74. Зависимость интенсивности люминесценции от конц. Люминесцируемого вещества, температуры, рН, примесей.

Iфл Iфл Iфл

с t,⁰C рН

В области малых концентраций между I_фл. и С действует прямая пропорциональность I = К С. Эта обл. используется для количественного анализа (С=10^-7 - 10^-8 моль/л). С повышением концентрации интен­сивности флуоресценции становится постоянной, а затем резко падает, что вызвано конц-ным гашением.

Чаще всего повышение температуры приводит к снижению интенсив­ности флуоресценции, причина - увеличивается колебательная энергия молекул и возрастает количество безызлучательных переходов, а также температурная диссоциация молекул. Однако в случаях образивания модификаций молекул, способных флуоресцировать более интенсивно, с повышением Т интенсивность флуоресц. также будет расти.

Интенсииность флуоресценции зависит от рН раствора. Общих закономерностей для этой зависимости нет. Для каждого в-ва по-разному.

Интенсивность флуоресценции зависит от присутствия в растворе посторонних веществ. Некот. В-ва способны гасить флуор-цию. Некото­рые вызывать усиление флуор-­ции. Поэтому при проведении флуоресцентных иссле­дований, особенно количественных, необходимо следить за чистотой исследуемого вещества.

75.Прямой и косвенный флуоресцентный анализ. Аналит. Хар-ки метода.

Флуоресцентный метод может быть использован для прямого и косвенного количественного анализа.

Прямые определения ведут непосредственно по флуоресценции исследуемого образца. Они применяются чаще при анализе органич. веществ. Индентификация органических веществ прямым флуоресцентным методом достаточно затруднительна. Сложность обусловлена тем, что спектры флуоресценции растворов большинства органических веществ малоспецифичны. Они чаще всего представляют собой широкие полосы, прекрывающиеся или даже совпадающие у разных веществ.

Среди неорганических очень мало веществ, способных флуоресцировать самостоятельно (исключение – соединения урана, церин, самария европия), поэтому их определяют косвенно. Эти определе­ния основаны на том, что при взаимодействии неорганического иона с органическим соединением может протекать одна из трек реакций, приводящих к:

– возникновению флуоресценции в присутствии определяемого катиона при использовании нефлуоресцирующего реагента.

– изменению флуоресценции реагента в присутствии анализи­руемого катиона.

– гашению флуоресценции органического реагента в присутствии анализируемого катиона.

Аналит. хар-ки метода.

Чувствительность метода для разл. соед-й доходит до 10^-14моль/л (имунохимический анализ); пределы обнаружения10^-4-10^-11%(для различных определений); имеет сложный характер воздействующих факторов.

76.Аппаратура и практическое применение люминесцентного анализа. Аппаратура: фосфороскопы, фотометры, флюорометры, люминоскопы. Фосфороскопы, люминоско­пы - простейшие приборы , включающие источник возбуждающего излучения и набор светофильтров. Оценка интенсивности люми­несценции производится визуально, как правило, методом стандартных серий. Фотометры, флюорометры имеют практически те же ос­новные конструктивные узлы, что и все спектральные приборы:- источник света;- монохроматизатор света;- кюветы с исследуемым веществом;- узел определения интенсивности излучения

Схема и принцип действия фотометра люминесцентного.

Принцип действия ос­нован на сравнении интенсивности люминесценции растворов, воз­буждаемой излучением лампы.В оптической сх. есть ветвь возбуждающего излучения и ветвь флуоресцентного излучения - измерительная ветвь. В ветвь возбужд. изл-я входят следующие элементы: ис­точник света; линза 2, с промощью которой расходящийся пучок от источника преобразуется в пучок параллельных лучей. для подбора характеристик возбуж­дающего излучения в параллельном ходе лучей установлены сетчатые ослабители 3, 4 и переменная ирисовая диафрагма 11, регулирующие интенсивность, и избирательные поглотители 5-10, т.е. цветные фильтры, с помощью которых подбирается спектральная характеристика возбуждающего излучения. Параллельный пучок лучей с помощью фокусирующей линзы 12 собирается в центре кювет 17 с исследуемым веществом, которые вводятся в измерительную ветвь поочередно. Каждая кювета имеет свою светоловушку 15. Кроме того, имеется поворотное зеркало 16. Светоловушки 15 и зеркало 16 предназначены для отвода потока возбуждения, прошедшего через кювету, и снижения фоновых помех.

Ветвь флуоресцентного излучения, т. Н. измерительная ветвь, расположена под углом 90° к направлению возбуждающего излуче­ния. Для уменьш. рассеяния света перед кюветой на входе и вы­ходе установл. ограничительные диафрагмы 1З и 14. Изображ-е светящегося объема люминесцирующего в-ва из центра кюветы передается на входную щель 20 монохроматора. Перед вх. ще­лью 20 установлено модулирующее устройство - обтюратор 19 -диск с отверстием, вращающийся с определенной скоростью - непрерывный световой поток люмин-ции пре­образ-ся в прерывистый, что необходимо для получения на выходе из прибора переменного эл. тока. Монохроматор в данном приборе работает по симметричной схеме с двумя сферическими объективами 24 (т.н. схема Черни-Тернера). Этот блок предназначен для выделения из потока флуоресцентного излучения лучей с опреде­ленной длиной волны, на которой проводится измер-е. Поток флуоресцентного излуч-я, пройдя входную щель 20 и фильтры 21, 22, устраняющие наложение спектров разных порядков, попадает на поворотное зеркало 23, направляющее его на объектив -24. Этот объ­ектив направляет полихроматический пучок на диспергирующий эле­мент монохроматора - дифракционную решетку 25. На дифр. реш-ке полихроматическое излуче­ние разлагается на составляющие его монохроматические компонен­ты. Выделение требуемой волны диапазона 400-800 нм производится поворотом дифр. реш-ки, выделенное излучение фокусирующим объективом 24 направл-ся на поворотное зеркало 23 и че­рез выходную щель 26 - на фотоприемник 30. Линза 27, зеркало 28 и объектив 29 предназначены для фокусировки выходящего светового пучка на катоде фотоприемника 30, в качестве которого в приборе ФЛ используется фотоумножитель ФЭУ-79. Измерительным прибором является микроамперметр со шкалой 0-100 мкА.