Статистический анализ

По каждой группе данных рассчитывались средние арифметические значения и их стандартные ошибки. Кроме того, перед проведением статистических сравнений в каждой группе данных проводилась проверка гипотезы о нормальном распределении путем вычисления показателей асимметрии и эксцесса. Распределение считали нормальным, если показатели асимметрии и эксцесса не превышали своих удвоенных среднеквадратичных отклонений. Данные расчеты показали, что большинство полученных результатов отвечают критериям нормального распределения. Поэтому достоверность отличий определялась с помощью параметрического t-критерия Стьюдента. Достоверность влияния примененных воздействий на изучаемые процессы в матке оценивалась с применением двухфакторного дисперсионного анализа . В качестве одного из факторов всегда принималось время после введения эстрадиола или оливкового масла, а в качестве другого - какое-либо экспериментальное воздействие.[15]

3.4 Синтез, противовоспалительная и анальгетическая активность алкиламидов 2-алкокси-4,6-диметил-никотиновых кислот

Среди синтезированных ранее N-ариламидов 2-ал-кокси-6-метилникотиновых кислот были обнаружены соединения с противосудорбжпой активностью. В связи с пим представляло интерес получить близкие им по структуре алкиламиды 2-алкокси-4,6-диметил-никотиновых кислот и изучить их противосудорож-ное, противовоспалительное и анальгетическое действие.

Экспериментальная биологическая часть

Острую токсичность (ЛД₅₀) исследуемых соединений при внутрибрюшинном введении в виде взвеси в 2% крахмальной слизи определяли на белых мышах обоего пола массой 20-25г .

Противовоспалительное действие изучали на беспородных белых крысах массой 140 - 200 г на модели острого отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапу крысы 0,1 мл 1 % водного раствора каррагенина. О противовоспалительном действии судили по торможению прироста объема стопы не менее чем на 30 %, через 4 ч после введения флогогенного агента. Исследуемые соединения (50 мг/кг) и ортофен (10 мг/кг) вводили внутрибрюшинно за 1 ч до применения каррагенина.

Анальгстическое действие определяли па белых мышах с использованием методики "горячая пластинка" по увеличению латентного периода рефлекса в ответ на термическое раздражение. Тестирование проводили до и через 30, 60, 120 и 180 мин после внутрибрюшинного введения соединений в дозе 50 мг/кг.

Каждое соединение и по каждому тесту изучалось на 5 животных. Установлено, что среди изученных веществ противовоспалительной активностью обладают соединения 1а, 1д, 1ж-к. Наиболее активны соединения 1а и 1д по эффективности не отличаются существенно от ортофена. Все изученные соединения не обладают анальгетическими свойствами.[16]

3.5Противовоспалительные и анальгетические свойства двух бициклических аналогов ацетаминофена

Многие пестероидпые противовоспалительные препараты (НПВП), присутствующие на фармацевтическом рынке, обладают сильным побочным гастро-токсическим эффектом. В то же время ацетаминофен (4-гидроксиацетанилид) — соединение, обладающее противовоспалительными свойствами, — не проявляет гастротоксичности. Гепатотоксическое и нефротоксическое действие ацетаминофена объясняется метаболическим превращением ею в активное промежуточное соединение под действием цитохром Р-450-за-висимой сложпо функциональной системы оксидаз.

Экспериментальная фармакологическая часть

Противовоспалительные и анальгетические свойства изучали на крысах-самцах линии Sprague - Dawley массой 180 - 200 г, случайным образом поделенных на экспериментальные и контрольные группы (не менее пяти животных в каждой). Исследуемые соединения в виде взвеси в 2 % водном растворе гуммиарабика (аравийской камеди) вводили в желудок однократно в дозе 100 мг/кг.

Противовоспалительную активность оценивали па модели воспалительного отека стопы, вызванного каррагенином. Соединения вводили в желудок через 30 мин после инъекции 0,1 мл 1 % суспензии каррагенина.

Болевой порог (по давлению) измеряли до вве­дения исследуемых соединений (исходное значение), а также через I, 2, 3 и 5 ч после инъекции суспензии каррагенина. Болевое ощущение в области хвоста вызывали с помощью источника теплового излучения. Обезболивающий эффект оце­нивали по времени защитной реакции (отдергивание хвоста). Время реакции на болевое раздражение изме­ряли до введения исследуемых соединений (исходное значение), а также через 1, 2, 3 и 5 ч после их введения в желудок.

Гастротоксическое действие оценивали по степени изъязвления слизистой оболочки желудка. Аутопсию производили через 24 ч после последнего введения ис­следуемых соединений.

Результаты

Как следует из данных, соединения I и II уменьшают степень воспалительного отека стопы, вызванного каррагенином, не отличаясь по эффективности от парацетамола и индометацина, хотя по длительности действия они уступают последнему.

По тесту механического сдавления лапы соедине­ния I и II проявляют анальгетическос действие, сопоставимое с таковым парацетамола и индометацина, по длительности действия они превосходят парацетамол, но не индометацин. По тесту отдергивания хвоста соединения I и II оказывают замедленное (через 2 ч) и кратковременное (по сравнению с индометацином) анальгетическое действие.

Соединения I и II (100мг/кг) подобно ацетаминофену (50 мг/кг) и в отличие от индометацина (20 мг/кг) не оказывают ульцерогенного действия.

Обсуждение результатов

Результаты настоящего исследования показали, что оба вновь синтезированных соединения уменьшают степень воспалительного отека стопы, вызванного каррагенином. Следовательно, положение гидроксильной группы не влияет на уровень противовоспалите­льной активности. По суммарному противовоспалительному эффекту соединения I и II сравнимы с ацетаминофсиом, но уступают индометацину.

Согласно Хвангу и Шену, механизм противовоспалительной активности некоторых соединений связан с их способностью проникать в липидный бислой клеток-медиаторов (посредников) воспалительного процесса. Будучи внедренными в клеточную мембрану, эти агенты нарушают сигнальные процессы в клетках и иигибируют активацию воспалительных клеток. Согласно полученным значениям ClogP, оба испытанных соединения обладают низкой липофильностыо, вследствие чего не могут действовать согласно упомянутому механизму. Как было показано в, замещенные фенолы — соединения, действующие как акцепторы свободных радикалов, — способны производить противовоспалительный эффект. Следовательно, противовоспалительная активность изучаемых соединений может также объясняться присутствием фенольных групп. Простагландины играют роль как медиаторов воспалительного процесса, лак и факторов защиты слизистой оболочки. Двумя основными системами ферментов, связанных с синтезом простагландинов, являются простаглапдинсиптазы — циклооксигеназа-1 (cycloo-xygenase-1, СОХ-1) и циклооксигеназа-2 (СОХ-2). Эн­зим СОХ-1 отвечает за сохранность слизистой оболочки желудка , тогда как СОХ-2 является медиатором воспалительного процесса. Полагают, что противовоспалительная активность и гастротоксичность существующих нестероидных противовоспалительных препаратов связана с ингибировапием СОХ-1 и СОХ-2, соответственно. Отсутствие видимой гастротоксичности у исследованных соединений I и II может быть связано с селективным окислением СОХ-2, либо с действием по механизму, не связанному с синтезом простагландинов.

Пути опосредованного развития болевых ощущений и воспаления очень сложны. Ингибирование различных медиаторов, вовлеченных в эти процессы, может приводить к более сильному аналыетическому или противовоспалительному эффекту. Синтезированные бепзокеазины в исследованных дозах показали существенную аналыетическую активность. Ацетаминофен продемонстрировал менее продолжительное действие в тесте Рэндалла - Селитто, что, по-видимому, объясняется метаболической нестабильностью соединения. В то же время ацетаминофен был почти неактивен в тесте д'Амура -- Смита, тогда как соединения I и II ингибировали болевую чувствительность.

Интересно отметить, что изменение положения гидроксилыюй группы (6 или 7) почти не влияет на аналыетическую и противовоспалительную актив­ность синтезированных соединений, несмотря на то, что соединение I показало небольшое преимущество над соединением II в тесте Рэндалла - Селитго. Этот вывод аналогичен результатам исследования Нельсона , в котором 3- и 4-гидроксиацетанилиды оказались сравнимыми по анальгетической активности.

Гастротоксичность НПВП может быть связана с прямым раздражающим действием этих кислотных соединений на слизистую оболочку желудка. Отсутствие видимой гастротоксичности у исследованных соединений I и II может быть отчасти связано с их некис­лотной природой. Поскольку гастропатия, вызванная НПВП, является основной причиной прекращения противовоспалительной терапии, эти соединения представляют собой возможную альтернативу существующим лекарствам. Несмотря на то, что некоторые из НПВП, имеющихся на фармацевтическом рынке, обладают относительно более высокой активностью, отсутствие гастротоксичности у соединений, описан-

ных выше, позволяет вводить их в более высоких дозах при меньшем риске побочных эффектов.

Поскольку синтезированные препараты имеют в своей основе структуру ацетаминофена, другим важным фактором является гепатотокенчность. Хотя в наших экспериментах гепатотокенчность не оценивалась, имеются соответствующие данные. Результаты последнего исследования замещенных производных ацетаминофена показали, что ацетаминофен и его 3-монозамещенпый аналог обладают гепатотоксическими свойствами, в то время как замещение по положениям 3 и 5 приводит к производным, не проявляющим такой активности. Введение электроно-донорных заместителей (R = CH₃, ОСИ,, SCH₃) в эти двузамещеиные производные почти полностью устраняет цитотоксичность (оцениваемую по снижению уровня лактатдегидрогеназы в свежевыделенных гепатоцитах крысы). Кроме того, гепатотоксическая реак­ция полностью блокировалась в результате N-метили-рования ацетаминофена, в го время как двукратное монометилирование значительно повышало гепатотоксичность. На основании этих наблюдений можно заключить, что создание препаратов на основе ацетанилида, не образующих токсичных метаболитов и в то же время достаточно активных, вполне возможно.

Один из возможных классов таких соединений — это 3-замещенные ацетанилиды, обладающие анальгетической и противовоспалительной активностью, по не являющиеся гепатотоксичпыми. Учитывая результаты исследований и принимая во внимание электро-нодонорную природу ОСН₂С11,-мостика в соединени­ях I и П, а также л/е/и«-положение гидроксилыюго заместителя ацетамидной группы в соединении I, можно ожидать, что эти 1,2-циклизонанные варианты заме­щенных 3- и 4-гидроксиацетапилидов не будут прояв­лять гепатотоксичности, по крайней мере но рассмот­ренному выше механизму, характерному для ацетаминофена.[17]