
- •Cтановления учения о антибиотиках. Общие свойства антибиотиков
- •Биохимический и генетический аспекты антибиотикорезистентности
- •Лабораторные методы поиска продуцентов антибиотиков. Выделение продуцентов антибиотиков. Методы идентификации продуцентов антибиотиков. Первичная оценка антибиотиков.
- •Лабораторный регламент
- •Условия культивирования:
- •Ііі. Направленный биосинтез антибиотика
- •Технология получения аб
- •Методы выделения и очистки антибиотика
Условия культивирования:
рН среды:
рН влияет на активность ферментов.
Оптимальное значение рН – нейтральное
Для актиномицетов – 6,7-7,8
Для ацитофильных актиномицетов – 3,5-7,6
В порцессе роста рН изменяется и подбирая состав среды его можног регулировать.
Если в среде источник азота – нитрат аммония и отсутствует Са, то при использовании азота будет идти резкое понижение рН.
Если в качестве источника выступает нитрат калия, то при использовании азота буде происходить резкое выщелачивание.
Температура:
Все продуценты антибиотиков делятся на термофилов, мезофиллов и психрофилов.
Например: B. bravis – при t = 30 oC – культура развивается;
При t = 40 oC – осуществляется синтез антибиотика.
Отклонени температуроы клуьтивирования от нормы вызывает замедления и синтеза антибиотиков. Это изменения связано с:
а) изменением активности ферментов
б) изменением активности клеточных мембран
- изменение отношения ненасыщенных и насыщенных кислот в мембранах
- изменением состава клеточной стенки
- нарушение транспорта антибиотика через ЦПМ
Аэрация:
Большинство продуцентов антибиотиков – аэробные культуры. Степень аэрации – один из способов кислотно-восстановительных условий микроорганизма и служит основным процессом обмена веществ.
Существет три типа аэрации:
- встряхивание клуьтуральной жидкости на качалках
- выращивание микроорганизмов в виде пленки на поверхности плотной питательной среды.
- путем продувания определенного количесва воздухы через ПС (найболее эфективный метод)
Степень аэрации рассчитывается по такой формуле:
Обьем воздуха, л/ обьем ПС, л
Интенсивность аэрации:
Определяется скоростью вступления кислорода растворимого в среде.
Использует датчики с платиновыми или серебряными электродами.
Степень аэрации культур, котроые выращиваются в виде пленки на поверхнолсти можно регулировать изменение площади развития С и слоя жидкость аэрации будет больше.
Аэрация зависит от способа перешивания
Часто используется смешанно культивирование, когда всместе с продуцентом используют микроорганизм другого вида – интуктор образования антибиотиков.
Роль индуктора
Индуктор может выделять в клуьтуру жикость. Прдукты жизнедеятельности и эти продукты жизнедеятельности могут быть использованы продуцентом.
В смешанных культурах ферментативная реакция может быть использоваа ферментативной реацией другого организма.
Один мироорганизм может образовывать стимуляторы роста для другого микроорганизма
В смешанной культуре один микроорганизм мозжет выделять ферменты которые вызывают трансформацию антибиотика другого продуцента.
Образование продуктов жизнедеятельности индуктора вызывает приостановку роста микроба продуцента – микроорганизм начинает образовывать антибиотик.
Ііі. Направленный биосинтез антибиотика
Это направленное вмешательство экспериментатора в метаболизм пордукта для того чтобы пордуцент мог синтезировать 1 тип антибиотиков, или иснтезировать антибиотик с заданными свойствами