- •Общий белок сыворотки крови
- •Нормальные значения общего белка сыворотки крови
- •Клиническое значение определения общего белка сыворотки крови
- •Гиперпротеинемия
- •Гипопротеинемия
- •Литература:
- •Методы определения общего белка в сыворотке крови
- •Методы определения общего белка
- •Азотометрические методы
- •Гравиметрические методы
- •«Преципитационные» методы
- •Спектрофотометрические методы
- •Рефрактометрические методы
- •Колориметрические (фотометрические) методы
- •Другие методы определения общего белка сыворотки крови
- •Материал для исследования
- •Ход определения общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции
- •Литература:
- •Мочевина
- •Биосинтез мочевины
- •Весь цикл мочевинообразования можно представить следующим образом:
- •Выведение мочевины
- •Нормальные значения мочевины в крови и моче
- •Литература:
- •Мочевина в крови. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в крови
- •Нормальные значения мочевины в крови
- •Повышение уровня мочевины в крови
- •Снижение уровня мочевины в крови
- •Литература:
- •Мочевина в моче. Клинико-диагностическое значение определения мочевины в моче
- •Нормальные значения уровня мочевины в моче
- •Повышение уровня мочевины в моче
- •Снижение уровня мочевины в моче
- •Литература:
- •Методы определения мочевины
- •Биологический материал, используемый для определения мочевины
- •Литература:
- •Газометрические методы определения мочевины
- •Литература:
- •Фотометрические методы определения мочевины
- •Литература:
- •Ферментативные (уреазные) методы определения мочевины
- •Ферментативные колориметрические методы определения мочевины по конечной точке
- •Уреазные методы определения мочевины с использованием сопряженных ферментативных реакций
- •Потенциометрические методы определения мочевины
- •Методы определения мочевины с использованием технологии «сухой химии»
- •Литература:
Спектрофотометрические методы
Спектрофотометрические методы определения общего белка сыворотки крови основаны на измерении светопоглощения в ультрафиолетовой области.
Растворы белка обладают поглощением при 270–290 и 200–225 нм. Поглощение при 270–290 нм определяется присутствием в молекуле белка ароматических аминокислот — тирозина, триптофана и фенилаланина. Поглощение при 200–225 нм практически в 20 раз выше, чем при 280 нм, и обусловлено главным образом пептидными связями.
Точность и специфичность методов определения белка, основанных на поглощении при 270 –290 нм, невелика, поскольку содержание тирозина и триптофана может колебаться в различных белках сыворотки крови. Кроме того, присутствие в сыворотке свободных аминокислот — тирозина и триптофана, мочевой кислоты и билирубина, поглощающих при 280 нм, вносит определенную погрешность. В связи с этим данный метод не используют для прямого определения содержания общего белка в сыворотке.
Напротив, поглощение в ультрафиолетовой области — 200 – 225 нм обусловлено в основном пептидными связями, в связи с чем величина поглощения различных белков сыворотки различается незначительно. В этом спектральном диапазоне закон Бера соблюдается при концентрации белка в сыворотке до 120 г/л.
Определение общего белка сыворотки крови с помощью прямой фотометрии при 210 нм обеспечивает получение результатов, сравнимых с биуретовым методом и методом Кьельдаля. В то же время данный метод практически не применяется из-за необходимости использования кювет, не поглощающих при 210 нм, и монохроматора, что удорожает метод.
Рефрактометрические методы
Рефрактометрические методы определения общего белка сыворотки основаны на способности растворов белка к преломлению светового потока. При температуре 17,5 °С показатель преломления воды равен 1,3332, при той же температуре показатель преломления сыворотки колеблется в пределах 1,3480–1,3505. В связи с тем, что концентрация электролитов и небелковых органических соединений, влияющих на ее преломляющую способность, невелика и достаточно постоянна в сыворотке здорового человека, величина показателя преломления сыворотки крови зависит в первую очередь от содержания в ней белков. Калибровку прибора проводят сывороткой с известной концентрацией белка. Простота делает рефрактометрию удобным методом для определения содержания общего белка в сыворотке крови, хотя при ряде заболеваний, в частности, при сахарном диабете, хронической почечной недостаточности его использование может приводить к существенной ошибке.
Колориметрические (фотометрические) методы
Колориметрические методы определения общего белка основаны на цветных реакциях белков с хромоген-образующими реактивами или на неспецифическом связывании красителя.
Среди колориметрических методов определения концентрации общего белка сыворотки наиболее распространенным считается биуретовый метод, основанный на так называемой «цветной биуретовой реакции», в ходе которой белки реагируют в щелочной среде с сульфатом меди с образованием соединений, окрашенных в фиолетовый цвет, интенсивность окраски зависит от концентрации общего белка в сыворотке. Биуретовый метод определения общего белка в сыворотке крови был утвержден в качестве унифицированного в 1972 г.
Колориметрические методы определения общего белка сыворотки крови достаточно просты и относительно дешевы. К недостатку метода относится интерферирующее действие некоторых веществ (в том числе лекарств).