливають у пробірку високим стовпчиком до 2/3 її об'єму, охолоджують до 42-45 ⁰C. Досліджуваний матеріал додають до агару, ретельно перемішують. Пробірку ставлять у штатив. Поживне середовище застигає, і в середині нього (особливо в нижній частині пробірки) утворюються надійні анаеробні умови . При вирощуванні в рідких середовищах (цукровому бульйоні, молоці, печінковому бульйоні та ін.) звертають увагу на газоутворення, інтенсивність росту та характер осаду. Для виділення чистих культур анаеробів широке застосування знайшли середовища Вільсон-Блера та агар Цейсслера. Середовище Вільсон-Блера готують з м'ясо- пептонного агару, до якого додають глюкозу, Na₂SO₃, хлористе залізо FeCl₂. На цьому середовищі

Cl. Botulinum утворює зачернення та розрив агару. Ріст Cl. botulinum відбувається в глибині агару. При цьому відбувається відновлення сірчанистокислого натрію до сірчаного, останній вступає в реакцію з хлорним залізом, переводячи його в сірчанисте залізо, яке має чорний колір. Розрив поживного середовища пов'язаний з розщепленням глюкози до газу. Кров'яний агар Цейсслера складається з м'ясо-пептонного агару, 1% глюкози та 20% свіжої дефібрінованої крові. Cl. perfringens утворює зону гемоліза навколо колонії. Посіви на середовище Цейсслера роздивляються через 10-24 години впродовж наступних 4-6 діб. Середовище Кітта-Тароцці це поживний бльон з глюкозою та шматочками свіжих органів тварин. Глюкоза та шматочки органів мають редукуючу властивість. Зверху середовище заливають шаром стерильної олії. Анаеростат, аппарат Аристовського, ексикатор, чашка за Фортнером. Анаеростат уявляє собою металевий сосуд, в кришці якого є ніпель для з'єднання з насосом за допомогою вакуумної гумової трубки. Після відкачки повітря ніпель щильно закривають, а кришку, яка тісно змикається з гумовою прокладкою, загвинчують спеціальними зажимами.Апарат зручний для культивування анаеробів і добре зберігає вакуум протягом 36-48 годин.Апарат Аристовського складається з металевого циліндру та герметичної кришки. В циліндр поміщають металеву підставку у вигляді напіввідерця, на яку встановлюють чашки з посівами та половинку чашок з хімічним вбирачем киснево-зволоженої суміші гідрокарбоната натрію та гідросульфіта натрію. Метод Фортнера. В чашку Петрі наливають м'ясо-пептонний агар з 1-2% глюкозою. Посередині чашки стерильним скальпелем вирізають канавку ширною 1-1,5 см, якою поживне середовище ділиться на дві половини.На одну половину засівають культуру аероба B. Priodigiosum або E.coli, на другу анаеробні мікроорганізми. вільний простір чашки між дном та її кришкою заклеюють лейкопластирем. Посів ставлять в термостат. Спочатку виростають аероби, а потім анаероби. Метод Віньяла-Вейона простий та доступний для будь-якої лабораторії. Готують розведення грунтової бовтушки в декількох пробірках з 0,5% розплавленим і охолодженим агаром, потім вміст з кожної пробірки набирають в пастеровську піпетку,заповнюючи весь капіляр піпетки. Після заповнення витягнутий кінець пробки запаюють і поміщають в скляний циліндр та ставлять в термостат. Через 2-3 доби в стовбчику з агару виростають помітні колонії мікроорганізмів-анаеробів. Щоб вирощену колонію витягнути, напильником роблять надріз вище рівня поміченої колонії, надломлюють, а колонію мікроба, що знаходиться в агарі, витягують петлею та пересівають в свіже рідке поживне середовище [22-24].