27В. Теоретический материал Методы лабораторной диагностики микозов

Микотическая диагностика проводится с использованием микроскопического, культурального, и иммунологических методов исследования.

Микроскопия является одним из основных методов выявления возбудителя при микозах.

Часто прибегают к микроскопии неокрашенных препаратов. Микроскопия методом раздавленной или висячей капли позволяет выявить структуры грибов в клинических образцах жидкой консистенции. Для визуализации структур возбудителя в фрагментах кожи, ногтях, волосах и других клинических образцах с большим количеством клеток, содержащих кератин, исследуемый материал предварительно обрабатывают 10% КОН. Едкий кали разрушает кератин, оставляя неизменёнными клетками грибов.

В ряде случаев применяют различные методы окраски мазков из патологического материала: по Граму (при грибы представлены грамположительными клетками), по Романовскому-Гимзе, с использованием реактива Шиффа (для выявления полисахаридов клеточных стенок грибов) и т.д.

Проводят также прямую РИФ для выявления в гистологических препаратах антигенов возбудителя.

При выделении культур грибов используют среды с кислым рН, на которых рост бактерий затруднён. Чаще всего используют среду Сабуро (пептонный агар с большим содержанием мальтозы или глюкозы). Для придания питательным средам селективных свойств в них добавляют антибиотики (пенициллин, стрептомицин, гентамицин, левомицетин). Обычно делают парные посевы (при 25°С и 37°С) для выявления возможного диморфизма. Идентификацию возбудителя проводят по морфологическим и биохимическим признакам. Культуральный метод диагностики микозов требует для своего осуществления нескольких недель.

Иммунологические методы при диагностике микозов используют для обнаружения антител или антигенов возбудителя, а также для выявления состояния специфической сенсибилизации.

К результатам серологических реакций при микозах следует относиться осторожно, так как грибы содержат большое количество перекрёстно реагирующих антигенов. Тем не менее обнаружение специфических антител в сыворотке крови или антигенов возбудителя в крови, ликворе и моче позволяет установить диагноз до получения результатов посевов. Чаще используется латекс-агглютинация (выявляет IgM), РСК (выявляет IgG) и ИФА.

Диагностическую ценность ранее очень популярных при диагностике микозов кожно-аллергических проб ограничивает их неспецифичность. Однако их до сих пор применяют, например, для анализа иммунных популяций при эпидемиологических исследованиях.

Для диагностики системных микозов в настоящее время разработан метод определения нуклеиновых кислот. С этой целью из культуры возбудителя экстрагируется РНК и смешивается с молекулами одноцепочечной ДНК, меченой флюоресцеином. В положительном случае происходит гибридизация соответствующей ДНК с РНК патогена и образуется легко обнаруживаемый комплекс.

Общая классификация микозов

Микозы можно классифицировать на четыре основные группы: системные (или глубокие) микозы, субкутанные (или подкожные) микозы, поверхностные микозы (для обозначения этой группы микозов используются также термины: дерматомикозы, дерматофитии), микозы, вызываемые условно-патогенными грибами.

Системные (глубокие) микозы встречаются в определённых географических зонах, в которых многие люди инфицированы данными возбудителями. Однако клинические симптомы заболевания у большинства из них не проявляются или выражены слабо. И лишь у небольшого процента инфицированных заболевание прогрессирует, развиваются его тяжёлые формы, а системные поражения могут даже вызвать летальный исход. Возбудители системных микозов – почвенные грибы, которые могут обитать также на разрушающихся органических остатках.

При субкутанных (подкожных) микозах основные поражения локализуются в подкожной клетчатке. Выделение этих микозов в самостоятельную группу не общепринято.

При поверхностных микозах (дерматомикозах, дерматофитиях) поражаются преимущественно кожа и её придатки – волосы и ногти. Встречаются повсеместно. Именно эта группа грибковых поражения составляет основную массу диагностируемых в Беларуси микозов.

Поверхностные микозы классифицируются, в свою очередь на кератомикозы, эпидермомикозы и трихомикозы.

При кератомикозах поражаются поверхностные отделы рогового слоя эпидермиса без видимой воспалительной реакции со стороны нижележащих слоёв дермы.

При эпидермомикозах поражаются роговой слой эпидермиса, ногти и, как правило, присоединяется аллергическое воспаление в дерме. К эпидермомикозам относятся рубромикоз (руброфития), паховая эпидермофития (или эпидермофития крупных складок), эпидермофития стоп. В литературе встречается термин «микоз стоп», которым объединяют эти три нозологические формы грибковой инфекции.

При трихомикозах поражаются не только эпидермис, дерма и ногти, но и волосы. К трихомикозам относятся трихофития, микроспория и фавус (парша).

И, наконец, к микозам, вызываемым условно-патогенными грибами, относятся аспергиллез, кандидоз, фикомикоз, пневмоцистоз.