6. Методы выявления микобактерий туберкулеза.

Выявление микобактерий туберкулеза (МБТ) в патологическом мате­риале (мокрота, моча, кал, ликвор, экссудат, биоптаты различных тканей и тд.) осуществляется бактериоскопическим, бактериологическим и биологи­ческим методами.

Бактериоскопический метод является основным для выявления МБТ. Препарат окрашивают по методу Циля-Нильсена (карболовый рас­твор фуксина, обесцвечивание спиртом, докраска метиленоиым синим). Окрашенные препараты микроскопируют с иммерсионной системой. МБТ, будучи кислотоустойчивыми, не обесцвечиваются спиртом и окрашиваются в красный цвет, окружающий фон и некислотоустойчивыо микроорганиз­мы - в синий цвет.

Разрешающая способность бактериоскопического метода увеличивает­ся за счет использования люминесцентной микроскопии при окрашивании препаратов специальными флюоресцирующими красителями - флюорохромами.

Для обнаружения МБТ необходимо, чтобы в 1 МЛ материала находи­лось не менее 100 ООО микроорганизмов. При меньшем их числе исследо­вание может дать ложноотрицательиый результат, Таким образом, чувстви­тельность данного метода существенно ограничена.

Для увеличения количества микобактерий в единице исследуемого объема применяют методы флотации и седиментации. Наибольшее рас­пространение получил метод флотации, основанный на том, что после встряхивания водной суспензии с углеводородом МБТ всплывают вместе с образующейся пеной на поверхность. В качестве углеводорода обычно используется бензин, бензол, ксилол. Образующееся на поверхности фло­тационное кольцо из частиц углеводорода с микобактериями служит мате­риалом для приготовления препаратов. Метод флотации повышает чувстви­тельность метода на 10-15%.

Бактериологический метод предполагает посев материала на питательные среды. Существуют различные среды для выращивания мико­бактерий. Наиболее дешевой, а потому самой распространенной, является среда Левенштейна-Йенсена. Основным ее недостатком являются дли­тельные сроки исследования: рост культуры МБТ продолжается 2-3 меся­ца. В настоящее время имеются среды, которые позволяют получить ре­зультат гораздо быстрее и поэтому более удобны для использования. Ши­роко в практике они не применяются из-за очень высокой стоимости.

Перед посевом материала его обрабатывают кислотой для уничтоже­ния сопутствующей неспецифической флоры.

Чувствительность бактериологического метода значительно выше: он позволяет выявить МБТ в количестве 20-100 на 1 мл. Преимуществом метода также является и то, что после получения чистой культуры можно определить вирулентность МБТ, чувствительность их к химиопрепаратам и др. Основной недостаток, как уже говорилось, - длительность исследова­ния. Кроме того, нередко определяемые при бактериоскопии микобактерии не растут на питательных средах, утратив способность к размножению под влиянием химиопрепаратов. В этом случае бактериологический метод даст ложноотрицательный результат. При отрицательном результате рекоменду­ются повторные исследования.

Биологический метод заключается в заражении морских свинок патологическим материалом от больного (чаще всего мокротой). Морские свинки очень чувствительны к МБТ, поэтому являются наиболее удобным объектом для исследования.

Перед заражением морской свинки мокроту обрабатывают серной ки­слотой с целью уничтожения сопутствующей неспецифической микрофло­ры и центрифугируют. Осадок, разведенный в изотоническом растворе хлорида натрия, вводят свинке подкожно в паховую область, внутрибрюшинно или в яичко. Для снижения резистентности животного к МБТ ему ежедневно вводят большие дозы глюкокортикоидов (кортизон).

Примерно через 1-3 месяца у морской свинки увеличиваются лимфа­тические узлы, затем развивается генерализованный туберкулез.

Недостатком метода является трудоемкость и длительность, преиму­ществом - высокая чувствительность. В то же время имеются микобакте­рии , утратившие вирулентность, которые не будут вызывать туберкулез у лабораторного животного (ложноотрицательный результат).